盐酸克伦特罗ELISA法检测质量控制策略

张 健张 孟赵京红*

（1 长春市食品化妆品监督所，吉林 长春 130033；2 长春市食品药品检验所，吉林 长春 130012；3 吉林省肿瘤医院，吉林 长春130012）

盐酸克伦特罗ELISA法检测质量控制策略

张 健1张 孟2赵京红3*

（1 长春市食品化妆品监督所，吉林 长春 130033；2 长春市食品药品检验所，吉林 长春 130012；3 吉林省肿瘤医院，吉林 长春130012）

目的探讨ELISA法检测盐酸克伦特罗的质量控制策略。方法通过检测分析大量样品检验过程及结果，总结盐酸克伦特罗ELISA法检测质量控制策略。结果叙述了盐酸克伦特罗ELISA法检测整个过程中需要提高、改善的问题，说明了ELISA法检测质控中需要解决的现实问题及注意事项。结论有效的控制策略及改进措施能提高盐酸克伦特罗检测质量，预防漏检及误检等问题的发生，为人民的食品安全做出贡献。

盐酸克伦特罗；酶联免疫吸附试验；质量控制；策略

盐酸克伦特罗，俗称“瘦肉精”，除作为拟肾上腺素类药物治疗疾病以外，其最重要的作用是加快肌肉生长速度，使动物瘦肉含量相对增加，常被应用于养殖业，将其加入饲料后促进畜禽生长发育。然而，盐酸克伦特罗代谢慢，使用后易残留在畜禽体内，若人食用此类畜禽，会导致积蓄中毒，严重可危机生命。所以，为有效维护人民的健康安全，对该药高效的检测方法必不可少。酶联免疫吸附试验（ELISA）具有检验速度快、成本低、设备简单等优点，已广泛应用于盐酸克伦特罗的检测，但若此法操作过程中出现不当，导致结果不准、重复性降低，将严重破坏检验的准确性[1]。因此，为提高检测质量，严格的控制策略不容忽视。本文就ELISA法检测盐酸克伦特罗的质量控制策略总结如下。

1 提高相关人员职业素质[2]

1.1 管理人员。尽管管理人员不直接参与ELISA法检测试验，但其所具备的管理能力是提高检测质量的必要条件。管理人员要根据相关知识建立系统化的质量控制体系，严格规定各人员职责以及任务要求，不放过任何薄弱环节，高效管理检测过程，提高检测质量。

1.2 样本采集及检测人员。检测需要严谨的工作态度，因此所有人员都要接受全面的岗前培训、效绩考核，用以提高相关职业素质，增强对工作的认真程度。一般来讲，盐酸克伦特罗试验的样品有血清、肝脏、尿液及畜禽饲料等，这要求样品采集人员应具备极高的专业素质，对采集目标具有较强的敏感性，能准确选择样品，独立分类采集样品，操作熟练快速，做到样品不遗漏、无杂质、样品间无污染。而样品检测人员要熟练掌握ELISA法检测的过程，严格按照规程操作，并且能够用专业知识解释检测结果以及解决在实验中出现的各类问题，提高检测准确度。

2 完善样品采集及制备过程[3，4]

2.1 样品采集过程。样品采集室由于畜禽的污染环境质量会相对恶劣，因此要严格控制操作过程，避免样品遭到污染，影响监测结果。同时，要注意天气影响，气温过高时，样品采集后要立即放于低温箱中，保存一般不要超过1周，若超过1周要采取冷冻处理，在使用时在溶解，用以避免变质导致结果出现假阳性，干扰监测质量。

2.2 样品制备过程。尿液在除杂后、离心后可直接用于试验，而体内组织以及饲料等样品要粉碎后，做好全面的预处理，对粉碎程度及溶液含量要严格控制，同时要彻底离心，防止样品中有血凝块、纤维蛋白、血细胞悬浮，影响实验结果。

3 管理ELISA法检测室条件以及操作设备

3.1 实验室条件控制。检测室良好的操作条件是一切质量控制的前提，只有好的实验条件才能保证各项检测顺利进行。首先，室内温度、湿度都能影响检测结果，一般温度要控制20～23 ℃，湿度为70%左右，并保证其变化平衡；其次，定期对实验室内进行消毒，使空气中各元素含量达标，并要注意Cl-含量，其过高会造成ELISA结果出现假阳性，所以不要使用含Cl-的消毒剂；再次，实验室操作台要避免阳光直射，挥发及过高的温度会对结果造成一定影响，同时阳光可影响抗原、抗体活性，降低检测准确率；最后，实验室的水质也要实时监测，去离子水现用现配，确保不含Cl-及其他无关杂质。

3.2 仪器设备管理。一定要确保仪器设备功能良好。ELISA法检测的仪器主要包括移液器、酶标仪、水浴箱、洗板机等，移液器要定期到相关部门检定，在实验室内也要常用蒸馏水称量法校准，出现异常要及时更换或修理；酶标仪要注重光学维护，防止滤光片发霉；严格控制水浴箱温度，定期进行温度校准，指示温度有误差时，可加用温度计；洗板机使用时要进行调试，根据不同要求规定相关参数，并保证管道内无气泡。

4 选择合适的ELISA试剂盒

试剂盒的选择关系到试验的准确性、灵敏度，所以一定要选择优质的ELISA试剂盒。可多次操作后选择稳定性最好的试剂盒进行检测试验，并注意观察试剂盒是否完整，生产批号以及使用期限，注意不要将不同批号产品混用。同时也要保证试剂使用时再取出、取出后立即使用、使用后马上收好，用以减少试剂中酶络合物的失活。一些试剂盒可能出现分装错误，在检测前一定要做好阳性、阴性对照试验，如若出现异常，要立即重检。

5 控制ELISA试验操作过程[5]

ELISA试验操作过程是整个检测质量控制的关键，是提高试验质量的核心。该试验过程一般包括加样、温育、洗涤、显色、结果判定等过程，每一步操作都要注意。

5.1 加样：用加样器加样要将样品加入ELISA板孔下部，并缓慢吸出，缓慢加入，角度垂直，速度均匀，用以预防气泡及飞溅，也不要使加样器接触板孔壁。同时，要注意吸头的及时更换，每次加标品都要用新吸头，使用过的吸头也要放入指定位置丢弃，不要重复使用，污染样品。

5.2 温育：温度对抗原抗体结合速度影响很大，所以一般用水浴箱使受热均匀，同时，使用水浴箱也可避免受热不均导致的边缘效应。将ELISA板底贴于水面，时间要以水浴温度上升到指定温度开始计算。在板孔上方覆盖贴封纸，防止孔内成分挥发及杂质进入。

5.3 洗涤：分离酶标物及抗原抗体复合物需要洗涤，若洗涤不彻底将导致显色不明显，干扰检测结果，所以要严格控制洗涤过程，用以提高检测质量。首先，要保证不同洗涤剂分开使用，避免混合乱用；其次，洗涤剂用量要适宜，不要不够，也不要过多，用量少会造成洗涤不完全，用量大会使液体飞溅，导致板间相互干扰；再次，洗板机洗涤要保证吸干孔内液体，若有残留要人工再清洗；最后，每次洗涤结束后，要用高效的吸水纸将残留液吸干。

5.4 显色：在室温下，试剂盒的显色时间一般在15～30 min，为使催化反应彻底，要将温度控制在20～25 ℃、反应20 min以上，同时，要从第1个加显色液的孔开始计算反应时间。值得注意的是，在显色前可事先检测样品溶液的有效性，若异常，表示样品变质，无法检测，要重新实验。显色液滴加完后，加终止液使反应结束，其滴加速度要同于显色液滴加速度。

5.5 结果判定：终止反应后要放置一定时间再判定，稳定检测结果。同时，必须要将板用吸水纸吸干后再读数，用以保护光片，提高读数准确性。在使用酶标仪时要注意滤光片位置及波长的调节，用双波长测定，并排除容器损害干扰。然后，根据试剂盒上的阳性判定标准对结果进行辨别。

6 加强检测后的质量控制

检测结果要与标准进行严格比对，技术人员要根据相关经验排除假阳性的结果，提高最终检测结论的准确性，并保证实验结果的重复性及重现性。

7 结 语

ELISA检测因其敏感性高、检测成本低、抗原制备容易及结果判定客观被广泛应用于生命科学各领域。盐酸克伦特罗的ELISA检测[6]是将含有针对于盐酸克伦特罗抗体的双抗体种植在微孔板上，通过温育、洗涤抗体，加入酶标抗原及样品抗原，使抗原与抗体发生特异性结合，进而判断有无受检样品存在的免疫检测方法。其结果判定方法为：与酶标抗原结合的抗原抗体复合物处理后显色，而与盐酸克伦特罗结合成的抗原抗体复合物处理后不显色，且显色深浅与盐酸克伦特罗含量负相关，再将颜色与标准孔颜色比较用于定性，分光光度计测量吸光度用于定量。然而，在实际操作中，ELISA法检测若操作不当，易出现各种干扰现象，严重影响检测质量，造成结果错误判定，因此，为提高检测质量，有效的盐酸克伦特罗ELISA法检测质量控制策略必不可失。本文介绍的质量控制策略是结合操作及文献总结出的实际经验，这表明，ELISA法检测过程中要注重全局，不放过任何细节，既要求人员工作认真、专业，也要保证各类条件、设备符合标准，以加强盐酸克伦特罗的实验室检验水平，为社会食品安全做出贡献。

[1] 吴正铜.酶联免疫吸附试验在实验室应用中的质量控制[J].检验医学与临床2013,10(9):1147.

[2] 范海丽.酶联免疫吸附试验检测过程中的质量控制[J].解放军医药杂志2011,23(5):51.

[3] 余红梅,石慧花.“瘦肉精”ELISA检测过程中常见问题的分析[J].上海畜牧兽医通讯,2012,3(3):84.

[4]谢渊.酶联免疫诊断试剂的质量控制[J].中国保健营养,2012,22(6):1562.

[5] 周艳萍.酶联免疫吸附试验检测法的质量控制[J].检验医学与临床 2009,6(14):1206.

[6] 李华玮,李巧枝,卫丽,等.ELISA 检测盐酸克伦特罗残留时的问题及控制对策[J].检验医学与临床,2009,7(6):144.

R9

A

1671-8194（2014）34-0379-02

*通讯作者