TFF1和TFF3在结直肠癌中的表达与临床病理特点及预后的关系

艾克热木·玉苏甫 王海江 帕尔哈提·沙依木 方 城 赵占伟 张国庆

TFF1和TFF3在结直肠癌中的表达与临床病理特点及预后的关系

艾克热木·玉苏甫①王海江①帕尔哈提·沙依木①方 城②赵占伟②张国庆①

目的：检测三叶因子1（trefoil factor，TFF1）和三叶因子3（TFF3）在结直肠癌组织、癌旁组织及转移淋巴结中的表达，评价其与肿瘤发生、转移和预后的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测65例结直肠癌、30例癌旁组织、25例转移淋巴结中TFF1和TFF3的表达，分析二者表达的差异及其与临床病理特征和预后的关系。结果：TFF1在癌旁组织、癌组织和转移淋巴结中表达逐渐增高（26.7%，70.8%，96%，两两比较均P＜0.05）。癌组织和转移淋巴结与癌旁组织比较，TFF3表达率均有降低（100%vs. 84.6%或80%，均P＜0.05），癌组织和转移淋巴结之间差异无统计学意义（P＞0.05）。TFF1在结直肠癌中的表达仅与肿瘤分化程度相关（P＜0.05）；TFF3表达与淋巴结转移及TNM分期有关（均P＜0.05）。TFF1在结直肠癌中的表达与TFF3呈负相关（P=0.014，r=-0.291）。TFF1表达水平与总生存率无相关性（P=0.639），而TFF3表达水平与总生存率有关（P=0.045）。Cox比例风险模型单因素分析显示，浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期等为影响预后的相关因素。多因素分析显示，淋巴结转移、远处转移、TNM分期和TFF3为预后的影响因素。结论：TFF1和TFF3表达率与结直肠癌的发生、转移和预后密切相关。两者可能在结直肠癌的侵袭、转移中存在共同作用，相互影响。

TFF1 TFF3 结直肠癌 临床病理特点 预后

三叶因子（trefoil factor，TFF）家族具有一个或多个三叶因子结构域的多肽小分子，主要由消化道黏液分泌上皮细胞合成和分泌，在黏膜损伤修复过程中起主要作用。TFF有3个成员∶TFF1（乳腺癌相关肽，pS2）、TFF2（解痉多肽，SP）和TFF3（肠三叶因子，ITF）。TFF在整个消化系统中均有表达分布，胃肠道是TFF的主要合成场所。TFF1和TFF2在胃部［1-2］，TFF3则主要在大肠和小肠呈高表达［3-4］。近年来TFF家族与肿瘤发生、侵袭及临床预后等方面的相关性广受关注。TFF1和TFF3表达与乳腺癌、胃癌等发病，进展和预后之间的关系研究较多［5-6］。但他们与结直肠癌发生、发展及临床预后等之间相关性的报道较少。

1.预期因素。在“互联网＋”背景下，信息的大范围流动、信息大程度共享和信息及其便捷利用，使信息成为一种新资源，从根本上改变传统农业生产方式，实现农业消费一体化。因此“互联网＋”背景下，大豆的价格的预期也会在一定程度上有改变。如果消费者预测他所需的大豆的价格会上涨，他可能会多买些大豆供以后消费，使大豆的短期需求增加。因为在“互联网＋”这个背景下，消费者有更准确的信息，所以消费者可以更准确地利用大数据或互联网上的信息来预测大豆价格的变化，使大豆的需求量更大。

1 材料与方法

1.1 材料

标本来源于2007年1月至12月间在第四军医大学附属西京消化病医院病理科存档的组织蜡块。选取65例结直肠癌组织，30例癌旁组织和25例相应转移淋巴结蜡块，切片后进行免疫组织化学染色。所有患者经手术治疗，术前未接受放化疗，且均有完整临床资料和随访记录。其中男43例，女22例，年龄24～86岁，中位年龄56岁，病期中Ⅰ期13例（20.0%），Ⅱ期26例（40.0%），Ⅲ期21例（32.3%），Ⅳ期5例（7.7%）。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学（SP）法 兔抗人TFF1和TFF3单克隆抗体（abcam-epitomics，USA）（工作浓度为1：100和1：200）购自陕西昕泰生物技术有限公司；SP9000免疫组织化学试剂盒，PBS缓冲液，DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。切片染色前根据要求行柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复，余具体操作过程均按试剂盒说明书完成。以PBS缓冲液代替阴性对照中的一抗。

1.2.2 结果判断标准 以胞质内出现淡黄色至棕黄色染色视为阳性细胞，根据细胞染色强度和染色细胞所占面积之乘积来判断（十三点评分法）［7］。染色强度积分∶无染色为0分，弱染色为1分，中等染色为2分，强染色为3分；染色面积积分为∶阳性范围≤10%为1分，10%～50%为2分，50%～80%为3分，80%以上为4分。若两者积分之乘积＞4分则为高表达，≤4分则为低表达。免疫组织化学评分由2名有经验的病理科医师采取双盲方式进行，有争议的病例，两者协商评判。

1.3 统计学分析

应用SPSS 17.0统计学软件分析数据，分类资料统计分析采用χ2检验、Fisher确切概率法或Kruskal wallis H检验，相关分析用Spearman（双向）秩相关检验。Kaplan-meier法绘制生存率曲线，曲线的比较采用Log-rank检验，预后影响因素分析用Cox比例风险模型，以P＜0.05为差异有统计学意义。

7 He H.How to correctly semi-quantitative score the immunohistochemical results[J].World Health Digest,2008,5(7):162-163.[何 华.如何正确地对免疫组化结果进行半定量评分[J].中外健康文摘.2008, 5(7):162-163.]

2 结果

2.1 TFF1和TFF3在结直肠癌，癌旁及转移淋巴结中的表达。

TFF1和TFF3主要表达在细胞质，胞膜亦有部分表达（图1，2）。TFF1在癌旁组织、癌组织和转移淋巴结中逐渐呈加强趋势，各组间差异有统计学意义（26.7%、70.8%及96.0%，P＜0.05）。TFF3在癌旁组织中表达率达100%，呈光滑、类圆形颗粒状且在黏液分泌细胞如杯状细胞里表达较强。癌组织及转移淋巴结中表达降低。癌组织和转移淋巴结与癌旁组织比较，差异均有统计学意义（100%vs.84.6%或84.0%，均P＜0.05），但癌组织和转移淋巴结之间无显著差异（表1）。

2.2 TFF1和TFF3表达与结直肠癌临床病理特点的关系

根据东汤地热田招1、招3、招4、招5、招6、招10、招11地热井测温数据及断裂构造分布情况得出东汤地热田平面地温场分布图(图7)及剖面图(图8)。从图中可以看出东汤地热田中心位于多组断裂构造交会复合部位，这与前面的论述相一致。地热田整体呈NW-SE向分布，地热田南东部位温度明显高于北西部位温度，从温度分布可以推断热储从南东向北西由深到浅分布(图8)。

Fig. 6(a) displays the colour of dye solution after 0, 40 and 90 min time of artificial visible light exposure. Fig. 6(b)represents the UV–visible absorption spectra indicating the degradation of MB in the presence of visible-light irradiation for different durations.

TFF3主要是由肠道杯状细胞分泌的，特异分布于肠黏膜表面的多肽物质，具有很强的细胞保护作用，可促进肠上皮细胞增殖，减轻多种损伤因子介导的肠黏膜损害，因而在肠道自我保护机制中占据重要地位。Yamachika等［12］研究认为TFF3有抑制细胞黏附，促进癌细胞侵袭，阻断细胞凋亡的作用，其高表达与胃癌预后差相关。本研究发现TFF3在正常组织中表达阳性率达100%，而结直肠癌及转移淋巴结中表达降低（P＜0.05）。TFF3在结直肠癌中表达阳性率84.6%，与于大中等［13］报道接近。Emami等［14］认为TFF3降低细胞附着能力和细胞间黏附能力，促进细胞迁移。其结果可能导致肿瘤细胞侵袭和转移能力增强。本研究显示，TFF3表达水平与淋巴结转移和TNM分期相关（P＜0.05），表达强度越高，淋巴结转移可能性及病期越晚，此结果亦提示TFF3与结直肠癌侵袭、转移中起重要作用。生存分析亦显示，TFF3表达水平与总生存有关（P＜0.05），表达越高，生存率越低，可作为预后判断指标。

3 讨论

TFF1是胃肠道激素的一种，在胃肠道黏膜损伤修复过程中发挥重要作用。近来研究表明在乳腺癌、胰腺癌、肺癌、膀胱癌等许多肿瘤和转移灶中表达，与肿瘤细胞增殖、凋亡、转移和肿瘤血管生成有关，因而被认为是一种癌基因［8］。TFF1在结肠癌和溃疡性结肠炎中都表达，在结肠癌中表达的敏感性为65.5%，特异性为86.3%［9］。Welter等［10］报道TFF1在结直肠癌组织中阳性率高达89%，而正常组织中无表达。本研究显示∶TFF1在结直肠癌组织中的阳性率70.8%，癌旁正常组织有部分呈弱阳性，阳性率达26.7%，此结果与周林静等［11］报道相近。本研究中部分正常组织阳性表达可能与选择癌旁组织相关。有研究表明TFF1表达在正常组织、伴不典型增生的溃疡性结肠炎和结肠癌中进行性增高［9］；本研究中TFF1在正常组织中不表达或低表达，癌组织及转移淋巴结中表达进行性增高，提示TFF1在结直肠癌侵袭及转移中起到一定作用。

在检查过程中还要注意扫查的连续性，同时建议孕妇进行染色体检查，随访胎儿出生后本院或外院心脏超声检查结果或外院引产尸检结果。

TFF1表达水平与临床病理因素关系中，仅分化程度与之相关（P＜0.05），高-中分化癌表达水平较低分化癌高，说明TFF1随着肿瘤恶性程度的增高，表达下调。性别、年龄、组织分类、浸润深度、远处转移之间关系无统计学差异。生存分析显示，TFF1高低表达水平与总生存关系无统计学意义。

本组病例中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者分别占20.0%（13/65）、40.0%（26/65）、32.3%（21/65）和7.7%（5/ 65）。TFF1高、低表达两组间总生存时间差异无统计学意义（P=0.639，图3），而TFF3高地表达两组间总生存率有统计学差异（P=0.045，图4）。Cox比例风险模型单因素分析显示，浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期等为影响预后的相关因素。多因素分析显示，淋巴结转移、远处转移、TNM分期和TFF3为预后的影响因素。

既往研究又表明TFF1在胃癌中表达缺失，被视为胃的抑癌基因，而结直肠癌中表达却上调，提示TFF1在胃癌和结肠癌发生机制中有着不同的作用。Soyoung等［15］研究发现，与正常胃组织比较，胃癌组织中TFF1表达持续降低，而TFF3表达呈进行性增高。与之相反，本资料显示，结直肠癌中TFF1表达与正常组织比较呈上调，而TFF3表达却有所下降，且两者之间为负相关关系，提示两个结构相似基因在结直肠癌侵袭、转移中可能以负反馈形式互相制约、相互调节作用。

9 Heng Hou,Cun Gen Ma,Ping Li,et al.research on ectopic expression of pS2 protein in Colon cancer.Chinese Journal of Internal Medicine,2000,39(5):337-338.[侯 恒,马存根,李 平,等.结肠癌异位表达pS2蛋白的研究[J].中华内科杂志,2000,39(5):337-338.]

本研究表明TFF1和TFF3作为结直肠癌发生过程中的重要分子，参与了结直肠癌发生、发展和转移过程，是癌转移过程中早期分子事件。因此，检测TFF1和TFF3在结直肠癌早期诊断、预后评价等方面有着重要的临床参考价值。

1 Kjellev S,Nexo E,Thim L,et al.Systemically administered trefoil factors are secreted into the gastric lumen and increase the viscosity of gastric contents[J].Br J Pharmacol,2006,149(1):92-99.

2.3 TFF1和TFF3表达与预后之间的关系

2 Kjellev S,Thim L,Pyke C,et al.Cellular localization,binding sites, and pharmacologic effects of TFF3 in experimental colitis in mice [J].Dig Dis Sci,2007,52(4):1050-1059.

3 Regalo G,Wright NA,Machado JC.et al.Trefoil factors:from ulceration to neoplasia[J].Cell Mol Life Sci,2005,62:2910-2915.

胃癌通过静脉(血行)、淋巴径路等途径发生骨转移，当在胃壁内的小静脉或淋巴管发现胃癌细胞时，说明存在胃癌骨转移的危险，特别是腹腔淋巴结或肝肺有转移时，更容易同时发生骨转移，胃癌骨转移的发生在很大程度上决定于胃癌生物特性及患者的免疫功能[4-5]。

按照免疫组织化学十三点评分法将TFF1和TFF3表达水平分为高表达与低表达，并与结直肠癌临床病理特点之间关系研究发现，TFF1表达水平与结直肠癌分化程度之间关系有统计学意义（P= 0.045），高-中分化癌表达水平较低分化癌高。TFF3表达水平与有无淋巴结转移和TNM分期有关（P= 0.012，P=0.017），TFF3表达水平高时淋巴结转移可能性大且病期越晚。两者与性别、年龄、组织分类、浸润深度、远处转移之间关系无统计学差异（表2）。相关性研究显示，TFF1和TFF3表达水平之间关系有统计学意义，并两者呈负相关（r=-0.291，P=0.014，表3）。

4 Madsen J,Nielsen O,Tornøe I,et al.Tissue localization of human trefoil factor 1,2,and 3[J].J Histochem Cytochem,2007,55(5): 505-513.

5 Yio X,Diamond M,Zhang JY,et al.Trefoil factor family-1 mutations enhance gastric cancer cell invasion through distinct signaling pathways[J].Gastroenterology,2006,130(2):1696-1706.

本次研究为小样本研究，还需进行长时间大样本的临床实验，获得更为准确的数据，因此有待于下一步研究探讨。目前已从阴道内分离出16种乳酸杆菌，具有抗肿瘤的乳酸菌还是有限的[10]，如何更好地维持阴道乳酸杆菌数量的稳定性，以及如何更好地发挥其抗肿瘤活性，这些都有待我们进一步去研究。

6 Dhar DK,Wang TC,Tabara H,et al.Expression of trefoil factor family members correlates with patient prognosis and neoangiogenesis[J].Clin Cancer Res,2005,11(18):6472-6478.

对于建筑来说，动工之前的设计应该是它的灵魂所在，设计合理的话，建筑就先拥有了它的灵魂。但如果设计不好，建造房屋时就相当于没有参照物，自然就不能建设出质量良好的建筑。设计的重要性还表现在一些细节上，就比如房屋的间距问题，冬天和夏天的太阳高度角不一样，如果没有精准地计算过，就会导致一些房屋的一楼冬天是晒不到太阳的，这样的设计就会是失败的设计，照着这样的设计建设出来的房屋会被市场淘汰。除了这个还有很多其它问题都反映了设计的重要作用。所以说，建筑房屋对设计的要求还是比较高的，要想做好建筑工作，必须要设计好设计图纸。

8 Tomasetto C,Rio MC.Pleiotropic effects of Trefoil Factor 1 deficiency[J].Cell Mol Life Sci,2005,62(24):2916-2920.

议论争煌煌，侧重于欧阳修散文中的议论这种表达方式。为了达到这种特点，欧阳修议论文大多逻辑严密，持论有据，注重以史为鉴。欧阳修刚直耿介，具有敢为天下先的勇气与品节，一旦遇见不平之事，有要发之论，就不吐不快，丝毫不顾忌打击报复。他又善用议论这种表达方式直陈时事，阐述政治见解，具有鲜明的时代特色和强烈的战斗精神，努力于经世致用中实现自我的生命价值。

10 Welter C,Theisinger B,Rio MC.et al.Expression pattern of breast-cancer-associated protein pS2/BCEI in colorectal tumors[J]. Int.J.Cancer,1994,56(1):52-55.

对照组患者治疗方法:口服胺碘酮,每次服用0.2g,每天服用三次;连续服药15天之后,每天服药两次,每次服药0.2g[2]。

11 Zhou LJ,Zhao CH,Lu HL,et al.TFF1and HSP70 expression and clinical significance in colorectal cancer[J].Practical Oncology Journal,2007,21(2):111-113.[周林静,赵长宏,鲁海玲,等.TFF1和HSP70在结肠癌中的表达和临床意义[J].实用肿瘤学杂志,2007,21 (2):111-113.]

12 Yamachika T,Werther JL,Bodian C,et al.Intestinal trefoil factor:a marker of poor prognosis in gastric carcinoma[J].Clin Cancer Res, 2002,8(5):1092-1099.

13 Yu DZ,Yu YN,Tian ZB,et al.TFF3 and beta-catenin expressions in different colon mucosa tissue[J].World Chinese Journal of Digestology,2011,19(15):1579-1584.[于大中,于亚男,田字彬,等. TFF3和β-catenin在不同大肠黏膜组织中的表达[J].世界华人消化杂志,2011,19(15):1579-1584.]

14 Emami S,Le Floch N,Bruyneel E,et al.Induction of scattering and cellular invasion by trefoil peptides in srcand RhoA-transformed kidney and colonic epithelial cells[J].FASEB J,2001,15(2):351-361.

15 Soyoung Im,Changyoung Yoo,Ji-Han Jung,et al.Reduced Expression of TFF1 and Increased Expression of TFF3 in Gastric Cancer: Correlation with Clinicopathological Parameters and Prognosis[J]. Int J Med Sci,2013,10(2):133-140.

本文在前人研究的基础上，运用语料库研究的手段对美式词汇对英语的渗透现象进行实证性研究是一个创新点。此次研究通过具体的数据来说明语言发展变化中产生的现象是科学的，但同时此次研究也存在着一些不足，例如，对英语国家语料库的语料来源还需进行进一步的考证，要确保所用语料皆来源于以英式英语为母语的国家。另外，通过语料库去研究语言学现象还需要得到进一步的深入与发展，它的研究前景无疑是极其广阔的。

（2013-07-31收稿）

（2013-09-23修回）

（本文编辑∶杨红欣）

TFF1 and TFF3 expressions in colorectal cancer and their relationship with clinicopathological characteristics and prognosis

Aikeremu Yusufu1,Haijiang WANG1,Paerhati Shayimu1,Cheng FANG2,Zhanwei ZHAO2,Guoqing ZHANG1
Correspondence to:Guoqing ZHANG;E-mail:zgqprofessor@sina.co

1Department of Gastrointestinal Surgery,Xinjiang Medical University affiliated Tumor Hospital,Urumqi 830011;2Xijing Diges

tive Disease Hospital,the Fourth Military Medical University,Xi'an,710032,China

Objective:To detect the TFF1 and TFF3 expressions in colorectal cancer tissue,adjacent normal tissue,and lymph node metastases,and to evaluate their relationship with tumor occurrence and metastasis.Methods:The expressions of TFF1 and TFF3 were detected by immunohistochemistry(SP method)in 30 adjacent normal colorectal mucosa specimens,65 colorectal adenocarcinoma specimens,and 25 metastatic lymph node specimens.The differences in the expression of TFF1 and TFF3 in different tissues were compared,and their correlation with the clinicopathological features and survival were analyzed.Results:The expression of TFF1 gradually increased along with the sequence of colorectal cancer tissue,adjacent normal tissue,and lymph node metastases(26.7%,70.8%, and 96%,respectively;P＜0.05 in pairwise comparison).Unlike in normal adjacent tissue,the expressions of TFF1 decreased in colorectal cancer or metastatic lymph node(100%vs.84.6%or 80%,P＜0.05).No statistical significance was observed between colorectal cancer and metastatic lymph node(P＞0.05).Only differentiation related to TFF1 expression was observed(P＜0.05).TFF3 expression was associated with lymph node metastasis and TNM staging(P＜0.05).A negative correlation was found between TFF3 and TFF1 expressions in colorectal cancer(r=-0.291,P=0.014).No association was found between the TFF1 expression levels and overall survival(P= 0.639),whereas the TFF3 expression level was correlated with survival(P=0.045).The Cox proportional hazards model showed that infiltration depth,lymph node metastasis,distant metastasis,and pathological staging were the related factors affecting the prognosis through univariate analysis.The multivariate analysis demonstrated that lymph node metastasis,distant metastasis,pathological staging, and TFF3 were the influencing factors of prognosis.Conclusion:TFF1 and TFF3 expressions are closely related to the incidence,metastasis,and prognosis of colorectal cancer.Both can function together in the invasion and the metastasis of colorectal cancer.

TFF1,TFF3,colorectal cancer,clinical pathological features,prognosis

10.3969/j.issn.1000-8179.20131231

艾克热木·玉苏甫 博士研究生，主治医师。研究方向为消化道肿瘤的诊治与基础研究。

①新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科（乌鲁木齐830011）；②第四军医大学西京消化病医院

张国庆 zgqprofessor@sina.com

E-mail∶akrmyusup@126.cmo