山东省潍坊市尖锐湿疣患儿乳头瘤病毒检测和型别分析

毕曼曼 赵学良

山东省潍坊市尖锐湿疣患儿乳头瘤病毒检测和型别分析

毕曼曼 赵学良

目的检测山东省潍坊市尖锐湿疣患儿中人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及基因亚型。 方法采用基因扩增技术及导流杂交分型技术，对24例患儿疣体的HPV进行检测分型。 结果 24例尖锐湿疣检出23例HPV阳性，阳性率95.8%，20例单一型HPV感染占87.0%，混合感染型3例占13.0%；感染型别依次是 HPV6(9/23)，HPV16(6/23)，HPV11(5/23)，HPV58(3/23)，HPV18(2/23)，HPV53(1/23)。 结论 该地区尖锐湿疣患儿HPV型别以6、16、11、58、18为主，患儿感染HPV型别与生活中密切接触者感染的型别相似。

尖锐湿疣；儿童；人乳头状瘤病毒

儿童尖锐湿疣对儿童的健康造成威胁。与尖锐湿疣相关的人乳头瘤病毒(HPV)主要是低危型HPV6、HPV11型和高危型HPV16、HPV18型，为探讨尖锐湿疣患儿HPV感染情况和基因亚型，我们对山东省潍坊市24例尖锐湿疣患儿皮损HPV亚型进行了检测。

一、对象与方法

1.对象:2010年1月至2014年3月潍坊市人民医院和潍坊医学院附属医院门诊尖锐湿疣患儿24例。所有患儿均有典型临床表现，皮损外观呈菜花状或鸡冠状，醋酸白试验阳性，组织病理确诊。其中男10例，年龄3～10岁，疣体分布于肛门及其周围部位；女14例，年龄3～12岁，10例皮损分布于肛门及其周围，4例皮损分布于大小阴唇和阴道口；1例皮损同时累及肛门和外阴。所有患儿无性侵史，其日常生活主要由父母照顾。24例患儿的双亲中有3例母亲外阴有尖锐湿疣，2例母亲有寻常疣。10例母亲阴道分泌物查到高危HPVDNA(5例 HPV16，3例 HPV58，1 例 HPV53，1例同时感染 HPV16和 HPV6)；5例母亲阴道分泌物查到低危HPVDNA(4例HPV6，1例HPV11)。其余患儿父母的患病情况不详。

2.标本采集:用一次性无菌采样棉签(由广东凯普生物化学有限公司提供)来回擦拭疣体表面至少3次，将带有脱落细胞的采样棉签放入装有细胞保存液的取样管中，将标本置于-20℃冰箱保存。将采样棉签在取样管中充分漂洗后取出，将洗脱液14 000 r/min离心10 min，弃上清液，待用。

3.方法:采用广东凯普生物化学有限公司提供的HPV分型试剂盒(PCR+膜杂交法)，罗氏480ⅡPCR扩增仪和HybriMax医用核酸分子快速杂交仪。基本原理为基因扩增技术及导流杂交原理，通过反向点杂交检测扩增产物与包被有特异性探针膜杂交结果，采用碱性磷酸酶系统性检测，可检测出 21 种 HPV 亚型包括 6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和 CP8304(81)。HPV 基因亚型检测步骤等，均严格按照试剂盒说明书进行操作。HPVDNA最低检出量为350拷贝/亚型(绝对数)，在该最低检出量上灵敏度符合率达到98%以上；阴性参考品符合率100%，分型正确，阳性参考品符合率100%。各型CV值不高于30%。

4.结果判定:检验结果阳性点显示为清晰可见的蓝紫色圆点，根据膜条HPV分型分布图判读阳性点的HPV分型；有≥2个阳性点的判为多重感染。Biotin对照点，反映酶与显色液反应，在检测中应为阳性；IC点即内对照点为PCR、热变性及杂交过程质控点。在检测过程中，以上两对照点阳性，若其他点为阴性，则判为HPV分型检测结果阴性；若有≥1个HPV分型点阳性则判为该型HPV检测阳性。

二、结果

1.24例尖锐湿疣患儿检出23例HPV阳性，阳性率95.8%。共检出6种HPV基因型，包括低危型HPV6、11和高危型 HPV16、18、53、58。

2.23例HPV阳性病例中，20例单一感染，其中HPV6型 7例，HPV11型 4例，HPV16型 4例，HPV-18型 2例，HPV 53型1例，HPV-58型2例，占87.0%。二重感染3例中1例6+16型，1例6+11型，1例16+58型。

3.23例HPV阳性病例中，有低危型HPV感染12例，其中6型7例，11型4例，6+11型混合1例，占52.2%；高危型HPV感染10例，其中16型4例，18型2例，58型2例，53型1例，16+58型混合1例)占43.5%；高低危型6+16型混合感染1例。

4.4例HPV16阳性患儿母亲宫颈分泌物HPV16阳性；7例HPV6阳性患儿母亲宫颈分泌物HPV6阳性；2例HPV58阳性患儿母亲宫颈分泌物HPV58阳性；4例HPV11阳性患儿1例母亲宫颈分泌物HPV11阳性；1例HPV53阳性患儿母亲宫颈分泌物HPV53阳性，另1例HPV6+16型二重感染，其母亲宫颈分泌物6+16型；也就是母亲宫颈分泌物HPV型别与患儿的HPV型别一致。1例HPV阴性患儿母亲有寻常疣。

三、讨论

国内报告引起尖锐湿疣的常见HPV型别为6、11、16、18、58，但有地区，性别和年龄差异，主要为低危HPV6、11型为主约占80%左右[1-2]。有关尖锐湿疣患儿HPV型别的报告较少，国外报告尖锐湿疣患儿HPV型别与成人不同，但结果差异很大。在加拿大一项研究中，35例尖锐湿疣患儿发现HPV主要为2、3、7、57型，而 6和11很少[3]。 Gibson检测22例尖锐湿疣患儿HPV型别以6和11为主[4]。

本文结果显示，24例尖锐湿疣患儿检出23例HPV阳性，阳性率95.8%，与成人相近，单一感染比例为87.0%(20/23)，混合感染比例为13.0%(3/23)。单一感染型别按例数多少排列分别为HPV6(7/20)，HPV16(4/20)，HPV11(4/20)，HPV58(2/20)，HPV18(2/20)，HPV53(1/20)。 感染型别按例数多少排列依次是HPV6(9/23包括1例6+16混合和1例6+11混合)，HPV16(6/23包括1例6+16混合和1例16+58混合)，HPV11(5/23包括1例6+11混合)，HPV58(3/23包括1例16+58混合)，HPV18(2/23)，HPV53(1/20)。高危型HPV的感染率47.8%(11/23)较高，接近于低危型HPV的感染率56.5%(13/23，其中1例高低危型混合)。与成人尖锐湿疣以HPV6、11型为主有所不同[1-2]，也可能与病例数较少有关。但与何志秀等[5]报告的口腔尖锐湿疣患儿HPV型别以高危型16，18为主接近。分析原因可能是儿童感染HPV是通过间接途径感染，并非性侵害。从结果看出，15例母亲宫颈分泌物HPV型别与患儿HPV型别相一致，而母亲感染高危型HPV比率高达66.7%(10/15)，母亲作为患儿的密切接触者最易传染给患儿，与有关报道一致[3，6-7]。父母是儿童密切接触者，在照顾患儿生活时应养成良好的卫生习惯，注意个人卫生习惯，HPV感染者尽量避免与儿童接触，以预防患儿HPV感染。

[1]薛耀华，江汉宁，郑和平.广州地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒检测与基因分型[J].中华医院感染学杂志，2013，23(5)：978-980.

[2]杨云，王新正，李日艳，等.尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒的亚型分布比较[J].中国卫生检验杂志，2013，23(1)：208-209.

[3]Ornstein A，Hatchette T.Human papillomavirus and anogenital warts in children[J].CMAJ，2012，184(3)：321.

[4]Gibson PE，Gardner SD，Best SJ.Human papillomavirus types in anogenital warts of children[J].J Med Virol，1990，30(2)：5-142.

[5]何志秀，刘来奎，陈艳.人乳头瘤病毒DNA型别及载量与尖锐湿疣复发的相关性研究[J].华西口腔医学杂志，2002，20(1)：27-29.

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2014-01-15)

(本文编辑:吴晓初)

Detection and genotyping of human papilloma virus in children with condyloma acuminatum in Weifang city，Shandong province

Bi Manman*，Zhao Xueliang.*Weifang Medical University，Weifang 261053，Shandong，China

Zhao Xueliang，Email：zhxl5801@163.com

ObjectiveTo detect human papilloma virus(HPV)and to determine its genotype in children with condyloma acuminatum(CA)in Weifang city，Shandong province.MethodsSwab specimens were collected from the surface of lesions of 24 children with CA.PCR/flow-through hybridization assay was performed to detect HPV and determine its genotypes in these specimens.ResultsAmong the 24 specimens，95.8%(23/24)were positive for HPV.Of the HPV-positive specimens，87.0%(20/23)harbored single type of HPV，and 13.0%(3/23)multiple types of HPV.The most common genotype was HPV6(9/23)，followed by HPV16(6/23)，HPV11(5/23)，HPV58(3/23)，HPV18(2/23)，and HPV53(1/23).Conclusions HPV 6，16，11，58 and 18 prevail in children patients with CA in Weifang city，Shandong province.Additionally，the HPV genotypes in children patients are similar to those in their close contacts.

Condylomata acuminata；Child；Human papillomavirus

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.09.015

261053山东，潍坊医学院(毕曼曼)；潍坊市人民医院(赵学良)

赵学良，Email:zhxl5801@163.com