HPLC 法测定复方西羚解毒丸中的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮

魏谭军， 王 毅， 陈晓东

(1. 达州市中西医结合医院，四川 达州635000;2. 江西中医药大学药学院，江西 南昌330004)

复方西羚解毒丸处方来源于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册，由淡竹叶、荆芥穗、牛蒡子(炒)、连翘、金银花、桔梗、甘草、薄荷、淡豆豉、羚羊角、水牛角浓缩粉、冰片这十二味药物组成［1］。原部颁标准未对方中的任何药物进行定性鉴别或定量测定，不能有效地保证产品的质量和疗效，本实验采用高效液相梯度洗脱法对淡竹叶中的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和荆芥穗中的胡薄荷酮进行定量测定方法研究，为完善该制剂质量标准提供依据。

1 试药与仪器

Agilent 1200 高效液相色谱仪;G1322A 脱气机、G1329A 自动进样器、G1311A 四元泵、Chemstation 色谱工作站;G1315B 可变波长检测器;牡荆苷对照品(111687-200602，纯度100.0%，置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h 以上使用)、荭草苷对照品(111777-201302，纯度97.9%，置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h 以上使用)、胡薄荷酮对照品(111706-201205，纯度99.8%)均购于中国食品药品检定研究院;异荭草苷对照品(4261-42-1，纯度98.0%)购于成都行标生物技术有限公司;复方西羚解毒丸(6 g/丸，批号分别为131017、131019、131021)购于山东健民药业有限公司;冰醋酸(分析纯，广州化学试剂二厂);甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 依利特Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);体积流量1.2 mL/min;以甲醇(A)-0.1%冰醋酸溶液(B)为流动相［2］，梯度洗脱 (0 ～9 min，60.0% A;9 ～29 min，60.0%→75.0%A;29 ～48 min，75.0%A);检测波长340 nm［3-5］(0 ～29 min)、252 nm［6-12］(29 ～48 min)。此系统条件下所测组分与其他组分分离效果良好，理论塔板数按牡荆苷计不得低于3 000，分离度均大于2。

2.2 样品制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 取荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮对照品各适量，精密称定，加70%甲醇制成混合对照品溶液(荭草苷为0.032 8 mg/mL，异荭草苷为0.026 2 mg/mL，牡荆苷为0.020 6 mg/mL，胡薄荷酮为0.037 0 mg/mL)。

2.2.2 供试品溶液的配制 取本品适量，剪碎，取约10.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(300 W，40 kHz)35 min，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照试验 按复方西羚解毒丸处方比例称取除淡竹叶和荆芥穗的其余药味各一份，按复方西羚解毒丸的生产工艺分别制成淡竹叶空白样品和荆芥穗空白样品，按照上述供试品溶液的配制方法制成淡竹叶空白溶液和荆芥穗空白溶液。分别精密吸取10 μL 的供试品溶液、混合对照品溶液、淡竹叶空白溶液和荆芥穗空白溶液，按上述色谱条件测定，结果在与荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮对照品色谱图相应的保留时间处，供试品溶液色谱图中有吸收峰，而阴性对照色谱图中未显吸收峰，色谱图见图1。

图1 荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮的液相色谱图Fig.1 Chromatograms of orientin，luteolin-6-c-glucoside，vitexin and pulegone

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分别置于10 mL 量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取稀释后的上述溶液和混合对照品溶液各20 μL，注入色谱仪中，按“2.1”项下所述色谱条件进行测定，以峰面积Y 与进样量X，得回归方程，荭草苷为Y=2.249 1 ×106X+768.3，r=0.999 6;异荭草苷、牡荆苷为Y = 2.457 4 × 106X - 698.9，r =0.999 7;胡薄荷酮为Y =1.835 2 ×106X +301.5，r=0.999 2。荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮分别在0.032 8 ～0.656 0 μg、0.026 2 ～0.524 0 μg、0.020 6 ～0.412 0 μg、0.037 0 ～0.740 0 μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。

2.3.2 精密度试验 取“2.2.1”项下的混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6 次，测定，记录荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮的峰面积，RSD 分别为0.8% (荭草苷)、0.7%(异荭草苷)、0.9% (牡荆苷)和0.4% (胡薄荷酮)。结果表明，仪器具有良好精密度。

2.3.3 重复性试验 称取同一批样品6 份，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备6 份供试品溶液，依法进样测定，计算，求得各组分RSD分别为0.7% (荭草苷)、0.5% (异荭草苷)、0.9% (牡荆苷)和0.6% (胡薄荷酮)。结果表明，本法测定重复性良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8、12、24 h 后，每次进样10 μL，测定其峰面积值，求得各组分RSD 分别为0.7% (荭草苷)、0.8% (异荭草苷)、0.9%(牡荆苷)和0.7% (胡薄荷酮)。结果表明，供试品溶液24 h 内基本稳定。

2.3.5 加样回收率试验 取已知含有量的同一批复方西羚解毒丸(批号131017;荭草苷为0.163 mg/g，异荭草苷为 0.132 mg/g，牡荆苷为0.104 mg/g，胡薄荷酮为0.185 mg/g)适量，剪碎，取约5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入混合对照品溶液25 mL、70%甲醇25 mL，按“2.2.2”项下供试品溶液的配制方法制备加样供试品试液。按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算各组分回收率，结果见表1。

表1 荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮回收率Tab.1 Results of recovery tests for orientin，luteolin-6-cglucoside，vitexin and pulegone

2.4 样品测定 取3 个批号的样品，按“2.2.2”项下供试品制备方法，按“2.1”项下色谱条件测定本品中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮量，结果见表2。

表2 样品测定结果(±s，n=3)Tab.2 Results of content determination of the samples (±s，n=3)

表2 样品测定结果(±s，n=3)Tab.2 Results of content determination of the samples (±s，n=3)

批 号 荭草苷/(mg/丸) 异荭草苷/(mg/丸) 牡荆苷/(mg/丸) 胡薄荷酮/(mg/丸)1.11 ±0.01 131019 0.926 ±0.008 0.815 ±0.008 0.656 ±0.005 1.28 ±0.01 131021 0.950 ±0.004 0.834 ±0.007 0.662 ±0.007 131017 0.978 ±0.007 0.792 ±0.005 0.624 ±0.004 1.35 ±0.01

3 讨论

3.1 供试品溶液提取方法的选择 曾考察了超声(300 W，40 kHz)提取20 min、35 min、50 min 和加热回流2 h 四种制备方法，结果超声提取20 min所得样品中成分含有量较低，超声提取35 min、50 min和加热回流2 h 所得样品中成分含有量基本一致，考虑到检验过程的简便性和快捷性，选用超声提取35 min 作为供试品溶液制备的最佳提取时间。

3.2 检测波长的选择 取一定质量浓度的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮对照品溶液置紫外分光光度计下扫描，结果荭草苷、异荭草苷和牡荆苷在340 nm 有最大吸收，胡薄荷酮在252 nm 有最大吸收，为兼顾4 种成分在同一色谱图上均有最大吸收，因此选用波长切换法进行检测。

［1］ 国家药典委员会. 国家药品标准:中药成方制剂第十四册［S］. 北京:人民卫生出版社，1998:118.

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［4］ 薛月芹，袁 珂，楼炉焕. 淡竹叶中荭草苷的微波萃取-HPLC 法测定［J］. 中草药，2008，39(11):1665-1667.

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