Ki-67在甘肃回族患者原发肝细胞性肝癌中的表达及临床意义

赵 斌 罗长江 焦作义 石代秀

1.兰州大学第二医院普外科，甘肃兰州 730000；2.兰州大学第二医院泌尿外科，甘肃兰州 730000

原发性肝细胞肝癌（Primary Hepatocellular Carcinoma，PHC）是世界上常见的恶性肿瘤，它具有生长速度快，恶性程度高等特点，发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位,死亡率位居第3位[1]。据研究[2]表明，近15年来甘肃地区肝癌死亡率明显上升。ki-67蛋白，它是一种抗核增殖细胞核蛋白单克隆抗体，也是测定细胞群增长分数的极好指标[3]。国内有报道ki-67蛋白在汉族人群PHC患者中的表达阳性率58.8%[4]，因此，该研究2002—2012年间检测了ki-67蛋白在甘肃回族PHC患者的表达情况及特点，探讨回族与汉族PHC患者之间的ki-67蛋白表达的差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析在兰州大学第二医院手术切除的回族、汉族PHC患者的石蜡标本各100例，复习其HE 切片，证实其可用。分别选取癌组织及癌旁组织的石蜡标本，石蜡标本由病理科提供，所有患者临床资料完整。

1.2 临床资料

回族100例患者，其中男62例，女38例，平均年龄（50.13±8.32）岁。肿瘤病理分化程度，高分化32例，中分化37例，低分化31例；发病因素：乙型肝炎68例，丙型肝炎21例，其他11例。汉族100例患者，其中男性59例，女性41例，平均年龄（50.33±8.41）岁。肿瘤病理分化程度，高分化31例，中分化36例，低分化33例；发病因素：乙型肝炎65例，丙型肝炎23例，其他12例。

1.3 实验试剂

鼠抗人ki-67 单克隆抗体浓缩型，SP 试剂盒及DAB 显色试剂盒。

1.4 实验方法

采用免疫组化SP 法，将石蜡标本作4 μm 厚连续切片，放于经APES 试剂防脱片处理的载玻片上。对染色切片在高压锅中进行抗原热修复，持续2 min，PBS 冲洗5 min×3次。滴加一抗鼠抗人ki-67 单克隆抗体（1∶50 稀释），PBS 再次冲洗5 min×3次。滴加二抗及辣根酶标记链霉卵白素工作液，PBS 冲洗5 min×3次。用DAB 工作液充分显色,苏木素溶液复染，医用酒精脱水，二甲苯透明后封片。已知阳性片作阳性对照,PBS 替代一抗作阴性对照。

1.5 结果判定

ki-67蛋白表达位于细胞核，阳性细胞的细胞核染色为棕黄色。在高倍镜（×400）下随机选取5个视野，每个视野最少计数200个肿瘤细胞，共计最少1 000个肿瘤细胞，计算其阳性细胞总数数即为ki-67 标记指数，ki-67 指数>10 记为阳性表达，<10记为阴性表达。

1.6 统计方法

所有数据采用SPSS17.0 统计软件分析，计量资料以（±s）表示，采用t 检验，率的比较应用χ2检验。

2 结果

2.1 ki-67 免疫组化结果

ki-67蛋白表达于回族、汉族PHC患者肝癌细胞的细胞核（见图1、图2、图3）。

图1 ki-67蛋白在回族肝癌组织中的阳性表达(Sp×200)

图2 ki-67蛋白在汉族肝癌组织中的阳性表达(Sp×200)

2.2 ki-67表达在回族PHC患者肝癌组织、癌旁组织之间的差异

回族患者肝癌组织ki-67 指数为（246.9±101.3），癌旁组织ki-67 指数为（17.3±10.8）,t值22.21,ki-67蛋白在回族PHC患者肝癌组织表达明显高于癌旁组织（P<0.05）。

图3 ki-67蛋白在回族患者肝癌癌旁组织中的阴性表达(Sp×200)

2.3 ki-67表达在回族、汉族PHC患者之间的差异

回族患者ki-67 指数为（246.9±101.3），汉族患者ki-67 指数为 （198.3±103.7），t值31.07,ki-67蛋白在回族PHC患者表达明显高于汉族患者（P<0.05）。

3 讨论

ki-67蛋白，又称细胞增殖相关蛋白，它存在于细胞周期中的G1、G2、S期及M期，G0期不表达，是评价肿瘤增殖的指标之一。目前，国内研究[5-6]发现，ki-67 作为一种肿瘤增殖因子，它的表达与多种恶性肿瘤有关，如胃癌、直肠癌、乳癌等，国外研究[7]表明ki-67表达能可靠而迅速地反映恶性肿瘤增殖率，与多种恶性肿瘤的发展、转移、预后有关。

回族人群在我国分布较广，主要在甘肃、宁夏、青海、陕西等几个省市，甘肃省是回族人群聚居区之一，研究回族患者原发性肝细胞癌的发病因素，有着重要的临床意义。该组资料显示，汉族患者ki67 指数（198.3±103.7），ki67 在正常肝组织、癌旁组织中均＜10，在汉族人群中呈现出高表达状态，这与国内报道一致。该组资料中回族患者ki67 指数（246.9±101.3），明显高于癌旁组织（P<0.05）,说明ki67蛋白在回族患者肝细胞性肝癌中也呈现出高表达状态。同时，ki67表达在回族、汉族患者之间存在差异，回族患者ki67 指数明显高于汉族患者（P<0.05）。ki67 在回族患者中的高表达，可能与回族特殊的生活、饮食习惯有关，甘肃处于西北内陆省份，独特的地理环境及干旱的气候，也可能是ki67 在回族患者高表达的因素之一，值得更进一步分子生物学方面的研究。

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[2]刘玉琴,张小栋,严俊,等.甘肃恶性肿瘤死亡率15年变化趋势及近期预测分析[J].中华肿瘤防治杂志，2009，16（14）：1045-1050.

[3]Shcolzne T,Gerdes J.The ki-67 Protein:from the known and the unknwon[J].CellPhysiol，2000，182(3):311-312.

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[7]liu M，lawson G,Delos M，et al.PerdiCtive value of the fraction of cancer cells immunolabeled for Proliferating cell nuclear antigen or ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymPh node metastasis:comParison with clinical and radiologic examinations [J].Head Neck，2003，25(4):280-281.