结核酶联免疫斑点试验、结核分枝杆菌DNA测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的比较研究

唐硕润 梁 珍

湖南省结核病医院，长沙 410000

结核病（tuberculosis，TB）被列为国内重大传染病之一，是目前传染病中的头号杀手，是严重危害人类健康的呼吸道传染病，同时也是单因素致死率最高的传染性疾病[1-2]。近年来，随着人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染、艾滋病的流行、移民增加、人口流动性增大以及结核菌耐药性的加重，TB的发病率有上升趋势。中国是TB高负担国家之一，2010年第五次全国结核病流行病学调查显示，活动性TB患者459/10万，菌阳患者66/10万，提示TB的诊治仍然是国家TB控制策略中的重要措施。目前临床诊断TB的金标准只有结核菌培养，但其缺乏敏感性，易漏诊。本研究选取 2010年 5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，采用结核酶联免疫斑点试验（T－SPOT．TB）、结核分枝杆菌 DNA（TB－DNA）测定和痰涂片方法分别检测，探讨其诊断肺结核的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，其中确诊肺结核的患者95例，男60例，女35例，年龄 25～70 岁，平均 （50．17±11．41）岁。

1.2 诊断标准

以肺结核诊断标准（WS288－2008）为标准，结核杆菌培养阳性（金标准）或痰检抗酸杆菌阳性；肺外结核以症状、体征、涂片抗酸杆菌和结核分支杆菌培养阳性为标准[3]。

1.3 方法

1.3.1 T-SPOT.TB试验 采集患者外周血，应用上海复兴长征医学科学有限公司提供的结核感染T细胞斑点诊断试剂盒,按试剂盒说明书判读检测结果。

1.3.2 痰涂片检测 清晨收集脓性痰，进行抗酸杆菌染色，在显微镜下观察染色结果，以每100个视野抗酸杆菌≥3个为阳性。

1.3.3 TB-DNA的检测 采用实时荧光定量PCR技术，应用上海克隆生物高技术有限公司TB-DNA荧光PCR检测试剂盒，操作和诊断标准参照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 15.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用 t检验，计数资料采用 χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA的阳性率分别为87.37%、23.16%、64.12%，敏感性分别为 92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB 最高（P＜0.05）（表 1）。

表1 T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA敏感性的比较

3 讨论

TB是一个全球性公共卫生问题，近年来TB疫情呈明显上升趋势。现在中国成为全球22个TB高负担国家之一，成为仅次于印度的结核大国。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节[4]。早期诊断对于控制TB的快速蔓延十分重要，但初期的检测困难。检测结核的方法很多，包括结核菌素皮肤试验、结核菌培养、结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）实验、痰涂片和TB-DNA测定、T-SPOT.TB检测等，但皮试假阳性和假阴性非常多，检测不准确。结核菌培养则有周期长，假阴、假阳性比例高，难于诊断肺外结核等缺点；PPD实验受免疫力及交叉反应的影响，敏感性和特异性较低[5-6]。本研究采用痰涂片、TB-DNA测定、T-SPOT.TB方法检测肺结核患者，以期为临床检测提供依据。

痰涂片抗酸染色虽然操作简单、诊断快速、费用低廉，但检测结果受技术人员水平的影响，检测率低，且无法对肺外结核及不咯痰的儿童肺结核作出诊断。TB-DNA测定具有快速检测、高准确率等优点，但其标本来源（如浆膜腔液体、病灶分泌物等）难以获取[7-8]；T-SPOT.TB则是利用ELISPOT法检测特异性T细胞来诊断结核的一种新方法，它是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞（PBMC）中存在结核感染特异性 T细胞，这些T细胞在受到致病性结核杆菌特异抗原刺激后分泌IFN-γ而设计的 T细胞免疫斑点试验，其特异性及灵敏度高。

本研究结果显示，T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA敏感性分别为92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB最高，说明T-SPOT.TB检测结核具有非常高的敏感性。目前，随着T-SPOT.TB检测技术的不断发展和完善，其可以减少结核的漏检率，是一种有效的检查TB的手段[9]。

综上所述，T-SPOT.TB较较痰涂片和TB-DNA检测对TB的诊断有高度的敏感性，值得临床推广。

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