SRB和NRB竞争排斥试验研究

2013-12-01刘文涛中石油大庆油田有限责任公司第一采油厂黑龙江大庆163713

长江大学学报(自科版) 2013年16期

刘文涛（中石油大庆油田有限责任公司第一采油厂，黑龙江大庆163713）

在油田污水回注系统和油层缺氧环境中普遍存在硫酸盐还原菌（Sulfate－Reducing Bacteria，SRB），由于SRB还原硫酸盐产生的H2S会导致原油的酸化和管道的腐蚀，所以严格控制SRB的数量以抑制H2S的产生是油田生产中一项十分重要的工作［1－2］。硝酸盐基微生物处理技术基于生物竞争排斥作用机理［3］，即利用添加硝酸盐还原菌（Nitrate／nitrite Reducing Bacteria，NRB）来抑制SRB的生长繁殖，这为SRB数量高的油田进行本源微生物驱油提供了重要条件。为此，笔者进行了SRB和NRB竞争排斥试验研究。

1 试验部分

1.1 试验仪器和材料

1）试验仪器恒温培养箱；UV－2550型分光光度计；PIC－10型离子色谱仪；加热板；高压蒸汽灭菌锅；试管等。

2）试验材料 SRB培养基配方［4］：K2HPO40.5g＋酵母膏1.0g＋Na2SO41.0g＋乳酸钠（60%）6ml＋CaCl20.1g＋Fe （NH4）2（SO4）21.0g （灭菌后加）＋NaCl 5.0g＋L－半胱氨酸0.1g＋NH4Cl 1.0g＋微量元素溶液10ml＋MgSO42.0g＋蒸馏水1000ml；NRB培养基配方：NH4Cl 5.0g＋KH2PO40.3g＋KCl 0.5g＋MgCl2·6H2O 0.4g＋NaNO30.85g＋CaCl2·2H2O 0.1g＋酵母膏0.1g＋0.1125g／ml NaHCO3（灭菌后）＋蒸馏水1000ml。

1.2 试验方法

1）SRB和NRB的检测 ①SRB的检测。将计数培养基分装到试管中，灭菌20min，取1ml菌液接种到9ml计数培养基中，进行梯度稀释后在40℃下培养7d。若培养瓶中出现黑色沉淀即说明SRB产生的H2S与培养液中的Fe2＋生成FeS沉淀，由此检测出SRB。②NRB的检测。用不另外添加碳源（碳源不足）的硝酸盐－肉膏培养基作为硝酸盐还原菌的计数培养基。接种方法与SRB相似，在40℃下培养7d。检测试剂由二苯胺试剂和格里斯氏试剂组成［4］。格里斯氏试剂包括A液和B液。A液：氨基苯磺酸0.5g，溶于150ml 10%稀醋酸中；B液：α－萘胺0.1g溶于150ml 10%稀醋酸中并用20ml蒸馏水稀释。二苯胺试剂：二苯胺0.5g溶于100ml浓硫酸中，用20ml蒸馏水稀释。将培养液在比色瓷盘小窝中吸入少许，再各加入1滴A液和B液，在对照管中同样各加入1滴A液和B液。当培养液中滴入A液和B液后，若溶液变为粉红色、玫瑰红色、橙色、棕色等颜色时，表示亚硝酸盐存在（证明有硝酸盐还原菌的生长）。若无红色出现，说明没有亚硝酸盐的存在，可继续添加1～2滴二苯胺试剂，若呈蓝色反应，则表示培养液中仍有硝酸盐（证明没有硝酸盐还原菌的生长）；若无蓝色出现，表示既无亚硝酸盐也无硝酸盐，说明其中有硝酸盐还原菌生长。

2）试验步骤从大庆油田水中富集SRB和NRB，活化后备用。配制1000mlSRB培养基，灭菌后按250ml每瓶分装（共4瓶），每瓶按5%比例加入已经活化的SRB和NRB培养液，马上接种SRB和NRB计数培养基。其中一瓶加入2.5ml的1mol／L的NaNO2，一瓶加入2.5ml的1mol／L的NaNO3，另一瓶加入2.5ml的1mol／L的NaNO2和NaNO3（比例为1∶1），剩下一瓶作为空白对照，分别测pH值。每瓶分别取出5ml培养液用来检测硫化物含量［4］。每瓶按1%比例加入已经灭菌的原油，充氮气并封口，在40℃下培养。在1、2、3、5、7、15、20d时按以上操作接种SRB和NRB计数培养基、测pH值，同时取5ml培养液用来检测硫化物含量。