云南文县三七中皂苷含量与商品规格划分的相关性研究

傅义萍

(荆州市中医医院药剂科，湖北荆州434000)

陈永刚

(武汉市第三医院药剂科，湖北武汉430060)

三七为五加科植物三七Panax notoginseng的干燥根，主要产于云南、广西等地，别名山漆，金不换，血参，参三七，田三七，田漆，田七等［1］。三七用于治疗疾病的历史悠久，由于发现三七中含有一些与人参相似的化学成分 (人参皂苷等)而引起国内外学者的高度重视，并对三七进行了大量的研究，其中包括化学成分［2-5］、临床应用［6-7］、药理作用［8-10］等。但在商品市场上，三七有明确的规格划分，不同规格的三七其价格差异很大，三七中皂苷成分是其主要有效成分之一，测定各商品规格三七中总皂苷的含量，并对商品规格划分进行相关性分析，为临床合理使用不同规格的三七提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

三七购自云南省文山县，为3年生冬三七，按商品规格分为20、30、40、60、80、120头及无数头7类供试品，经荆州市中医医院彭勇主任药师鉴定为五加科植物三七Panax notoginseng的干燥根。人参皂苷Rg1(批号:1203200322)、Re(批号:12549608)、Rb1(批号:120704200114)和三七皂苷R1(批号:0745-201207)对照品均购自中国药品生物制品检定所，人参皂苷Rb2(批号:2012369102)，Rb3(批号:2012369103)，Rc(批号:20123691044)和Rd(批号:2012369105)均购买于成都曼斯特生物制品有限公司 (纯度＞98%)。乙腈、甲醇均为Merck公司色谱级试剂，实验用水为超纯水。其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

戴安Ultimate 3000型高效液相色谱仪 (包括四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD检测器，Chromeleon工作站);AR224CN电子天平 (d=0.0001 g，奥豪斯仪器 (上海)公司);SK3300LH超声仪 (托利多仪器上海有限公司);IKA RV10 HB10 basic旋转蒸发仪 (德国IKA);HHS-4S水浴锅 (上海宜昌仪器纱筛厂);Memmert model 100-800烘箱 (德国 Memmert公司)。Acclaim Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Dionex)，Syncronis aQ Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Thermo)，高速离心机(sigma公司)。

1.3 样品溶液的制备

1.3.1 供试品溶液的制备 各样品60℃干燥，测定干质量，粉碎，过100目筛，备用。样品60℃干燥至质量恒定后，取约5.0g粉末，精密称定，用水饱和正丁醇100ml冷浸过夜，超声提取50min(2次)，合并提取液，冷却后离心，上清液既为供试品溶液。

1.3.2 样品溶液的制备 精密称取各种皂苷对照品，分别置10ml量瓶，加色谱级甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，置4℃冰箱备用。精密称取8种皂苷对照品即人参皂苷R1，Rg1，Re，Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd，分别为1.88、2.32、2.36、2.92、3.02、2.42、3.38、2.58mg，用色谱级甲醇溶解并定容至10ml，配成8种皂苷混合对照品贮备液。

1.4 总皂苷的测定

精密吸取1.3.1项下供试品溶液4ml，置水浴中蒸发挥干，用乙醇溶解，定容置50ml，然后从中精密吸取1ml置水浴中挥干溶剂，加入浓硫酸2ml，于80℃恒温水浴中加热反应1.5h，立即置于冷水浴中冷却5min，加入乙醇定容到50ml，摇匀，放置30min，以试剂空白为参比，在波长为275nm处测定光密度D。同时以人参皂苷Rg1对照品溶液进行线性关系、精密度、稳定性、重复性和加样回收率等方法学考察试验。

1.5 人参皂苷类成分的测定

Syncronis aQ Cl8(250mm×4.6mm，5μm，Thermo);柱温35℃;流动相为含0.05%甲酸的乙腈 (A)和0.05%甲酸的水溶液 (B);梯度洗脱条件为:0～35min，10% ～35%A，35～65min，35% ～75%;流速1ml/min;检测波长203nm;进样量20μl。并进行线性关系、精密度、稳定性、重复性和加样回收率等方法学考察试验。

2 结 果

2.1 总皂苷含量测定结果

取人参皂苷Rg1对照品约7.5mg，精密称定，加入适量的乙醇，在水浴中使之溶解，放冷后用乙醇定容，即得标准溶液 (0.15mg/ml)。精密量取1、2、3、4、5、6ml，分别置50ml量瓶中，加入浓硫酸2ml，于80℃恒温水浴中反应1.5h，置于冷水浴中冷却5min，加入乙醇定容至50ml，摇匀，放置30min，以试剂空白为参比，在波长为275nm处测定光密度D，各个浓度 (C)相应的光密度D统计处理，得回归方程:D=0.1158C-0.0028，r=0.9997，线性范围0.003～0.018mg/ml。

精密度、稳定性、重复性考察试验结果显示，其RSD均小于3.0%，符合实验要求，加样回收率试验结果见表1。

表1 三七中总皂苷含量测定加样回收率试验结果

在不同商品规格三七中，总皂苷在80头最高，接近10%;无数头最低，只有6.14%，其他规格差异性不大，见表2，其商品规格划分与总皂苷含量无明显规律性。

表2 不同商品规格三七中总皂苷的含量

2.2 人参皂苷类成分的测定结果

三七皂苷HPLC色谱图见图1;标准曲线及线性关系见表3;加样回收率试验结果见表4;三七中人参类皂苷含量测定结果见表5。

图1 三七皂苷HPLC色谱图

表3 标准曲线及线性关系

精密度、稳定性、重复性考察试验结果显示，其RSD均小于3.0%，符合实验要求，加样回收率试验结果见表4。

表4 三七中人参类皂苷含量测定加样回收率试验结果

人参型皂苷类成分含量测定结果见表5，8种成分含量与商品规格亦无明显规律性，8种成分总含量亦无显著规律性，其中60头与80头含量差异不明显。

表5 三七中人参类皂苷含量测定结果

3 结 论

三七具有止血、补血、活血、降低血液粘度、降血脂、降血压、改善脑血循环、镇静、镇痛、提高记忆力，调节免疫、抗炎等功效。主产于云南文山和毗邻的广西右江流域一带，为我国特有的珍贵药材。其传统药用活性部位为根，主要活性成分为三七皂苷，传统中按1市斤含几头分为不同的商品规格，本研究结果提示，价格适中的60头与80头三七中皂苷含量较高，而价格最贵的20头三七皂苷含量一般，但其含量也没有规律性，究其原因可能是因为本实验样品量有限，或者样品生长年限和环境等因素有关，后期实验有必要扩大样本量及其同质性，以确定其商品规格划分的依据。

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