接骨草药茶的炮制及黄酮类化合物含量的比较△

2013-11-29姚元枝安晓刚肖希斌肖芳丽

中国民族医药杂志 2013年9期

熊燕姚元枝，2，3* 安晓刚肖希斌肖芳丽

(1.怀化学院生命科学系，湖南怀化 418008;2.民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室，湖南怀化 418008;3.湘西药用植物与民族植物学湖南省高校重点实验室，湖南怀化 418008)

在祖国医药学的丰富宝库中，药茶是一耀眼的瑰宝，有着悠悠2000年的历史。接骨草(Sambucus chinensis Lindl.)属忍冬科接骨木属，生于海拔100～900 m的多年生高大草本或亚灌木，高可达3 m［1］。接骨草具有很高的药用及食用价值［2］，其全草、根、茎、叶、花、果实皆可入药，是我国土家族、苗族、侗族等多个少数民族的民间常用草药，具有祛风利湿、活血散瘀、消炎止痛、镇痉消肿之功效，临床上用于黄疸型肝炎、病毒性肝炎的治疗，疗效确切［3，4］。主要生物活性成分有黄酮类化合物、乌索酸、齐墩果酸、绿原酸等［5］。黄酮类化合物是一类广泛地存在于自然界的，具有2－苯基色原酮结构的化合物，具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗菌消炎、增强机体免疫功能、抗衰老等广泛的药理作用，引起人们极大的开发兴趣［6］。本实验按照中药的不同炮制方法将接骨草嫩茎尖制备成食疗药茶，进行感官审评并比较其黄酮化合物含量，找出较好的炮制方法，应用于实践，使接骨草食疗药茶，既是深受人们欢迎的保健养生食品，又成为预防及治疗疾病的药品。

1 仪器、材料与试剂

1.1 主要仪器:UV－2450型紫外分光光度计(日本岛津)，420型恒温水浴锅(江苏金坛市中大仪器厂)，(101－2BS)型电热恒温干燥箱(天津市华北实验仪器有限公司)，FA1004型电子天平(上海精科天平有限公司)、FW－100型高速万能粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.2 实验材料:将野外采集的接骨草嫩茎尖除杂、洗净晾干水分，制成鲜品。蜂蜜(湖南省雪峰山风景名胜区生态养蜂示范基地)、麦麸(山东省滨州)、黄酒(浙江绍兴市东星酒厂)、米醋(加加食品集团)。

甲醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝(均为分析纯)，纯净水(华润怡宝食品饮料有限公司)。

2 实验方法

2.1 接骨草药茶的炮制方法

2.1.1 生品与杀青品的炮制:取鲜品干燥(60℃，5 h)，得成品，标记为生品;取鲜品热锅(100℃，12 min)杀青，手揉，自然冷却，干燥，得成品，标记为杀青品。成品都放置于干燥器中保存。

2.1.2 烘制品的炮制:杀青品10 g，2份，分别缓慢加入黄酒、米醋各4mL搅匀，加盖焖润，干燥箱(120℃，1 h)取出摊开自然冷却，干燥箱(60℃，1 h)干燥得成品，分别标记为黄酒烘制和米醋烘制［7］。

2.1.3 蒸制品的炮制:杀青品10 g，2份，分别缓慢加入黄酒、米醋各4 mL，搅匀，加盖焖润，蒸笼(120℃，1 h)，干燥箱(60℃，1 h)干燥，分别标记为黄酒蒸制，米醋蒸制［7］。

2.1.4 炒制品的炮制:取鲜品10 g，于80℃条件下，炒制适度，放凉，标记为清炒制。取鲜品10 g、麦麸10 g混合，于80℃条件下，炒制适度，放凉，标记为清麸炒制;取鲜品10 g、麦麸10 g、蜂蜜10 mL混合，于80℃条件下，炒制适度，放凉，标记为蜜麸炒制［7］。以上制品放置干燥器中保存备用。

2.2 各种炮制方法接骨草药茶感官审评方法

2.2.1 感官审评标准:沿用《茶叶感官审评方法》国家标准GB/T 23776－2009，《茶叶感官审评术语》国家标准GB/T 14487－93。按照审评名优茶和初制茶的5项审评因子:茶叶的外形、汤色、香气、滋味和叶底审评。

通过问卷星软件发放《校企合作问卷调查表（学生用卷）》，收到问卷为268份，其中2016级学生占145人，2015级学生占123人，2014级学生2人；通过问卷星发放《校企合作问卷调查表（企业用卷）》，回收问卷为60份。调查问卷显示大学生期待改革大学英语教学模式，加强英语听说能力培养，以及掌握专业英语学习。企业希望校企合作能够对大学英语教学改革有启示作用，也显示了企业所需的英语人才标准，以及强调大学生的英语听说能力培养。

2.2.2 外形审评方法:将200～300 g样茶倒入评茶盘中，双手握住茶盘对角，一手要拿住样盘的倒茶小缺口，用回旋筛转法，使盘中茶叶分出上、中、下三层，用目测、手感等方法，通过调换位置、反复查看比较外形。

2.2.3 茶汤制备方法:称取样茶3.0～5.0 g投入审评杯内，用纯净水，按茶水比为1:50g·mL－1，注满沸水，加盖，计时5 min;到规定时间后，将杯内茶汤滤入审评碗内，留叶底于杯中。审评顺序:开汤后，按香气(热嗅)、汤色、香气(温嗅)、滋味、香气(冷嗅)、叶底的顺序逐项审评。

2.2.4 内质审评方法:看汤色:用目测法审评茶汤，审评时应注意光线、评茶用具对茶汤审评结果的影响，随时可调换审评碗的位置以减少环境对汤色审评的影响。

嗅香气:一手持杯，一手持盖，靠近鼻孔，半开杯盖，轻嗅或深嗅，每次持续2～3s，反复1～2次;嗅香气应以热嗅、温嗅、冷嗅相结合进行。

尝滋味:用茶匙从审评碗中取一浅匙吮入口中，茶汤入口在舌头上循环滚动，使茶汤与舌头各部位充分接触，并感受刺激，随后将茶汤吐入吐茶桶或咽下;茶汤温度一般在50℃左右较合评味要求。

评叶底:将杯中冲泡过的茶叶倒入叶底盘中，加入适量清水，让叶底漂浮起来;用目测、手感等方法审评叶底。

2.2.5 审评结果与判定:按外形、汤色、香气、滋味和叶底“五因子”，采用百分制评分。

2.3 各种炮制方法接骨草药茶中黄酮类化合物含量的测定方法

2.3.1 制备校准曲线及回归方程的建立:分别吸取芦丁标准溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 于 8 个25mL容量瓶中，加蒸馏水至10 ml，加5%NaNO2溶液1mL，混匀，放置6min，加10%Al(NO3)3溶液1mL，摇匀，放置6min，加10%NaOH溶液5mL，再加水至刻度，摇匀，放置10 min。510 nm测吸光值。

以浓度(μg·mL－1)为横坐标［X］，以吸光值(△A)为纵坐标［Y］作图，绘制校准曲线，得其线性回归方程:Y=0.0107X －0.0046，相关系数:R=0.9999。黄酮类化合物在0～70μg·mL－1范围内线性关系良好。

2.3.2 各种炮制方法接骨草药茶中黄酮类化合物含量的测定:接骨草药茶粉碎，过100目筛备用。精确称取各种炮制方法接骨草药茶粉末0.5000 g，于50 ml带塞试管中，以1:50 g·mL－1料液比加入60%甲醇，80℃水浴提取2 h后，用60%甲醇定容至50 mL容量瓶中，为制品提取液。

分别吸取2 mL提取液，按2.3.1比色方法测吸光值，并计算黄酮类化合物含量。

3 实验结果与讨论

3.1 茶叶感官审评结果与讨论:表1表明，9种药茶的外形都是紧条形，颜色最佳的为蜜麸炒制，其次杀青品、清炒制、生品、清麸炒制;清麸炒制的汤色最佳为黄亮，其次杀青品和生品，均为浅黄;清炒制和杀青品香气最好为清高，生品具有青臭气，加了黄酒的有酒香味，加了米醋的有醋香味，加了麦麸的有麦香味，加了蜂蜜的有焦糖味;蜜麸炒制和清炒制滋味最好，入口鲜甜、回甘，除了生品和杀青品有异味外，其余的几种药茶的味道均较醇正;清炒制叶底最好，为青绿色、嫩匀，其次为蜜麸炒制。

从表2可知，清炒制感官得分最高，其次蜜麸炒制、杀青品、清麸炒制，生品得分最低。杀青品中无论加黄酒还是米醋，蒸制还是烘制，感官得分均低于杀青品，降低了感官效果，但高于生品。通过黄酒和米醋的炮制，影响感官效果，可能与炮制过程中化学物质的变化有关，如色素的变化等。

表1 不同炮制方法接骨草药茶感官审评结果描述

表2 不同炮制方法接骨草药茶感官审评评分

由于接骨草具有特殊的臭气，不适合直接用来作为药茶，因此取杀青品、鲜品与其他材料炒制、烘制的产品感官效果比生品好。从炮制方法来看，利用酒炙，引药上行，增强活血通络，矫臭的作用;醋炙，散瘀止血、理气、解毒、矫味矫臭;麸炙，和中益脾、缓和燥性、矫味、增强疗效。相对于生品，无论是加黄酒、米醋、麦麸、蜂蜜均能改善感观效果，可能是杀青品或鲜品与黄酒、米醋、麦麸、蜂蜜烘制、炒制、蒸制的过程中，一些物质发生变化，导致感观效果的改善，需进一步探讨。因此，相对于生品，其余8种炮制方法的感观效果均较好，而清炒制的效果最好，其次为蜜麸炒制。

3.2 各种炮制方法的接骨草药茶中黄酮类化合物含量的比较:表3可以看出，清炒制药茶中黄酮类化合物的含量极显著地高于其他炮制方法(P＜0.01);清麸炒制的极显著地高于除清炒制外的其他炮制方法(P＜0.01);生品的极显著地高于除清炒制和清麸炒制外的其他炮制方法(P＜0.01);无论是蒸制还是烘制，杀青品中加黄酒的均较低，低于杀青品和加米醋的，杀青品中加米醋能提高黄酮类化合物含量，是否与米醋中含有较高的黄酮类化合物含量以及黄酒能影响黄酮类化合物存在的形式及种类等有关，或者在炮制过程中，黄酮类化合物转化分解，需进一步研究。因此，就黄酮类化合物含量而论，清炒制为较好的炮制方法，其次为清麸炒制。药茶的其它的生物活性成分有待于进一步研究。综合考虑感官审评和黄酮化合物含量，认为9种炮制方法均可以用于接骨草食疗药茶的制备，其中清炒制和加麦麸炒制，达到最佳的感官效果和较高的黄酮化合物的含量。接骨草药茶作为食疗药茶，直接饮用可达到治疗某些疾病和保健养生的目的。