细胞增殖抗原Ki－67在卵巢癌腹水TCT诊断中的临床价值

卢 玮，郑桂梅，刘爱民

（1.吉林大学第二医院 妇产科，吉林 长春130041；2.通化市人民医院 妇产科，吉林 通化134001）

腹水作为卵巢恶性肿瘤常见的临床症状之一，临床可根据腹水细胞形态推测原发灶，并鉴别肿瘤的良、恶性。术中及时对腹水／腹腔冲洗液脱落细胞学进行检查，可以为临床治疗提供可靠的病理学依据［1］。近年来，随着液基薄层细胞制片技术的不断发展，膜式液基薄层细胞学技术（Thin prep cytology test，TCT）在临床上应用也越广泛。其操作方法简单且在细胞标本的采集、制作和诊断技术方面与传统普通涂片技术相比都有很大的进步，使卵巢恶性肿瘤腹水／腹腔冲洗液瘤细胞阳性诊出率明显提高［2］。但是诊断效果不佳，有报道表明 Ki－67能增加宫颈涂片的诊断符合率，国内外尚无TCT联合Ki－67在诊断卵巢癌腹水中的临床价值进行评估，因此本研究对此方法进行研究。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集本院200例卵巢恶性肿瘤患者腹水／腹腔冲洗液标本，患者平均年龄38－70岁；FIGO分期，Ⅰ－Ⅱ期137例，Ⅲ－Ⅳ期63例；高分化79例，中分化63例，低分化58例；其中浆液性囊腺癌106例，黏液性囊腺癌73例，其他癌21例（内膜样癌11例、未分化癌8例、内胚窦瘤2例）。所有患者抽取腹水／腹腔冲洗液标本前均未接受过内分泌、放疗及化疗类药物治疗。全部病例术后均经病理证实。

1.2 腹水标本的处理 在开腹后取腹水，如果腹水量少的话，用30－50ml生理盐水冲洗腹腔，然后再取腹腔冲洗液，所取得的标本分2管收集，并立即送实验室，分别采用TCT＋ Ki－67和TCT分别进行细胞学检查。

1.3 新柏氏TCT涂片 仪器：新柏氏2000薄层细胞学检测系统、细胞保存液、清洗液。将标本采集在干燥、干净的离心管中离心3min，弃掉上清液，取3 ml Thin2prep细胞保存液加入离心管中，混匀后倒入保存瓶，经Thinprep2000微电脑系统程序化处理，制成直径为2cm的薄层细胞涂片，95%乙醇固定10min，经HE染色，封固后镜检。如果血液标本有多量，则加入3－5滴25%冰醋酸和细胞处理液混匀细胞层，混匀后（1 500r／min）10min离心，弃上清液后，加入细胞保存液。将剩余在保存液瓶中的标本保存，以作再次制片备用。最后在显微镜下观察结果。

1.4 Ki－67免疫组化阳性标准 细胞核内棕黄色颗粒达到下面标准者为Ki－67染色阳性：10个高倍（＠400）视野中，每个视野计数100个细胞，有Ki－67标记核的阳性细胞数大于10%为阳性。

1.5 统计学方法 用SPSS19.0软件进行统计处理。计数资料组间用χ2检验，P＜0.05说明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 腹腔液TCT与TCT＋Ki－67免疫组化染色质量的比较 见表1。

在细胞量及异常细胞量方面，TCT＋ Ki－67有76例（38%）优于TCT；在细胞保存及形态结构方面，TCT＋ Ki－67有147例（73.5%）和 TCT一致；在背景材料方面，TCT＋ Ki－67有98例（49.0%）和TCT一致（见表1）。经χ2检验，两种检查方法在免疫组化染色质量方面，差异有统计学意义（χ2＝75.0，P＜0.001）

表1 腹腔液TCT与TCT＋Ki－67免疫组化染色质量的比较〔n（%）〕

2.2 两种检查方法的诊断结果 见表2。

所有病例以病理诊断为金标准，经病理验证所有研究对象均为卵巢癌。本组TCT技术检测，确诊癌的62例（31.0%），可疑癌的19例（9.5%），阴性119例（59.5%）。TCT＋ Ki－67技术检测，确诊癌的97例（48.5%），可疑癌的22例（11.0%），阴性的81例（40.5%）。经χ2检验，两种检查方法在恶性细胞确诊方面，差异有统计学意义（χ2＝12.8，P＜0.001）。

表2 两种检查方法的诊断结果〔n（%）〕

3 讨论

卵巢癌腹水／腹腔冲洗液恶性瘤细胞细胞学诊断的准确性依赖于标本的采集、染色技术和严格的阅片制度。其中标本采集的效果影响显著，如果标本采集不满意或数量少时可能造成假阴性［3］。标本制片受到血细胞含量多少、脱落细胞数量、退变程度、腹水新鲜程度、涂片的薄厚、染色情况以及固定状态等因素的影响［4］。虽然TCT这一新的制片方法在这些方面相对于传统普通涂片方法来说有所改善，但还是有较大的影响。所以，对于研究出能更加有效改善这些影响因素的新方法还是非常有必要的。

Ki－67是由Hodgkin’s淋巴瘤所产生的L428细胞系的粗制核部的鼠单克隆抗体，1983年由Gerges等首先报道［5］。其核抗原是分子量为345 kd及395kd的两条多肽链组成DNA结合核蛋白，与染色质相连，编码基因定位于第10号染色体。它在细胞进入G1期时开始表达，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，而在有丝分裂后迅速减少，G0期和G1早期不表达［6］。Ki－67是一个细胞增殖性抗原，其参与细胞周期的调控，在目前研究很多，而且已经有研究证明用Ki－67的MIB－1抗体进行免疫组化染色检查在宫颈细胞学涂片中是个可行的方法［2］。但至今还没有数据显示，TCT联合Ki－67在诊断卵巢癌腹水中的临床价值。所以，本实验就在TCT的基础上，联合Ki－67对卵巢癌腹水的诊断进行研究。研究表明，在免疫组化染色质量方面，TCT＋Ki－67对细胞量及异常细胞量方面检测优于TCT，而对细胞保存及形态结构和背景材料评估二者相当，从而表明采用联合检测能提高免疫组化染色质量。在诊断结果方面的比较，TCT＋Ki－67诊断和病理诊断符合的例数高于TCT，这可能是因为Ki－67在卵巢癌中高表达，能更加客观反映肿瘤细胞的增殖能力［7，8］，从而提高了检出符合率。

综上所述，对卵巢癌腹水的诊断进行研究表明，TCT联合Ki－67能提高免疫组化染色质量，并且诊断能力优于TCT检测。

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