长沙地区汉族人血小板抗原（HPA1－17）基因多态性调查

张 刚，曹丽群，谢毓滨，钟待鸣

（长沙市血液中心，湖南 长沙410001）

人类血小板同种抗原（human patelet alloantigens，HPA）位于血小板膜糖蛋白上，这些蛋白是由遗传决定的，HPA的基因频率在不同种族、不同区域中的分布是不同的，研究HPA的基因多态性不仅为人类学和遗传学等研究提供重要依据［1］。在临床血小板输血过程中，如果血小板同种抗原不相匹配，可导致受血者机体产生血小板同种抗体，引起同种免疫血小板减少综合症、输血后紫癜、血小板输注无效等［2］。通过对血小板基因分型的研究，可以有效避免血小板特异性免疫的发生，提供给需要输注血小板患者HPA基因型相匹配的血液制品，在临床输血应用中具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 样本 长沙市中心血站收集618名长沙地区汉族无偿血小板献血者EDTA抗凝血500μl。样本采用盐析法提取DNA用50μl的注射用水溶解，－20℃冷冻。

1.2 仪器设备 PCR扩增仪（PTC－200，USA），凝胶成像（Alpha），电泳装置（北京六一仪器厂）。

1.3 试剂 长春博德生物公司血小板抗原（HPA）基因分型试剂，Taq酶购自大连宝生物。

1.4 PCR扩增 将待检测样本DNA溶解，按说明书操作，每个PCR反应体积为10μl，包括1 μlDNA，8μl PCR－buffer。PCR反应体积10μl。按94℃，3min；94℃，30s、61℃，30s、72℃，50s；30个循环后72℃，5min；4℃循环参数扩增。

1.5 PCR产物检测 扩增结束后取PCR产物在2%的琼脂糖内电泳30min，结束电泳记录结果。内对照产物长度429bp。

2 结果

2.1 结果判定 根据有无PCR产物和产物大小是否和预计产物大小一致片段判断是否有血小板特异性产物。有特异性片段断定有特异性抗原，反之没有特异性抗原。

2.2 基因分型结果 长沙地区汉族618名血小板献血者血小板抗原基因检测结果是HPA－1aa 609人，HPA－1ab 9 人；HPA－2aa 578 人，HPA－ab 40人；HPA－3aa 208 人，HPA－3ab309 人，HPA－3bb 101人；HPA－4aa 608人，HPA－4ab 8人；HPA－5aa 605人，HPA－5ab13人；HPA－6aa 605人，HPA－6ab 13人；HPA－15aa 179人，HPA－15ab 304人，HPA－15bb 135人；HPA－7，8，9，10，11，12，13，14，16，17这几个系统均未见b基因。

2.3 长沙地区血小板献血者HPA基因频率 618名长沙地区血小板献血者的HPA－1a基因频率为99.3%，HPA－1b基因频率为0.7%；HPA－2a基因频率为96.8%，HPA－2b基因频率为3.2%；HPA－3a基因频率为58.7%，HPA－3b基因频率为41.3%；HPA－4a基因频率为99.4%，HPA－4b基因频率为0.6%；HPA－5a基因频率为98.9%，HPA－5b基因频率为1.1%，HPA－6a基因频率为98.9%，HPA－6b基因频率为1.1%，HPA－15a基因频率为53.6%，HPA－15b 基因频率为 46.4%，HPA－7a，8a，9a，10a，11a，12a，13a，14a，16a，17a基因频率为1.00，未发现b基因。长沙地区血小板抗原基因频率和台湾、香港、日本国家地区比较无明显差异（P＞0.05），与韩国、黑人、白人及荷兰 HPA－2系统存在差异（P＜0.01），与黑人、白人及荷兰 HPA－1系统和5系统存在差异（P＜0.01）［3－7］。

表1 长沙地区血小板抗原基因频率和其他国家地区的比较

3 讨论

近年来随着成分输血在临床上的不断推广和应用，血小板输注治疗有了突飞猛进的发展，特别是在治疗以血小板数量或质量异常所致的出血性疾病中起到了重要作用。血小板抗原是用相应的同种血小板抗体来鉴定。同种血小板抗体一般由输血、妊娠或骨髓移植等刺激而产生。约2.5%的妊娠妇女会产生血小板抗体。在输血患者中约1.7%带有血小板抗体，而在多次输血患者中，约8%产生血小板特异性抗体［8，9］。最常见的抗体是 HPA－1b和5b抗体。这当然和相应HPA抗原在群体中的分布频率有关，如果该HPA抗原不相配合的比例越高，产生抗体的机会也高。HPA相合的血液制品要能在临床需要接受的时间范围内提供，则需要有大量的已分型的血小板供者。这主要因人种不同而异，对于有相同遗传背景的同一民族人群而言，一个2000人的血小板供者库已经足够［10］。当有患者需要输注血小板时，只需在医院对患者进行血小板基因型进行检测，即可在血站寻找与其相匹配的血小板。这样就可以有效减少由于血小板血型不符而引发的血小板免疫性减少症、血小板输注后紫癜、血小板输注无效等的发生。血小板基因分型实验条件的建立也可以被研究相关的血小板疾病与血小板基因分型之间的关系作有益的借鉴，甚至找到有关疾病的病因。同时为进行人类学研究和地区遗传背景提供资料。

［1］Metcalfe P，Watkins NA，Ouwehand WH，et al.Nomenclature of human platelet antigens［J］.Vox Sang，2003，85（3）：240.

［2］Williamson LM，Hacket G，Pennie J，et al.The natural history of fetomateral alloimmunization to the platelet－specific antigen HPA－1a（PIAI，ZWa）as determined by antenatal screening［J］.Blood，1998，92：2280.

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［5］刘 忠，吕 蓉.合肥地区献血者血小板抗原多态性的初步分析［J］.临床输血与检验，2003，5，3.

［6］邢培清，张伯伟.机采献血者血小板抗原基因分型检测及意义［J］.河南职工医学院学报，2003，15，41.

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［10］Schiffer C.Potential HLA－Matched platelet donor avaliability for alloimmunized patients［J］.Transfusion，1983，23：286.