人乳头瘤病毒基因型在宫颈细胞病变中的分布

陈志新，陈建森

宫颈癌目前仍是妇科最常见的恶性肿瘤之一，定期进行宫颈癌筛查，及早发现和治疗是降低宫颈癌发病率、减少死亡率的重要手段。业已证实人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）持续感染是宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）和宫颈癌的主要病因，随着HPV感染与宫颈癌病因关系的明确，HPV－DNA及其基因分型检测越来越受到重视[1]。HPV检测联合细胞学检查应用于宫颈癌及癌前病变的筛查，为有效地预防宫颈癌的重要方法之一[2－3]。本研究采用 PCR－膜斑点杂交法对1 591例女性子宫颈脱落细胞标本进行HPV－DNA分型检测和液基薄层细胞学（thinprep cytology test，TCT）检测，旨在探讨 HPV感染状况、型别分布及其与子宫颈细胞学异常和年龄的关系，并评价PCR－膜斑点杂交法检测HPV对宫颈病变的临床诊断性能，现报道如下

1 材料与方法

1.1 一般资料 2011年1月至2012年6月在福建医科大学附属协和医院门诊接受宫颈细胞涂片检查者2020例中选取1 591例，年龄20～74岁，平均年龄38.1岁，全部入院对象均无妊娠、子宫切除及子宫颈手术史者，分别进行HPV基因分型和TCT检查。

1.2 主要仪器和试剂 HPV基因分型试剂采用凯普生物科技公司的21种人乳头状瘤病毒分型检测试剂盒及其配套的医用核酸分子快速杂交仪（HHM－2），PCR扩增采用美国BIO－RAD PTC－200 PCR仪。

1.3 检测方法 用宫颈脱落细胞采样刷按要求采集宫颈脱落细胞，置细胞保存液中－20。C以下保存，1周内用常规碱裂解法提取DNA。采用PCR－膜杂交法进行HPV－DNA PCR扩增及其分型检测，PCR扩增HPV－DNA，扩增产物分型检测和结果判读等按HPV基因分型试剂盒说明书进行，该试剂盒可同时检测21种 HPV基因型别，包括 HPV6、11、42、43、44和 CP8304等5种低危型别（low risk HPV，LR－HPV），HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68 等16种高危型别（high risk HPV，HR－HPV）。TCT 检查由我院病理科按TBS分类法进行诊断。即正常范围（within normal limits，WNL）；不明意义的非典型鳞状细胞（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）；低度鳞状上皮内增生（low grades squamous intraepithelial lesion，LSIL）和高度鳞状上皮内增生（high grades squamous intraepithelial lesion，HSIL）。

1.4 统计学方法 全部数据分析应用SAS 6.12软件包进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，多组级联相关资料采用Wilcoxon秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV感染及其型别分布 1 591例女性中检出HPV阳性619例，感染率为38.90%，其中受感染者中HR－HPV阳性469例，感染率为29.47%；LR－HPV阳性87例，感染率为5.47%；HR－HPV和LR－HPV混合感染阳性63例，混合感染率为3.96%。

除HPV43型别外，其余20种HPV型别均被检出，按单一型别检出率高低分别为HPV16、52、58、CP8304、33、53、18、31、11、68、66、6、39、56、HPV35、59、44、45、42和51。

单一型别HPV感染459例，感染率为28.85%；2个型别HPV混合感染128例，感染率为8.05%；3型别 HPV混合感染23例，感染率为1.45%；4个型别以上 HPV感染9例，感染率为0.57%。

2.2 HPV感染与宫颈病变程度的关系 在338例TCT检出子宫颈病变的女性中HPV感染率为68.64%，HR－HPV 感染率为63.02%，二者其在ASCUS、LSIL和HSIL中感染率均随着宫颈病变级别递增而升高，差异有统计学意义（χ2＝6.46，P＜0.05），见表1。用 Wilcoxon秩和检验分析HPV和HR－HPV感染与宫颈疾病级别之间的关系，结果表明HPV和HR－HPV感染率在不同宫颈疾病组中具有显著差异（χ2＝22.42，P＜0.01）；除HPV51外，HR－HPV其它型别在不同宫颈疾病组中具有极显著差异（χ2＝18.60，P＜0.01）；除HPVCP8304外，其它型别LR－HPV在不同宫颈疾病组中无显著差异（χ2＝2.44，P＞0.05）。

表1 HPV感染与宫颈病变程度的关系[n（%）]Tab.1 The prevalence of HPV infection among the different cervical lesions

2.3 HPV感染与年龄的关系 将患者按年龄分成≤40岁和＞40岁两组，经Wilcoxon秩和检验，结果表明年龄分组在不同疾病组具有显著差异（χ2＝20.46，P＜0.01），即随着年龄的增加 HPV感染罹患宫颈相关疾病的机会大大增加。经χ2检验，表明年龄分组与HR－HPV和LR－HPV感染亦具有显著的差异（χ2＝13.69，P＜0.01和χ2＝4.98，P＜0.05），即年龄≤40岁妇女 HR－HPV 和 LR－HPV感染的机率高于年龄＞40岁妇女（表2，3）。

表2 不同年龄组妇女HR－HPV感染率的比较Tab.2 Comparison of the prevalence HR－HPV in women at different age groups

表3 不同年龄组妇女LR－HPV感染率的比较Tab.3 Comparison of the prevalence LR－HPV in women at different age groups

3 讨 论

HPV是一类具有高度组织和宿主特异性的嗜上皮细胞病毒，在自然界广泛存在可致人类皮肤和黏膜异常增生，引起宿主组织疣状病变及乳头状瘤病变。HPV具有多种型别，不同型别感染对子宫颈上皮的致病力不同。随着HPV感染与宫颈癌病因关系的明确，HPV－DNA及其基因分型检测越来越受到重视[4－6]。欧洲生殖道感染和肿瘤组织（EUROGIN）提出的宫颈癌筛查方案中优先推荐 HPV基因检测作为宫颈癌筛查的首选方法[7]；美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCP）发布的《子宫颈癌筛查异常妇女处理共识指南》亦明确指出30岁以上的妇女应进行HPV基因分型检测[8]。

本研究采用PCR－膜斑点杂交法对1 591例标本进行HPV基因分型，结果显示HPV总感染率为38.90%，与国内相关文献报道结果基本一致[3，7－8]。除HPV43亚型外，其余20种HPV型别均被检出，其中感染居前5位的基因型分别是HPV16、52、58、CP8304和33，除HPV16外，其余型别分布与国内外报道有所不同。其原因可能与地域差异、研究对象和检测方法等不同有关[9]。HPV16是各地最为常见的感染型别，一项多中心的研究中 HPV16在所有HPV阳性的子宫颈癌患者的平均感染率为57.4%，本研究HPV16检出率亦最高。CP8304通常被认为是与宫颈细胞病变发生关系不大的低危型[10]，然而本研究CP8304感染率居第四位，秩和检验表明其与宫颈疾病的进展密切相关（P＜0.001），与部分学者认为CP8304与宫颈疾病发生发展具有较密切的结论一致[1]，因而CP8304可作为中国妇女HPV感染的独立危险因素之一。除HPV51外，其它型别HR－HPV在LSIL以上病变中均有一定优势，提示HR－HPV具有较高的致癌性，因此临床上在制定相应的治疗方案时应加以注意。因而，为消除地域差异，方法不同造成的结果不同，需进一步加强多中心合作并扩大研究范围以明确HPV感染型别与宫颈疾病之间的关系。

HPV感染可发生于各年龄组，年龄是感染和子宫颈癌发生的相关因素，有研究表明年轻妇女更易感染高危型，进而发展为子宫颈癌且预后较差。本研究结果显示不论HPV总感染率或是HR－HPV和LR－HPV感染率均在40岁以下妇女均高于40岁以上的年长妇女，与文献报道[11]亚洲国家不同年龄妇女感染HPV较为一致，其原因可能是40岁以下妇女处于性活跃期，特别是性工作者，不同HPV基因型别的多重感染较为常见，因而可间接证实HPV可通过性接触而传播。而与欧美国家和非洲国家妇女HPV感染呈“U”字型分布不同[12]，其原因可能与地域差别，人种和文化传统等不同有关。另一方面，本研究结果表明40岁以上妇女HPV感染罹患宫颈相关疾病的机会显著高于40岁以下妇女，表明HPV的持续感染是宫颈病变发生的必要条件。

总之，本研究采用PCR－膜杂交法检测宫颈HPV感染，具有较高的敏感性和特异性，妇女感染HR－HPV能较好地反映宫颈病变的风险，从而为防治宫颈癌的发生提供一种良好的筛查手段。

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