深圳盐田地区G6PD缺乏症发病率与基因突变调查＊

蒋 明，候家兴，李春龙，陈丕绩（.广东省深圳市盐田区人民医院 5808；.广东省深圳市盐田区妇幼保健院 5808）

葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是全球最常见的一种X连锁不完全显性遗传性酶缺陷综合征，我国南方是此病高发区，其发病率在各地区和民族中有差异［1］。G6PD缺陷极易导致新生儿核黄疸，查出致病基因携带者，是预防和控制此病的有效方法。获得本地区G6PD基因突变类型及频率的人群分布情况，以此基因突变谱为依据，即可有效进行G6PD缺乏症的基因诊断。本研究对深圳市盐田区400例随机人群进行G6PD缺乏症表型筛查及基因检测，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择2011年4～6月深圳市盐田区人民医院体检人群400例，均为深圳市盐田区户籍，年龄18～45岁，男女各200例。乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管采静脉血2 mL，24h内检测G6PD酶活性；然后－20℃保存，1个月内抽提基因组DNA检测G6PD基因突变。

1.2 G6PD酶活性检测 采用G6PD／6PGD定量比值法（中山天洋电子生物传感器有限公司试剂，广东中山），严格按说明书操作，检测G6PD酶活性。结果判断：G6PD／6PGD≥1.1为G6PD酶活性正常；G6PD／6PGD在0.6～1.1为中度缺乏；G6PD／6PGD≤0.6为重度缺乏［2］。

1.3 基因组DNA抽提 EDTA抗凝全血标本1.0mL，加入9.0mL红细胞裂解，离心去上清液，将管底白细胞沉淀用STE缓冲液、10%十二烷基苯磺酸钠（SDS）和蛋白酶K混匀，56℃消化过夜，应用传统酚／氯仿法抽提基因组DNA，加60μL灭菌双蒸水溶解，－20℃保存备用。

1.4 G6PD基因突变检测 根据G6PD酶活性检测结果，将G6PD酶缺乏的男性个体，及所有女性个体，进行G6PD基因突变检测。检测方法与流程：先采用南方医科大学医学遗传学教研室报道的反向点杂交技术［3］，检测中国人群c.1388G＞A、c.1376G＞T、c.95A＞G、c.1024C＞T、c.871G＞A、c.1004C＞T等6种主要G6PD基因突变；然后，对未检测到基因突变的G6PD酶缺乏男性个体、未检测到基因突变的G6PD酶中度缺乏女性个体、G6PD酶重度缺乏但基因检测结果为杂合突变的女性个体，采用PCR结合DNA测序方法补充检测c.392G＞T和c.442G＞A基因突变类型。这8种基因突变类型占中国人群G6PD基因已知突变频率的98%以上［4］。

2 结 果

400例中，经G6PD酶活性检测，共筛出G6PD酶活性缺乏个体19例（4.75%），DNA检测共检出G6PD基因突变18例（4.50%）。见表1、2。

表1 400例随机人群G6PD酶活性和基因检测结果汇总表［n（%）］

表2 G6PD基因突变检测结果表［n（%）］

3 讨 论

G6PD缺乏症是X连锁不完全显性遗传病，G6PD基因定位于X染色体上，男性为半合子，基因突变携带者即为患者，表现为G6PD酶重度缺乏，通过酶活性检测可很容易查出。本研究200例男性人群的检测结果显示，4例重度缺乏个体经基因检测予以证实；其他个体均为酶活性正常，可排除G6PD基因突变而无须进行基因检测。由此进一步说明，针对男性人群，将表型筛查G6PD酶活性缺乏个体进行基因检测确诊的流程切实可行。

G6PD基因突变携带者女性多为杂合子，存在明显的临床表现异质性，多表现为中度缺乏，但少数表现为酶活性正常，因此目前常用的基于G6PD酶活性检测的表型筛查方法有一定的漏检率。有报道指出，用于检测G6PD缺陷的各种检验方法的杂合子检出率小于70%，即使是目前国内较先进的G6PD／6PGD比值法，也只能检出76.9%［5］。本研究的200例女性人群的检测结果显示，有2例为G6PD酶活性正常但为G6PD基因突变携带者；14例G6PD酶中度缺乏的个体中，11例经基因检测予以证实，其余3例，可能为其他罕见G6PD基因突变、基因表达调控或其他疾病因素等所导致，具体原因还有待以后的研究进一步探索。此结果说明，针对女性人群，基于G6PD酶活性的表型筛查有明显的漏检率，基因检测可大大提高诊断准确性与可靠性。

本研究的结果初步显示本地区G6PD基因突变类型以c.1388G＞A、c.1376G＞T和c.95A＞G三种类型为主，与相关报道相符。总的来看，本地区G6PD基因突变人群携带率为4.5%，低于广东省G6PD缺乏症发生率5%～6%［6］；且检出了其他少见突变类型，可能是由于深圳是一个移民城市，居民来自全国不同地方，降低了人群携带率，但也导致基因突变谱相对复杂。

总之，虽然本研究的标本量不大，尚不能完全说明本地区G6PD缺乏症的具体情况，但研究结果足以提示本地区G6PD基因突变谱的复杂性，也充分说明基因检测在G6PD缺乏症诊断中的重要性与必要性。研发简单实用、结果准确可靠的基因检测方法，结合当前常规使用的表型筛查方法，准确诊断G6PD缺乏症，以期实现预防患者发病、有效防止和处理新生儿黄疸的目的。

［1］Luzzatto L.G6PD deficiency and malaria selection［J］.Heredity（Edinb），2012，108（4）：456.

［2］姚英姿，方小武，杨孜，等.应用荧光斑点法和 G6PD／6PGD比值法检测新生儿G6PD［J］.中国优生与遗传杂志，2010，18（8）：78－79.

［3］Liang Li，Yu－Qiu Zhou，Qi－Zhi Xiao，et al.Development and evaluation of a reverse dot blot assay for the simultaneous detection of six common Chinese G6PD mutations and one polymorphism［J］.BCMD，2008，41（1）：17－21.

［4］Yan T，Cai R，Mo O，et al.Incidence and complete molecular characterization of glucose－6－phosphate dehydrogenase deficiency in the Guangxi Zhuang autonomous region of southern China：description of four novel mutations［J］.Haematologica，2006，91（10）：1321－1328.

［5］景尉，王方，罗旋，等.广州东山区地中海贫血和G6PD缺乏症的调查［J］.现代临床医学生物工程学杂志，2004，10（5）：421－422.

［6］杜传书.我国葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏症研究40年的回顾和展望［J］.中华血液学杂志，2000，4（21）：4.