健康献血者不规则抗体筛查在临床输血中的意义

吕学琴，尹向丽（新疆维吾尔自治区农三师图木舒克市中心血站 843900）

红细胞血型不规则抗体，也称意外抗体，是引起血型鉴定困难、疑难配血、溶血性输血反应以及新生儿溶血症的主要原因之一［1－4］。正常情况下在血液中不存在不规则抗体，但母婴血型不合的妊娠或输注血液制品的免疫刺激均可诱导产生不规则抗体［5］。患者输入含有不规则抗体的血液会造成急性或迟发性输血反应，轻则影响治疗效果，重则危及患者生命。目前不规则抗体的筛查方法是利用抗体筛选试剂红细胞与被检者血清进行反应，以判断被检者是否含有临床意义的不规则抗体［6］。为避免受血者接受意外抗体，保证患者的输血安全，本中心对2011年8月至2012年10月3 029名健康献血者的血浆进行不规则抗体筛查，并对其中经鉴定确认的17例不规则抗体阳性结果进行分析，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年8月至2012年10月于本站献血的健康献血者3 029名，其中男1 397名，女性1 632名，年龄18～55岁，有输血史者277例，有妊娠史者632例。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器 离心机（德国Eppendorf公司，5810R）；血型血清学离心机（湖南湘鹰离心机有限公司，TD4ZB）；孵育器（德国耶拿分析仪器股份公司，TB2）。

1.2.2 试剂 谱细胞（江阴力博医药生物技术有限公司）；抗人球蛋白试剂［东西仪（北京）科技有限公司］；抗－A、抗－B血型定型试剂（单克隆抗体，上海血液生物医药有限责任公司）；抗体筛查标准谱细胞（3人份O型红细胞，北京斑珀斯公司）；抗体鉴定谱细胞（10人份O型红细胞，北京斑珀斯公司）。

1.3 试验用筛选红细胞制备 从健康献血者中筛选3份包含C、c、D、E、e、M、N、P1、JKa、JKb、Lea、Leb、Mur抗原谱的 O型红细胞，分别用生理盐水洗涤筛选红细胞3次，用生理盐水制备成5%的红细胞悬液，用于盐水法和间接抗人球蛋白法检测。

1.4 方法

1.4.1 样本处理 每位献血者抽取3mL静脉血液，采用乙二胺四乙酸二钾抗凝，所有样本均经充分离心后进行试验，确保血浆中无纤维蛋白凝块的干扰。

1.4.2 盐水介质试验 （1）取3支玻璃试管，分别标记“1号”、“2号”、“3号”。（2）各试管中分别加入待检血浆100μL和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选红细胞50μL。（3）混匀后3 400r／min离心15s，观察结果，若有凝集反应，则为阳性反应；未出现凝集反应，则为阴性反应。3管中有至少有1管为阳性，则抗体筛选试验为阳性，说明待检血清中存在IgM类抗体；若3管均为阴性，则表明盐水介质抗体筛选试验阴性。为查明待检血清中是否含有IgG类抗体，还应进一步做抗人球蛋白试验。

1.4.3 抗人球蛋白试验 （1）设置检测管、阳性对照管和阴性对照管。（2）检测管加5%相应筛选红细胞悬液50μL和被检血清100μL；阳性对照管加5%Rh（D）阳性红细胞悬液50μL和IgG抗－D血清100μL；阴性对照管加5%Rh（D）阳性红细胞悬液50μL和AB型血清100μL。（3）各管置37℃孵育器中孵育30～60min后离心，观察溶血和凝集，并记录结果。（4）彻底悬浮红细胞，用生理盐水充分洗涤3次。（5）最后1次洗涤后，将盐水弃净，用滤纸将试管边缘盐水吸干，每管加最适稀释度抗人球蛋白血清100μL，充分混合后离心，轻轻悬浮红细胞，观察有无凝集反应，记录结果。（6）结果判定：阳性对照管和检测管出现凝集，而阴性对照管不凝集时，即为阳性，说明血清中存在不规则抗体。

1.4.4 不规则抗体的特异性鉴定 筛选阳性的标本用谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤同抗体筛选试验，并根据献血者血浆与谱细胞的反应格局判断抗体的特异性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 18.0软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不规则抗体筛查 在3 029例血样中，共检出不规则抗体阳性17例，阳性率为0.56%。其中男性不规则抗体阳性6例，阳性率为0.43%，女性不规则抗体阳性11例，阳性率为0.67%，男女不规则抗体阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.806，P＞0.05）。有输血史或妊娠史者不规则抗体阳性15例，无输血史或妊娠史者不规则抗体阳性有2例，差异有统计学意义（χ2＝23.137，P＜0.001），见表1。

表1 不规则抗体阳性率比较

2.2 不规则抗体的分布 17例不规则抗体中，不规则抗体Rh系统为14例，占82.35%（14／17），其中抗－D抗体比例最高，占52.94%（9／17），抗－E占23.53%（4／17），抗－e占5.88%（1／17）；MNSs系统2例，占11.76%（2／17）；抗－A11例，占5.88%（1／17）。

3 讨 论

以往的研究认为，血型抗体在健康人群中检出率为0.3%～2%［7］，本研究对3 029例健康献血者标本进行抗体检测，阳性率与文献报道相符。人类Rh血型系统主要有5种抗原，其免疫原性的强弱依次为D＞E＞C＞c＞e［8－9］。抗－D和抗－E是最常见的Rh血型系统不规则抗体，本实验结果显示，不规则抗体特异性种类与频率以Rh系统最多，以抗－D抗体占的比例最高（52.94%），其次是抗－E（23.53%）。Rh（E）抗原是除Rh（D）抗原外抗原性最强的抗原，却未作为常规检测，导致近年时有抗Rh（E）抗体引起溶血性输血反应的报道。现已有报道指出常规检测除ABO系统以外的其他一些血型抗原的十分必要［10］。MNSs系统抗体中主要是抗－M 抗体，占11.76%。抗－M抗体为冷凝集素，通常以IgM形式存在，一般不能在体内引起溶血性反应［11］，但当患者处于低温麻醉状态下手术时，此类抗体可激活补体；当机体的体温处于冷抗体最适反应温度范围内（4～20℃）时，也可发生溶血反应，因此要选择与抗－M抗体相合的血液，以免发生意外。

本组资料检出17例不规则抗体的献血者中，男性不规则抗体阳性6例（0.43%），女性11例（0.67%），差异无统计学意义（P＞0.05），说明不规则抗体产生不存在性别差异，但这与其他文献报道结果不相同［12］。分析原因可能是本研究涉及的研究对象相对较少，不能反映实际人群的情况。

输血、妊娠会使免疫性抗体得以形成，引起输血不良反应以及输血相关性疾病的发生。这些不规则抗体的产生，可能与输血史及妊娠史等因素有关。本组资料检出的17例不规则抗体献血者中，88.2%（15例）有输血史或妊娠史，曹荣祎等［13］报道了120例不规则抗体筛查阳性的患者中，79.2%（95例）有输血史及妊娠史。此外，由于Rh（D）阴性献血者产生不规则抗体的概率远高于Rh（D）阳性献血者，所以对Rh（D）阴性献血者的标本进行不规则抗体检测更有实用价值和临床意义［14］。80.0%Rh阴性个体输注Rh阳性血液后2～5个月产生抗－D抗体。笔者所在地区多为维吾尔族人，Rh（D）阴性人群居多，因而于输血时出现抗原刺激的概率也较大。为保证患者的输血安全，献血者进行红细胞不规则抗体的筛查同样重要，不但可以防止输注给受血者含有不规则抗体的血液，避免由不规则抗体导致的溶血性输血反应［15］；同时也避免血液的浪费，还可制备成含有不规则抗体的血清，用于稀有血型的检测，为稀有血型患者提供相合血液。

综上所述，对供血者做抗体筛查，并提高抗体筛查的水平，对减少输血反应、提高输血疗效、保障临床输血安全具有非常重要的作用，且此方法简单、省时、易于掌握，值得临床推广应用。

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