雌、孕激素受体与p16蛋白在子宫肉瘤中的表达

王成书 张霞

子宫肉瘤(US)是一种较少见的恶性程度很高的女性生殖器肿瘤，为中胚叶肉瘤，可来源于子宫肌肉、结缔组织、血管和上皮，具有丰富的组织学形态和生物学行为，美国妇癌协会2003将子宫肉瘤的病理类型分为三种：子宫平滑肌肉瘤(ULMS)、子宫内膜间质肉瘤(ESS)、恶性苗勒管混合肉瘤(MMT)即癌肉瘤。本研究的目的拟通过免疫组化方法检测ER、PR与p16蛋白在子宫肉瘤中的表达，旨在探讨它们在US发生发展过程中蛋白表达的意义，以了解US的发病机制并为其早期诊断和治疗提供线索。

1 资料与方法

1.1 一般资料 US62例来自河北医科大学第二医院病理科及协作单位1985至2008年存档的手术切除的US的蜡块标本，其中 ULMS29例，ESS15例，MMT18例;取同期子宫肌瘤(LmA)20例作为对照;各病例标本均经组织病理学确诊。

1.2 方法 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶联结免疫组织化学(S-P)方法检测P16蛋白、ER和PR在62例US中的表达，以20例LmA作为对照。

1.3 结果测定 以细胞核出现棕黄色颗粒或团块着色为阳性标志。每张切片随机选取5个高倍视野，分别计数阳性细胞数和总细胞数，两者的比值为阳性细胞百分数。据阳性细胞百分数评分，＜10%评为0、10% ～30%评为1分、31% ～50%评为2分、＞50%评为3分，并分别定为阴性(-)、弱阳性(+)、阳性(++)、强阳性(+++)。

1.4 统计学分析 计数资料采用χ2检验及Spearman秩相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

雌、孕激素受体阳性物质定位于胞核，以核内出现棕黄色颗粒为阳性反应;P16基因蛋白的免疫反应产物主要存在于细胞核中，部分见于胞质内，但P16蛋白属核蛋白，它在胞质核蛋白体中合成后需转入到胞核内才能进一步发挥其调节细胞周期的功能，因此，细胞核阳性才更有意义，故本研究中胞质阳性弃而不计，只计核阳性。

2.1 ER、PR、P16蛋白在 LmA与US中的表达情况 US与LmA比较，ER、P16表达率下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，PR表达差异无统计学意义(P＞0.05);子宫平滑肌肉瘤、子宫内膜间质肉瘤及恶性苗勒管混合瘤之间，P16表达差异无统计学意义(P＞0.05);ESS与ULMS及MMT之间比较，ER、PR表达均差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 ER、PR、P16蛋白在子宫肉瘤中表达的相关性及其与临床分期的意义 ER、PR、P16蛋白在子宫肉瘤中的表达情况经Spearman秩相关分析，发现ER与P16表达关系较密切，呈负相关(r=-0.391，P=0.036)，ER与PR表达无相关性(r=0.098，P＞0.05);在临床Ⅰ、Ⅱ期中的表达与Ⅲ、Ⅳ期相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)。

表1 ER、PR与P16蛋白在子宫平滑肌瘤与子宫肉瘤中的表达情况 例

3 讨论

已知子宫是卵巢激素靶器官之一，其疾病的发生与激素和激素受体水平密切相关，激素受体的存在是对激素易感的特征，但它们导致子宫病变的具体机制尚未阐明。

ER基因定位于6q25(ERα)和14q24(ERβ)，表达于正常子宫的上皮、肌层细胞及正常乳腺上皮细胞;孕激素受体(PR)基因定位于11q22，是一种雌激素调节蛋白;二者均调节性器官细胞的生长发育。当细胞癌变时，部分细胞仍保留其ER、PR，这意味着这些细胞分化好，仍保留着其激素依赖性生长的特点。Zhai等［1］研究表明ER、PR在US中的表达量显著低于子宫肌瘤;ER、PR的测定在某些恶性肿瘤处理方面的意义已得到肯定，如乳腺癌、子宫内膜癌中测到高浓度ER和/或PR，据此可预计内分泌治疗的效果。本研究结果也表明：在29例ULMS中，ER的表达率(48.3%)明显低于 LMA，差异有显著性(80%;P＜0.05);PR表达率也有下调但差异不显著。而在ESS与LMS及MMT之间比较，ER、PR表达均有显著性差异，这与赵超等［2］的研究结果相似;经Spearman秩相关分析发现ER与PR表达负相关性不密切，表达近乎相似(r=-0.098，P=0.612)，这些结果提示ER调节过程的功能完整性有利于PR的合成;另外，子宫内膜间质细胞具有成肌纤维细胞性质，可分化为完全发育的平滑肌细胞，所以，ESS可伴平滑肌分化，ESS和子宫平滑肌肿瘤之间在形态学上存在交叉，单凭临床表现，组织形态学评价往往较难准确诊断，ER、PR表达的检测可为其诊断提供依据，并可指导治疗。

P16又称多重肿瘤抑制基因，定位于人类染色体9P21，可通过抑制细胞分裂周期的关键酶CDK4，抑制细胞生长，在细胞周期中起负性调节的作用，其编码的蛋白产物分子直接参与正常细胞的生长调控。P16基因缺失或突变在肿瘤发生过程中起着重要作用，当P16基因突变或缺失时，P16蛋白就不能正常表达，使细胞增殖失去控制。细胞分裂无限进行，最终形成肿瘤。已有充分的证据表明，P16免疫染色与细胞或组织异常的严重程度相关［3］，本研究结果显示，P16蛋白在ULMS中的表达缺失率为34.5%，表达阳性率为65.5%，而在LMA中85%为弱阳性表达，经统计学分析，具有显著性差异(P＜0.05)，而P16蛋白在ULMS中阳性表达水平又明显高于LMA(P＜0.05)，这表明P16蛋白的异常表达在US变中起了重要作用。Lee等［4］研究结果显示：P16强阳性区分LMA与ULMS的敏感性为92%、特异性为98%，并可作为ULMS的标志物。目前，虽然临床上针对US分子标记物的研究较多，但都缺乏大样本研究，P16蛋白能否作为子宫平滑肌肿瘤良恶性鉴别有用的标记物有待进一步研究。

肿瘤的发生发展是一个多因素、多阶段的过程，其中多个基因的改变导致细胞周期失调并导致细胞异常增殖，细胞增殖失控在肿瘤形成的过程中发挥了重要作用。对乳腺癌的研究表明，雌激素通过刺激与G1期到S期转化有关的cyclinD1过表达来诱导ER阳性乳腺癌细胞的扩增［5］;而p16与ER基因表达明显负相关［6］。本研究发现，ER与p16蛋白在US中的表达关系较密切，呈负相关(r=-0.391，P=0.036)，二者相结合有可能成为子宫子宫肉瘤鉴别诊断的分子标记物。

1 Zhai YL，Kobayashi Y，Mori A，etal.Expression of steroid receptors，Ki-67，and p53 in uterine leiomyosarcomas.Int J Gynecol Pathol，1999，18：20-28.

2 赵超，王建六，魏丽惠.子宫肉瘤雌、孕激素受体表达与临床生物学特性及预后的关系.中国妇产科临床杂志，2004，5：116-119.

3 Tsoumpou I，Arbyn M，Kyrgiou M，etal.p16(INK4a)immunostaining in cytological and histological specimens from the uterine cervix：a systematic review and meta-analysis.Cancer Treat Rev，2009，35：210-220.

4 Lee CH，Turbin DA，Sung YC，etal.A panel of antibodies to determine site of origin and malignancy in smooth muscle tumors.Mod Pathol，2009，22：1519-1531.

5 Foster JS，Henley DC，Bukovsky A，etal.Multifaceted regulation of cell cycle progression by estrogen：regulation of Cdk inhibitors and Cdc25A independent of cyclin D1-Cdk4 function.Mol Cell Bio，2001，21：794-810.

6 Hui R，Macmillan RD，Kenny FS，etal.INK4a gene expression and methylation in primary breast cancer：overexpression of p16INK4a messenger RNA is a marker of poor prognosis.Clin Cancer Res，2000，6：2777-2787.