柳叶蜡梅茎叶水提物的“消导止泻”研究△

温慧萍，雷伟敏，吴宇锋，吕圭源，陈素红*

(1.同济大学 丽水中药研究院，浙江 丽水 323000；2.丽水学院，浙江 丽水 323000；3.温州医科大学，浙江 温州 325035)

柳叶蜡梅茎叶水提物的“消导止泻”研究△

温慧萍1，雷伟敏2，吴宇锋3，吕圭源3，陈素红3*

(1.同济大学 丽水中药研究院，浙江 丽水 323000；2.丽水学院，浙江 丽水 323000；3.温州医科大学，浙江 温州 325035)

目的：研究柳叶蜡梅茎叶水提物“消导止泻“的科学内涵。方法：将ICR小鼠随机分为5组，分别为阴性对照组、阳性对照组和柳叶腊梅 0.5，2，4 g·kg-1剂量组，每组12只，以枸橼酸莫沙必利为阳性对照测定血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)含量，并计算胃内色素相对残留率；以克痢痧为阳性对照，末次给药1 h后灌胃蓖麻油，记录1，2，3，4，5 h内的累积腹泻次数和大便形态；末次给药1 h后灌胃番泻叶水提物，记录1，2，3，4，5 h内的累积腹泻次数和大便形态。结果：柳叶腊梅 3个剂量组小鼠胃内色素相对残留率均降低(P<0.05)、血清GAS水平均显著升高(P<0.01)，其中柳叶腊梅 0.5 g·kg-1组小鼠血清MTL含量显著升高(P<0.01)；柳叶腊梅 3个剂量能不同程度地降低蓖麻油腹泻小鼠3，4，5 h内的累积腹泻次数及1，2，3 h的大便形态(P<0.05或P<0.01)；柳叶腊梅 2，4 g·kg-1剂量能显著改善番泻叶致泻3，4，5 h内的累积腹泻次数及3 h小鼠的大便形态(P<0.05或P<0.01)。结论：柳叶蜡梅茎叶水提物可以显著提高正常小鼠胃排空和血清GAS含量，具有一定的促消化作用，且能降低蓖麻油和番泻叶致泻小鼠的腹泻次数，改善大便形态，具有一定的止泻作用。

柳叶蜡梅；茎叶水提物；消导止泻；胃泌素

食凉茶是一味畲族百姓家中常备保健药茶，来源于蜡梅科蜡梅属植物柳叶蜡梅ChimonanthussalicifoliusS.Y.H(LYLM)的干燥茎叶，产于江西西北部、安徽东南部和浙江南部[1]。食凉茶在民间主要以其茎叶泡茶饮用，治疗因感受风寒而引起的肚痛、肚胀、腹泻或因饮食不当而引起的消化不良、腹部胀痛和小儿疮积等症，疗效显著。丽水中医院已经利用其挥发油开发出新药“脾胃舒”[1]。

目前，食凉茶植物的研究和开发逐渐被重视，主要集中在其挥发油成分的研究[2-3]。其水提物的药理作用和化学成分研究却鲜有报道。食凉茶“消导止泻”的作用主要依赖畲族百姓的口口相传，未见有相关的文献报道。因此，本研究探讨样品食凉茶对正常小鼠胃肠运动的影响和对2种腹泻模型小鼠的影响，以期揭示其“消导止泻”的科学内涵。

1 材料

1.1 动物

ICR小鼠180只，体重18～22 g，由浙江省试验动物中心提供。

1.2 药物及其配制

1.2.1 阳性药 枸橼酸莫沙必利片(批号：11101952，江苏恒瑞医药股份有限公司)：每5片纯水定容至100 mL，超声混匀，即得浓度为2.5×10-4g·mL-1的药液；克痢痧胶囊(批号：20100903，杭州南洋药业有限公司)：每12粒纯水定容至100 mL，超声混匀，即得浓度为33.6 mg·mL-1的药液。

1.2.2 受试药 柳叶蜡梅购自浙江省松阳县老雷种植基地。取柳叶蜡梅茎叶1 500 g，加9 000 mL饮用水，微压循环提取2次(第1次2 h，第2次1 h)，合并滤液，旋转蒸发浓缩至1 500 mL，相当于含生药为1 g·mL-1的药液，作为原液。用此原液分别配制成0.05，0.2，0.4 g·mL-1的药液，分别作为柳叶蜡梅茎叶水提物0.5，2，4 g·kg-1剂量药液。

1.2.3 胃内色素标记物 精密称取0.5 g蓝色葡聚糖-2000(BD 2000)，加蒸馏水定容至25 mL，即得2% BD溶液。

1.2.4 腹泻模型造模药 蓖麻油为原液；番泻叶40 g，加饮用水800 mL，煮沸5 min，冷却，纱布过滤，旋转蒸发浓缩至40 mL，即相当于含生药量为1 g·mL-1的药液。

1.3 主要仪器

微压循环中药煎药机(北京东华原医疗设备有限公司)、大型旋转蒸发器(上海豫康科教仪器设备有限公司)、TC-15恒温电热套(海宁市华星仪器厂)、YP15KN型电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)、KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、Microcl17微量离心机(美国Thermo)、DDL-5型低速冷冻多管离心机(美国Kendro)、多功能酶标仪(芬兰Thermo Multiskan MK3)。

2 方法

2.1 胃残留率实验

取60只ICR小鼠，随机分为阴性对照组、阳性对照组(枸橼酸莫沙必利)，柳叶蜡梅茎叶水提物3个剂量组(0.5，2，4 g·kg-1)，连续给药10 d。末次给药前禁食12 h，末次给药30 min后灌胃2%BD 2000 0.4 mL/只，20 min后摘眼球取血，测定血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)含量；取胃内容物洗于去离子水中，测定吸光度，计算胃内色素相对残留率。

2.2 蓖麻油致小鼠腹泻实验[4]

分组方法同2.1，其中阳性对照组给予克痢痧药液，末次给药前禁食12 h，末次给药1 h后分别灌胃蓖麻油0.15 mL/只造成小鼠腹泻模型，造模后，单只入垫有纸片的鼠笼，分别观察致泻后1，2，3，4，5 h内的累积腹泻次数和大便形态。

2.3番泻叶致小鼠腹泻实验

方法同2.2，但造模给予番泻叶水提物0.3 mL/只[5]。

2.4 指标测定

2.4.1 胃内色素相对残留率 小鼠于末次给药30 min后，灌胃给予2%BD 2000 0.4 mL/只，20min后摘眼球取血各0.5 mL，颈椎脱臼处死，开腹取出全胃(于贲门和幽门括约肌处剪下)，沿大弯侧剪开，将胃内色素残留物充分洗于4 mL去离子水中，4 000 r·min-1冷冻离心10 min，各取上清液200 μL，点于酶标板，于620 nm处测吸光度。求出各组吸光度的平均值，设阴性对照组胃内色素残留率的均值为100%，求其他组与对照组均值的百分比，即为胃内色素相对残留率[6-7]。

2.4.2 血清胃泌素(MTL)和胃动素(GAS)含量2.1项下的小鼠取血后，血液静置2 h，离心(3 500 r·min-1，15 min)，取上清液，按照小鼠MTL酶联免疫试剂盒(Rat GAS ELISA Kit RGB& CHN Lot：09/2012)和GAS酶联免疫试剂盒(Rat GAS ELISA Kit RGB& CHN Lot：09/2012)说明书，测小鼠血清MTL和GAS含量。

2.4.3 腹泻次数和大便形态 造成腹泻模型后，单只入垫有纸片的鼠笼，每1h 换纸记录腹泻次数，观察致泻后1，2，3，4，5 h的腹泻次数，粪便次数以每粒或每堆(不能分清粒数者)为1次，计算1，2，3，4，5 h内的累积腹泻次数；对纸上大便形态进行观测并打分分级，分为5级，其中Ⅰ级为正常便(0分)、Ⅱ级为外形正常但含水分多的便(1分)、Ⅲ级为外形不正常的软便(2分)、Ⅳ级为黏液便(3分)、Ⅴ级为水样便(4分)。

2.5 统计分析

3 结果

3.1 胃内色素相对残留率及血清MTL、GAS含量

与阴性对照组比较，柳叶腊梅茎叶水提取物3个剂量组中小鼠胃内色素相对残留率均降低(P<0.05)，血清GAS水平均显著升高(P<0.01)，其中0.5 g·kg-1组小鼠血清MTL水平显著上升(P<0.01)。结果见表1。

3.2 腹泻次数

与阴性对照组比较，柳叶腊梅茎叶水提物能降低蓖麻油致泻小鼠3，4，5 h内的累积腹泻次数(P<0.05或P<0.01)，柳叶腊梅茎叶水提物4 g·kg-1组能降低蓖麻油致泻小鼠2，3，4，5 h内的累积腹泻次数(P<0.05或P<0.01)。结果见表2。

与阴性对照组比较，柳叶腊梅茎叶水提物各剂量均能显著降低番泻叶致腹泻小鼠3，4，5 h内的累积腹泻次数(P<0.05)。结果见表3。

3.3 大便形态

与阴性对照组比较，柳叶腊梅茎叶水提物2，4 g·kg-1剂量能显著改善蓖麻油致腹泻1，2，3 h小鼠的大便形态(P<0.05或P<0.01)。结果见表4。

与阴性对照组比较，柳叶腊梅茎叶水提物2，4 g·kg-1剂量能显著改善番泻叶致腹泻3 h时小鼠的大便形态(P<0.05)。结果见表5。

表1 柳叶腊梅水提物对正常小鼠胃肠运动的影响

注：与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，下同。

表2 柳叶腊梅茎叶水提物对蓖麻油致泻小鼠累积腹泻次数的影响

表3 柳叶腊梅茎叶水提物对番泻叶致泻小鼠累积腹泻次数的影响

表4 柳叶腊梅对蓖麻油致泻小鼠大便形态的影响

表5 柳叶腊梅对番泻叶致泻小鼠大便形态的影响

4 讨论

柳叶蜡梅是曾经缺医少药的畲族人民发现的对防治消化系统疾病具有很好疗效的偏方，是祖国民族医药宝库的瑰宝。目前，柳叶腊梅的药理研究主要集中在挥发油上，丽水中医院发现其可显著抑制小鼠腹泻，抑制新斯的明小鼠肠亢，降低正常大鼠的胃液、胃酸、总酸排出量，抑制大鼠应激性溃疡发生[8]。

课题组从当地百姓的实际食用习惯出发，研究柳叶腊梅水提物的“消导止泻”作用，试图用现代药理学手段解释百姓食用柳叶腊梅的科学道理。实验过程中，小鼠的体重、体征、一般行为学均正常，说明柳叶腊梅对小鼠无其他异常作用。

中医所称“消导”即消食导滞，关系脾胃的运化功能。食物由胃进入十二指肠的过程称为胃排空，是研究药物促消化作用的主要指标。实验以BD 2000为标记物，通过观察其在胃内的残留来反推药物的胃排空作用。胃内色素残留率越低，说明胃排空作用越强。本实验各组小鼠胃内色素相对残留率均较阴性对照组显著降低，提示柳叶腊梅能通过促进胃排空实现“消导”作用。

MTL是由22个氨基酸残基组成的多肽，多分布于小肠，由主要分布于十二指肠和上端空肠黏膜内的M细胞分泌[5]，它能引起胃收缩和小肠明显的分节运动，利于胃肠内食糜的清除，因此可促进消化。GAS主要由胃窦及十二指肠黏膜的G细胞分泌[5]，对整个胃肠道几乎均有作用：促进胃肠液体分泌,增强胃窦、胃体收缩，加大胃肠道运动，舒张幽门括约肌，促进胃及上部肠道粘膜细胞的分裂增殖。实验证明柳叶腊梅茎叶水提物对正常小鼠血清MTL、GAS水平具有不同程度的升高作用，尤其是GAS含量升高显著，提示该药具有一定程度的促进GAS、MTL分泌作用。说明柳叶腊梅具有一定的促消化作用。

蓖麻油致腹泻模型主要通过刺激小肠导致腹泻，番泻叶致腹泻模型主要通过刺激大肠导致腹泻[9]。结果显示，柳叶腊梅茎叶水提物能降低腹泻模型小鼠的累积腹泻次数，改善腹泻形态，且对蓖麻油致泻模型的止泻效果更佳，从结果推测柳叶腊梅对小肠异常引起的腹泻效果更好。说明柳叶腊梅具有一定的止泻作用。

柳叶腊梅含挥发油、黄酮、生物碱等多种有效成分，还含有12种微量元素，18种氨基酸，7种维生素[8]。为了探究其止泻作用的药效物质，作者查阅文献发现鞣质具有收敛性，用于止泻、止血、烧伤等[9]。因此，作者应用相关方法[10]测定了柳叶腊梅的鞣质含量，结果为9.01 mg·g-1，提示鞣质可能是其止泻作用的药效物质，有待于今后开展进一步的研究。

[1] 陈龙清，陈俊愉.蜡梅属植物的形态、分布、分类及其应用[J].中国园林，1999，15(1)：76.

[2] 欧阳婷，麦曦，夏红英，等.柳叶蜡梅叶挥发油化学成分GC-MS分析[J].南昌大学学报(理科版)，2010，34(1)：78-81.

[3] 史小娟，潘心禾，张新凤，等.柳叶蜡梅叶挥发性成分的提取及GC-MS 分析[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(9)：129-131.

[4] 陈宝忠，许峰，肖洪彬.香连丸抗小鼠腹泻作用的试验研究[J].中医药信息，2010，27(4)：43-44.

[5] 王新，韩月东，吴汉平，等.番泻叶提取物对小鼠胃肠运动及其组织形态学的影响[J].中国中西医结合杂志，2001，21(S1)：66-68.

[6] 王伟，王景杰.白萝卜提取物对大鼠小肠动力作用的影响[J].中国中西医结合消化杂志，2007，15(5)：304-306.

[7] 郭喜军.槟榔对大鼠胃运动及神经递质的影响[J].中国中西医结合消化杂志，2009，17(5)：300-303.

[8] 程文亮.畲药柳叶蜡梅生产质量管理规范(GAP)的研究[D].杭州：浙江大学，2007.

[9] 姚泰.生理学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2002：188-190.

[10] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录62.

ResearchofaChineseHerbTeainFolkabouttheScientificConnotation

WEN Hui-ping1*，LEI Wei-min2，WU Yu-feng3，LYU Gui-yuan3，CHEN Su-hong3

(1.LishuiInstituteofTraditionalChineseMedicine，TongjiUniversity，Lishui323000，China；2.LishuiUniversity，Lishui323000，China；3.WenzhouMedicalUniversity，Wenzhou325035，China)

Objective：To study the scientific connotation of “Help digestion and anti-diarrhea”—a Chinese herb tea in folk.Methods：Experiment 1，60 ICR rats were divided into 5 groups at random：negative control group，positive control group，Chimonanthussalicifolius0.5 g·kg-1，2 g·kg-1，4 g·kg-1dose group，test the blood serum content of motilin(MTL)and gastrin(GAS)；washing the contents of the stomach in deionized water and measuring the absorbance to calculate the relative residual rate of intragastric pigment.Experiment 2，grouping method is same as above，except the positive control group was given Kelisha Jiaonang.Lavage them with sesame oil 1 h after the last administration，then record the cumulative frequency of diarrhea and stool patterns in 1 h，2 h，3 h，4 h，5 h；Experiment 3，method is same with experiment 2，except lavage them with senna leaf extract 1 h after the last administration.Results：Compared with the negative control group，Chimonanthussalicifoliusgroup can decrease the relative residual rate of intragastric pigment(P<0.05)and increase the blood serum content of GAS(P<0.01)，especiallyChimonanthussalicifolius0.5 g·kg-1dose group，can increase the blood serum content of MTL(P<0.01)，Chimonanthussalicifoliuscan decrease the cumulative frequency of diarrhea in different degrees which induced by castor oil or senna leaf extract in 2 h，3 h，4 h，5 h(P<0.05 orP<0.01)，Chimonanthussalicifolius2 g·kg-1、4 g·kg-1dose group can significantly improve the stool patterns at 1 h，2 h，3 h which induced by castor oil and at 3h which induced by senna leaf extract(P<0.05 orP<0.01).Conclusion：Chimonanthussalicifoliuswater extracts can significantly improve gastric emptying of the normal mice and the blood serum content of GAS，has a certain role in promoting digestion，and can reduce the diarrhea induced by castor oil or senna leaf extract in mice and improve stool form，has antidiarrheal effect.

ChimonanthussalicifoliusS.Y.H；Stem leaves water extracts;Help digestion and anti-diarrhea；Gastrin

2013-04-11)

丽水市科技计划项目(20100408)

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陈素红，研究方向：中药药理，E-mail：chensuhong@aliyun.com