牛病毒性腹泻－黏膜病的血清学调查

雷程红，郭芙莉，魏 蕾，舒 展，吕春华，黄杨波，吴智年，姚 刚

（1．新疆农业大学动物医学院，新疆 乌鲁木齐830052；2．阿勒泰地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 阿勒泰836500；3．新疆哈巴河县畜牧兽医站，新疆 哈巴河836700）

牛病毒性腹泻－黏膜病（BVD）是由牛病毒性腹泻－黏膜病病毒（BVDV）感染而引起的一种复杂、临床类型多样的疾病。病毒引致的急性疾病称为牛病毒性腹泻，引致的慢性持续性感染称为黏膜病。目前，该病遍及全世界，给许多国家的畜牧业造成了严重的经济损失。该病自1980年被证明在我国存在［1］以来至今，几乎遍及全国各省区，部分省市的牛群中BVDV 抗体阳性率高达80%［2－4］。近几年，新疆也陆续发生BVDV感染病例［5］。

为了解牛病毒性腹泻－黏膜病的发生情况，2011年11月我们对哈巴河县188头牛随机采血，采用ELISA方法，进行了牛病毒性腹泻－黏膜病抗体检测，以期为重视、预防和控制该病提供参考。

1 材料与方法

1．1 材料 被检血清：哈巴河县20个行政村的100头牛、6个养殖小区的39头牛，以及6个中小养殖场的49头牛随机采血，分离血清，于－20℃保存备用。

检测试剂：牛病毒性腹泻－黏膜病毒ELISA抗体检测试剂盒（比利时Bio－X公司）。

主要仪器设备：酶标仪，96孔90°V型微量反应板，微量加样器和吸头，1．5mL离心管和离心管架，微量振荡器、温箱、冰箱、离心机。

1．2 方法 稀释样品：在96孔90°V型微量反应板上用血清稀释液2倍稀释待检血清和阴阳性血清。将稀释好的血清移到ELISA板上，每孔100μL，37℃温育2h。用洗涤液洗板3次，最后1次将孔拍干。

加酶标抗体：每孔100μL，37℃温育0．5h。洗板如前。

加底物：每孔100μL，18℃～24℃避光放置10 min。

加终止液：每孔50μL，终止反应。

结果判读：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值，计算后判定结果。

2 结果与分析

2．1 共检测188头牛血清，阳性170头，阳性率90．4%，其中中小养殖场的阳性率最高，为98%，行政村和养殖小区的感染率相近，分别为88%、87．2%。结果见表1。

表1 BVDV抗体检测

2．2 采样县海拔高，气候恶劣，冬季漫长，灾害天气频繁，时常对该县牲畜以及超载过牧的游牧生产方式造成严重威胁，牲畜未摆脱“夏壮、秋肥、冬瘦、春死”和大灾多死、小灾少死的局面。冬春季节牲畜抗病力明显下降是该病感染率高的原因之一。另据调查，养殖户科学饲养管理意识不强，外来车辆随意进出养殖场，牛羊混养，人畜共用水源，粪便不堆积处理，圈舍简陋卫生差，挤奶消毒不严等等饲养管理方面存在的问题也在一定程度上有助于该病的发生。2．3 该县未见有BVD记载，未开展过BVDV检测，也未注射过BVD疫苗，该病从何而来？据调查，1980年以前，该县牲畜只往外调运不引进，1980年以后开始引进良种牲畜，进行良种繁育。由此推测该病可能由引种带入。

该病不仅感染牛，也感染绵羊、山羊、猪、鹿以及野生反刍兽［6］。该县地处边境，牲畜以草场放牧为主，该县及附近县有野生动物活动。因此，不排除该病是由野生动物感染家畜或互有感染或家畜之间相互感染的可能；另外，该县牲畜繁殖有人工授精和自然交配，不排除由污染的精液传播本病的可能［7］。

3 讨论

3．1 近些年来随着生活水平的提高，人们对牛肉和牛奶的需求量日益增长，致使养牛业发展迅速。各地活畜交易频繁使得许多牛病蔓延扩散，我国的牛病毒性腹泻－黏膜病就是在引进国外牛时传入的，目前很多省市、自治区都有该病报道，且感染率高。从这次血清学调查结果看，该病在调查县普遍存在，且感染率高，应引起有关部门和养殖户的高度重视。

3．2 该病能引起感染牛免疫力低下而诱发广泛性感染，怀孕牛发生BVDV感染时可垂直传播给胎儿，致使出生的犊牛终身带毒，并在牛场中不断排放大量病毒，污染牛场，引起该病的传播［8］。这次调查结果说明，推测牛群中有持续性感染牛存在。下一步就是要对这些阳性牛进行抗原检测，一旦检测出抗原就可以确定哪些是持续性感染牛，从而对这些牛采取净化处理。

3．3 该病在国外引起高度重视，但在我国则不然。究其原因主要有二：一是该病对牛造成的死亡率较小，不会造成重大公共卫生问题，其经济和政治影响远远不及重大的人畜共患病，比如布鲁菌病、结核病、包虫病和口蹄疫严重，因此没有引起有关部门和养殖户的重视。其二是对该病的流行规律和危害的宣传力度不够，各级政府和养殖户对该病的危害了解不多，因此没有防制该病的意识。

3．4 综合防控措施建议 借鉴国外经验，建议应在以下几方面做好防控工作。

3．4．1 在全疆范围对该病进行一次普查：从检测结果看，在采样县BVD感染率高，推测新疆其他地方很可能也存在该病感染，因此有必要对牛进行一次全疆范围的普查，在采样点还可以对羊和猪进行该病抽查，因为BVD也感染羊和猪。以此了解和掌握该病在新疆的感染情况，为进一步有效防控该病提供依据。

3．4．2 淘汰病原阳性牛 在普查的基础上，进行该病病原检测，对病原阳性牛坚决予以淘汰，逐步净化牛群。

3．4．3 免疫预防 我国目前缺少国产BVDV疫苗，使用进口疫苗成本较高，在这种情况下，可以在该病感染率较高的地方先尝试使用猪瘟弱毒疫苗［9］。猪瘟弱毒疫苗在预防BVD中有一定作用，其预防效果也见于一些研究报道［10］，但使用猪瘟疫苗要慎重，因为该苗是活苗，它在牛体内是否会发生变异而带来其他问题不是很清楚。

3．4．4 加强检疫 不仅在新疆牛、羊、猪进出口检疫中要加大对该病的检疫力度，对于新疆各地之间引进牛时的检疫以及对冻精的检疫，也建议加上对该病的检测。

［1］ 李佑民，刘振润，武银莲．牛病毒性腹泻黏膜病病毒株（长春184）的分离与鉴定［J］．中国兽医学报，1983，3（2）：113－120．

［2］ 张俊杰，凌宗帅，黄凯，等．北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查［J］．中国奶牛，2010（10）：41－42．

［3］ 石冬梅，张华，邓红雨，等．河南省奶牛病毒性腹泻－黏膜病血清学调查［J］．中国农学通报，2011，27（7）：335－337．

［4］ 胥元鹏，陈学灿，崔正瀛，等．湖南规模奶牛场牛病毒性腹泻的血清学调查［J］．中国兽医杂志，2011，47（2）：36－37．

［5］ 牛国辉，季新成，段晓东，等．牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定［J］．新疆农业科学，2010，47（5）：986－991．

［6］ 吴文辉，卫秀余，余红梅，等．猪群BVDV感染状况调查及成因初步分析［J］．上海畜牧兽医通讯，2011（4）：35－37．

［7］ Gard J A，Givens M D，Stringfellow D A．Bovine viral diarrhea virus（BVDV）：Epidemiologic concerns relative to semen and embryos［J］．Theriogenology，2007，68：434－442．

［8］ 王连江，齐长明，陈燕军，等．牛病毒性腹泻病（BVD）的危害及防制［J］．中国奶牛，2007（9）：33－34．

［9］ 王慧慧，时坤，于本峰，等．牛病毒性腹泻疫苗的研究进展［J］．经济动物学报，2010（1）：59－62．

［10］刘亚刚，殷中琼，刘世贵，等．猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻／黏膜病的短期安全性与微量中和试验［J］．四川大学学报（自然科学版），2003（5）：970－973．