生存素在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

尚培中，王 金，马学柱，谷化平

胰腺癌是常见的消化系统恶性肿瘤。生存素(survivin)在肿瘤侵袭和转移过程中发挥了重要作用［1-5］。本研究应用免疫组织化学 EliVisionTMplus法对胰腺癌组织进行生存素检测，旨在探讨其表达与胰腺癌浸润和转移的关系，为判断患者预后提供理论依据，为指导临床治疗提供客观参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集解放军251医院2000年3月1日—2010年2月28日胰腺癌根治性手术切除标本70例，男44例，女26例;年龄33～79岁，平均62.3岁。均经组织病理学诊断为原发性胰腺导管腺癌，其中高、中、低分化腺癌分别为25例、26例和19例;在70例中，选取距肿瘤至少3 cm以上癌旁非肿瘤胰腺柔软组织标本15例。所有病例术前未行化疗、放疗及免疫治疗。依据国际抗癌联盟(international union for cancer control，UICC)第 6版标准［6］进行 TNM 分期。

1.2 方法 免疫组化染色采用EliVisionTMplus法。兔抗人生存素单克隆抗体为英国Abcam公司产品，EliVisionTMplus免疫组化染色试剂盒、DAB显色液均购自迈新生物技术有限公司。手术标本经10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规制备4 μm厚切片，65℃烘烤备用。采用微波－枸橼酸钠缓冲液修复抗原，生存素工作浓度为1∶15，染色步骤严格按照试剂盒说明书进行，以PBS溶液代替一抗做空白对照，以排除假阳性结果。15例癌旁非肿瘤胰腺组织标本作阴性对照，用随试剂所附已知阳性对照片作阳性对照。

1.3 结果判断标准 由两位有经验的病理医师在光学显微镜下对染色切片进行观察并确认。在400倍光镜下对每张切片任选5个视野进行观察。背景染色清晰，细胞质和(或)细胞膜呈棕黄色或棕褐色为阳性，阳性细胞占细胞总数＜10%为阴性，≥10%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 17.0软件包进行χ2检验，α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 生存素在不同胰腺组织中的表达 生存素在70例胰腺癌组织中阳性表达49例，阳性率为70.0%，在胰腺癌细胞中生存素阳性反应主要定位于细胞质内(图1A)。15例癌旁非肿瘤胰腺组织中均未见生存素表达(图1B)。

2.2 生存素表达与胰腺癌临床病理指标的关系在患者性别、发病年龄及肿瘤生长部位之间，生存素表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05);但在肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移、生存期之间，生存素表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

图1 生存素在胰腺癌组织、癌旁非肿瘤胰腺组织中的表达(EliVisionTMplus法×200)

3 讨论

浸润和转移是恶性肿瘤的本质特征，也是影响患者预后的一个重要因素。细胞过度增殖和凋亡受抑制是浸润和转移的主要机制，其能力强弱与癌基因的表达有关［7］。生存素又称存活素，系凋亡抑制因子(IAPs)家族中相对分子量最小的成员，位于染色体17q25，全长14.7 kb，因可延长细胞的生存而得名，是迄今为止发现的凋亡抑制效果最强的凋亡抑制因子之一，它能同时作用于caspase-3、caspase-7及caspase-9，并通过与其他凋亡抑制蛋白的作用，间接发挥其强大的抗凋亡作用［8-11］。其主要分布于胚胎及分化未成熟的组织中，在成人体内除胸腺、生殖腺中有微量表达外，所有分化成熟的组织，包括外周血白细胞、淋巴结、肝、脾、胰、肾、心、肺、脑以及骨骼肌组织中均无表达［11-12］。具有肿瘤特异性表达的特点，其表达与细胞周期密切相关，是G2/M期的调节基因，参与细胞周期调控、有丝分裂、肿瘤的恶性转化及发生、发展［11-13］。生存素在多种肿瘤组织内，如食管癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、胆囊癌、胰腺癌、结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌和50%以上的高分化淋巴瘤中表达水平异常升高，在肿瘤侵袭转移过程中发挥了重要作用，与肿瘤的分化、凋亡指数等多种临床指标、治疗敏感性以及患者预后均密切相关，被认为是一种多肿瘤的通用抗原，通过参与肿瘤血管形成以及对癌细胞凋亡的抑制，促进有丝分裂畸变，加速多倍体形成，得以继续分裂增殖，获得永生性，进而形成肿瘤邻近或远离部位的转移［14-16］。生存素强阳性表达的肿瘤细胞其耐药性更高，药物治疗效果更差，因而肿瘤患者预后往往也较差。

目前，国内外有关生存素在胰腺癌组织中表达的研究较少。Lee等［17］发现，生存素表达阳性的胰腺癌患者易发生神经周围浸润，而阴性的胰腺癌患者易发生静脉浸润。由于侵犯神经系统是胰腺癌特有的转移方式，也是决定手术后复发和预后的因素，因此生存素可以作为胰腺癌独立的预后指标［18］。笔者对比观察了胰腺癌组织和癌旁非肿瘤胰腺组织中生存素的表达状况，发现其在胰腺癌组织中阳性率为70.0%，而在癌旁非肿瘤胰腺组织中均呈阴性表达，证实其在胰腺癌的发生、发展中具有一定作用。进一步观察发现，生存素阳性表达与性别、年龄及胰腺癌生长部位无显著相关性;但与肿瘤大小、癌细胞分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移以及生存期显著相关，提示生存素表达与胰腺上皮细胞的恶性转化密切相关。生存素在肿瘤细胞中表达越强，其对癌细胞凋亡的抑制能力就越强，癌细胞的生存能力和肿瘤的恶性程度也随之增高，癌细胞更容易侵袭周围组织或发生转移，其高表达是预示胰腺癌预后不良的标志。本组生存素阴性表达的21例术后平均生存时间明显长于阳性表达的49例，说明监测生存素表达状况有助于更准确地估测预后。

Lee等［17］发现，生存素高表达的胰腺癌患者对化疗不敏感，而生存素低表达的胰腺癌患者对化疗有较好的效果。生存素在胰腺癌的高表达是导致胰腺癌对化疗及放疗不敏感的重要原因。慢病毒载体介导的靶向生存素的RNAi可有效抑制生存素的表达，降低胰腺癌细胞的增殖能力并增强其对化疗药物的敏感性［18］。张超等［19］观察生存素反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胰腺癌PANC细胞裸鼠移植瘤生长及瘤组织中生存素表达的影响，结果表明，注射ASODN可有效抑制人胰腺癌细胞增殖，诱导胰腺癌细胞凋亡，为胰腺癌的分子靶向治疗提供了实验依据。韩亚光等［20］报道，沙利度胺可下调人肝癌细胞株HepG2中生存素的表达，发挥抗肿瘤作用，但对胰腺癌的作用如何，尚待进一步研究。

综上所述，生存素在癌旁非肿瘤胰腺组织中呈阴性表达，而在胰腺癌组织高表达，且与肿瘤大小、癌细胞分化程度、淋巴结转移以及患者生存期显著相关。探讨生存素的生物学功能，对判断胰腺癌的生物学行为有重要价值，有助于指导临床对胰腺癌术后患者的综合治疗和随访，延长患者的生存期。

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