协日嘎-4喷雾剂含量测定方法的研究

杨怡侠 张 涛 宋宏春*

（1.内蒙古绿源生医药有限责任公司，内蒙古 呼和浩特 010000；2.内蒙古医科大学 ，内蒙古 呼和浩特 010051）

“协日嘎-4”是蒙古族验方[1,2]，该处方是由姜黄、黄柏、栀子和蒺藜（微炒）4味药材组成，原剂型为洗剂，临床用于治疗真菌性皮肤病和细菌性皮肤病。疗效确切。拟将其剂型改革为现代剂型喷雾剂。以方便患者使用。为保证产品质量的可控性，采用HPLC法对“协日嘎-4”气雾剂中盐酸小檗碱进行含量研究，[3]方法准确、简便、快速，能有效控制“协日嘎-4”气雾剂的质量。该研究为完善和提高药品质量标准提供依据。

1 实验材料

1.1 仪器：依利特p230高效液相色谱仪；uv230+紫外-可见检测器;EC2000色谱工作站。P230/P230p高压恒流泵；SinoChrom ODS-AP(4.6 mm×200 mm，5μm） 色谱柱。

1.2 试药：甲醇为色谱纯试剂,水为双重蒸馏水。小檗碱对照品(批号为715-200010,供含量测定用，由中国药品生物制品检定所购入)。其它试剂均为分析纯。协日嘎-4气雾剂，由内蒙古自治区医科大学制剂室制备，批号20120628。

2 含量测定方法

精密量取“协日嘎 -4”气雾剂 1.5mL，加入 50mL容量瓶中，用甲醇-水=50：50定容 。用微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液于EP管中，进样20μL，以乙腈 -水（每100mL加入0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸钠）(53：47)为流动相，在 265nm波长处测定“协日嘎 -4”气雾剂中盐酸小檗碱的含量[4]。

3 方法学考察

3.1 色谱条件：色谱柱为 SinoChrom ODS-AP（4.6 mm×200 mm，5μm），乙腈 -水（100mL中加入 0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸钠）(53:47)为流动相，流速1.0mL·min-1，柱温 25℃，检测波长为 265nm。

3.2 溶液的制备

3.2.1 标准品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品16.26mg,置 25mL容量瓶中，用乙腈 -水(50：50)（100mL中加入0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸钠）稀释至刻度，得到0.6504mg·mL-1的标准品溶液。

3.2.2 供试品溶液的制备：精密吸取栀黄提取液2mL，置于 50mL容量瓶中，用甲醇 -水(50：50)定容，即得。标准品溶液和供试品溶液的HPLC色谱图见图 1和图 2。

图1 标准品溶液HPLC色谱图

图2 供试品溶液HPLC色谱图

3.3 线性关系考察：精密吸取标准品溶液0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL，置 10mL容量瓶中，用乙腈-水（50：50）定容至刻度，摇匀。进样20μL，每份样品 2次，实验数据见表1。以峰面积对标准品溶液浓度（μg·mL-1）进行回归分析.试验结果表明，盐酸小檗碱在 3.25μg·mL-1～19.50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。回归方程为 Y=99.441X+78.435，r=0.9999。 标准曲线见图3。

表1 标准曲线数据表

图3 盐酸小檗碱的标准曲线

3.4 精密度试验：精密吸取样品液2mL置于50mL容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容，过滤，收集续滤液，连续平行进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积。试验结果表明,该方法精密度良好，RSD=0.94（%）。实验结果表明该方法重现性良好，RSD=0.70%。结果见表2。

表2 精密度试验结果

3.5 重复性试验：精密吸取样品液2mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容。平行操作 5份，进样，每份溶液测定两次，实验结果见表3。

3.6 稳定性试验：精密吸取样品液2mL，置于50mL容量瓶中，以甲醇：水（50：50）定容，每隔 120min测定一次峰面积，连续测定 5次，即分别于 0h、2h、4h、6h、8h进样测定。实验结果表明样品溶液在8h内稳定。结果见表4。

3.7 加样回收试验：精密吸取样品液1mL，置于50mL容量瓶中，然后再精密吸取标准品溶液0.50mL置同一容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容，平行操作 5份，每份测定 2次。实验结果表明该方法平均加样回收率为102.04%，RSD为 1.65%，符合方法学要求。实验结果见表5。

表3 重现性试验结果

表4 稳定性试验结果

表5 加样回收试验结果

4 结 果

本研究应用高效液相色谱法测定“协日嘎-4”气雾剂中盐酸小檗碱的含量，并对测定的线性范围（3.25μg·mL-1～19.50μg·mL-1），精密度（RSD=0.94），重现性（RSD=1.2），稳定性（RSD=1.28%）、平均加样回收率为102.04%，RSD=1.65%进行了考察，结果均符合要求，表明可以作为“协日嘎-4”气雾剂中盐酸小檗碱的含量的测定方法。

[1]蒙医药编辑委员会.中国医学百科全书(蒙药学)[M].上海科学技术出版社,1993,12（2）：251.

[2]布日额.蒙药材姜黄本草考证[J].中药材,2007,2(2):239-240.

[3]邢俊波,刘云.正交设计优选黄柏中小檗碱的提取工艺[J].时珍国医国药,2003,14（3）：129-130.

[4]程咏梅,陈仁华.小檗碱提取工艺的研究[J].时珍国医国药,2007,18（6）：1445-1447.