VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达与胃癌淋巴结转移的关系

高会霞 王彬 周希山

VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达与胃癌淋巴结转移的关系

高会霞 王彬 周希山

目的 观察血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体VEGFR-3与神经细胞黏附分子-接触蛋白-1(contactin-1,CNTN-1)在胃癌组织中的表达情况，并分析其与胃癌淋巴结转移和其临床病理参数间的关系。方法 56例胃癌患者按淋巴结转移情况分成：实验组(淋巴结转移阳性患者34例)和对照组(淋巴结转移阴性患者22例)。对所有肿瘤组织标本行免疫组化染色检测VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达，分析三者之间的关系及其与临床病理特征之间的关系。结果 实验组：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为67.64%、82.35%及76.47%。对照组：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表达与VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表达(P<0.05)存在明显相关性。三者的表达与TNM分期和淋巴结转移均有关(均P<0.05)。结论 VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1三者均在胃癌组织中高表达。三者的表达情况与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期关系密切。而且认为VEGF-C促进胃癌的淋巴管生成和淋巴结转移有可能是通过CNTN-1通路介导的。

胃癌；血管内皮生长因子；接触蛋白-1

胃癌的治疗手段是手术，肿瘤淋巴道转移是术后死亡的主要原因。研究发现血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和其受体VEGFR-3的表达与肿瘤的淋巴管生成和淋巴结转移密切相关[1]。本课题应用免疫组化方法检测VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达与胃癌淋巴结转移的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组56例标本系本院胃肠外科2010年1月～2012年6月期间接受胃癌根治术患者的胃癌组织标本，男性37例，女性19例；年龄32～76岁，中位年龄61岁。按1997年国际抗癌联盟标准行TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例。肿瘤大小按肿瘤原发灶的最长径判断，介于1.0～9.2 cm之间，中位值5.1 cm。淋巴结转移阳性者34例，淋巴结转移阴性者22例。术中所取标本均经病理学证实。

1.2 试剂 兔抗人VEGFR-3多克隆抗体、兔抗人CNTN-1多克隆抗体、羊抗人VEGF-C多克隆抗体均购于英国Abcam公司；DAB显色剂和免疫组化链球菌亲和素-生物素-过氧化酶复合物法(SABC)试剂盒购于美国Santa Cruz公司。

1.3 实验方法 所有标本均制成4 μm厚的连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，然后置于新鲜配制的0.3%的过氧化氢溶液浸泡，蒸馏水冲洗后用枸橼酸钠缓冲液浸泡，微波修复，PBS冲洗，血清封闭，加稀释后的一抗4℃孵育过夜，再加生物素化二抗室温孵育0.5 h，PBS冲洗，加SABC试剂室温放置0.5 h，再次PBS冲洗，DAB显色，蒸馏水冲洗苏木素复染，盐酸酒精分化。最后脱水、透明、封片、镜检。阳性对照为试剂公司提供的阳性切片，PBS替代一抗行阴性对照染色。

1.4 统计学方法 用SPSS 17.0软件行统计学处理。用χ2检验分析VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1蛋白的表达与胃癌临床病理特征之间的关系，r相关分析法判断三者间的相关性。检验水准α=0.05。

2 结果

实验组：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为67.64%、82.35%及76.47%。对照组：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表达与VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表达(P<0.05)存在明显相关性，见表1。三者的表达与TNM分期和淋巴结转移均有关(均P<0.05)。

表1 实验组和对照组VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1阳性率比较

3 讨论

恶性肿瘤细胞具有异质性。研究发现VEGF-C在肿瘤的淋巴管形成中起了重要作用，参与了肿瘤细胞的播散和区域淋巴结的转移[2]。国内学者认为检测VEGF-C的表达可作为甲状腺乳头状癌[3]和乳腺癌[4]发生淋巴结转移的预测指标。Wang等研究发现其特异性受体VEGFR-3参与了新生淋巴管的形成，肿瘤细胞的浸润和远处转移[5]。近年来，通过基因芯片技术分析侵袭性的肺癌细胞基因表达的差异性，发现CNTN-1是与肿瘤侵袭相关的基因。CNTN-1在胃癌组织中高表达， r相关分析发现，CNTN-1与VEGF-C/VEGFR-3轴之间存在显著相关性。

本研究发现，VEGF-C/VEGFR-3轴在胃癌组织的淋巴管生成和淋巴转移过程中具有重要作用。同时，CNTN-1蛋白表达还与VEGF-C及VEGFR-3蛋白表达相关，提示CNTN-1或许是VEGF-C/VEGFR-3轴作用通路上的一个重要分子，可能参与了肿瘤的淋巴管生成及淋巴结转移，这一过程的具体机制，需要以后更深层次的研究。

[1] Albuquerque RJ, Hayashi T, Cho WG, et al. Alt ernatively spliced vascular endothelial growth factor receptor-2 is an essential endogenous inhibitor of lymphatic vessel growth.Nat Med, 2009, 15(9):1023-1030.

[2] Da MX,Wu XT,Wang J,et al. Expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor-C correlates with lymphangiogenesis and lymphatic invasion in human gastric cancer.Arch Med Res, 2008, 39(1):92-99.

[3] 吴立刚,刘奇伦,胡志强.MMP-2 和VEGF-C 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义.中国普外基础与临床杂志,2009,16(11):906-910.

[4] 黄桂林,侯吉学,吴毅平.乳腺癌患者血清VEGF-C水平与癌组织C-erbB-2蛋白的表达及临床意义.中国普外基础与临床杂志,2009,16(7):514-517.

[5] Wang XL,Fang JP,Tang RY,et al. Different significance between intratumoral and peritumoral lymphatic vessel density in gastric can cer:a retrospective study of 123 cases.BMC Cancer, 2010(10):299-310.

461000河南省许昌市中心医院(高会霞 王彬);漯河市第五人民医院(周希山)