生长年限和采收季节对肉苁蓉中有效成分的影响△

2013-09-11庞金虎盛晋华张雄杰

中国民族医药杂志 2013年1期

庞金虎盛晋华张雄杰

(1．内蒙古农业大学农学院，内蒙古呼和浩特 010019;2．内蒙古天际绿洲特色生物资源研发中心，内蒙古呼和浩特 010018)

肉苁蓉(Cistanche desertiola Y．C．Ma)是以内蒙古自治区为代表的西北地区独具特色的优势药材，为列当科肉苁蓉属多年生的专性根寄生植物［1］，同时也是国家二级保护植物，并被《国际野生植物保护名录》收入［2］。现代药理学研究表明，肉苁蓉在增强免疫力、补肾壮阳、益精血、润肠通便、调节内分泌及抗氧化、衰老等方面具有不可替代的作用［3－5］。它是使用频率最高的补肾中药，有“沙漠人参”之美誉［6］。

本文以内蒙古阿拉善盟阿左旗人工栽培的肉苁蓉为研究对象，对不同生长年限和采收季节肉苁蓉有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量进行了测定，以期探索肉苁蓉最佳采收年限与采收季节，保证肉苁蓉有效成分的稳定性。

1 仪器与试药

1．1 仪器

美国Waters e2695高效液相色谱仪，Waters二极管阵列检测器，Empower色谱工作站;ME5型电子分析天平(德国sartorius公司)，中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，KQ－500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DHG－9145A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。

1．2 试药

甲醇为色谱纯(Promptar Company Ltd．)，甲酸为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)，水为超纯水。对照品松果菊苷和毛蕊花糖苷均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为:MUST－11052403和MUST－10012401。

实验中所用肉苁蓉药材采于内蒙古阿拉善盟阿左旗肉苁蓉种植基地，经内蒙古农业大学农学院盛晋华教授鉴定。

图1 对照品与供试品HPLC图

2 方法与结果

2．1 松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定

2．1．1 色谱条件:色谱柱为 Apollo C18(4．6mm ×250mm，5μm);流动相为甲醇～0．1%甲酸梯度洗脱，按甲醇～0．1%甲酸(26．5∶73．5)，保持 min，3 min 内，换成．5∶70．5，保持 min，流速．8 mL·min－1;检测波长nm;柱温31℃;理论塔板数按松果菊苷峰计不低于12000。见图1。

2．1．2 对照品溶液的制备:精密称取松果菊苷和毛蕊花糖苷对照品1．405mg，1．009 mg，置5mL 量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，制成含松果菊苷、毛蕊花糖苷0．281mg·mL－1，0．2018mg·mL－1的对照品溶液。

2．1．3 供试液的制备:取肉苁蓉药材粉末(过五号筛)1．0g，置100 mL烧瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，浸泡30 min，超声(250 W，35 kHz)处理40 min，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，静置，取上清液用0．45μm微孔滤膜滤过，滤液置液相进样瓶中。

2．1．4 标准曲线制作:精密吸取对照品溶液．2、0．5、1．0、2．0、5．0、10．0、20．0、30．0、40．0μL，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积值为纵坐标(Y)、进样量(μg)为横坐标(X)，得回归方程。松果菊苷:Y=1．157X+218．553(r=0．9999，n=9)，线性范围0．06～11．24 μg;毛蕊花糖苷:Y=1．767X －50．611(r=0．9999，n=9)，线性范围．04 ～8．07 μg。

2．1．5 精密度试验:取供试品溶液，连续进样6次测定峰面积，松果菊苷峰保留时间和峰面积的RSD分别为0．30%和2．56%，毛蕊花糖苷峰保留时间和峰面积的RSD分别为0．22%和1．31%，表明仪器精密度良好。

2．1．6 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在0、8、16、24、48h测定峰面积，松果菊苷峰和毛蕊花糖苷峰保留时间和峰面积的 RSD 分别为．31%，0．32% 和．27%，0．83%，表明供试品溶液在48 h内稳定。

2．1．7 重现性试验:称取同批样品6份，按上述方法测定，松果菊苷峰和毛蕊花糖苷峰保留时间和峰面积的RSD分别为．43%，0．53%和．38%，0．44%，表明重现性良好。

2．1．8 回收率试验:取已测定量的肉苁蓉样品1．0 g共6份分两组，精密加入松果菊苷对照品溶液(0．2218mg·mL－1)和毛蕊花糖苷对照品溶液(0．2357mg·mL－1)2、4、6 mL，按上述色谱条件测定，计算回收率。松果菊苷的平均回收率为99．37%，RSD为1．56%;毛蕊花糖苷的平均回收率为．13%，RSD 为1．15%。

2．2 不同生长年限对肉苁蓉有效成分的影响

以采集的不同生长年限肉苁蓉为样品(个体长度皆大于25cm)，经切制(切片厚度为0．5～1cm)和80℃烘干至恒重后，粉碎，过五号筛以待用。按2．1．1色谱条件和2．1．3方法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，进样，测定峰面积，按外标二点法计算含量。测定样品中每根个体肉苁蓉中有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量，取平均值，即得样品中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量。由表1可见，经方差分析，不同生长年限下肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量均达极显著水平，F值分别为14．8和18．2。3年生及多年生肉苁蓉中两种有效成分含量最高。SSR多重比较结果:3年生肉苁蓉的松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量分别为12．08mg·g－1和19．24mg·g－1，与多年生的2种有效成分含量分别为12．46mg·g－1和．32mg·g－1无显著差异，都极显著高于年生、1年生和半年生的2种有效成分含量。

表1 不同生长年限肉苁蓉中有效成分的含量(mg·g－1)

2．3 不同采收季节对肉苁蓉有效成分的影响

以春季和秋季采收的肉苁蓉为样品(个体长度均大于25cm)，按照上述方法测得样品中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量。经方差分析后得，不同采收季节肉苁蓉的松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量均达极显著水平，表2可见，F值分别为6．7和7．3。秋季采收肉苁蓉的2种有效成分高于春季采收。SSR多重比较结果:秋季采收肉苁蓉中的松果菊苷和毛蕊花糖苷含量分别为6．35mg·g－1和5．47mg·g－1，极显著高于春季采收肉苁蓉的2种有效成分分别为3．12mg·g－1和．41mg·g－1。