阿归养血糖浆主要药物的鉴别和含量测定

徐泽鹤 明少兰

湖北省鄂州市中医医院，湖北 鄂州 436000

阿归养血糖浆由当归、白芍、黄芪、甘草 (蜜炙)、川芎等九味中药组成，具有益气补血的作用，用于气血亏虚，面色萎黄、眩晕乏力、肌肉消瘦、经闭、赤白带下。近年研究发现本品可抑制黑色素合成、清除自由基、促进胶原蛋白合成和改善血液流变学及微循环[1]。该药收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十二分册，为更加有效地控制阿归养血糖浆的产品质量，实验采用TCL法对阿归养血糖浆中的当归、黄芪进行鉴别，利用HPLC法对阿归养血糖浆中的白芍进行含量测定。本实验所采用的鉴别和含量测定方法简便易操作，所得结果令人满意，可考虑作为该药品的质量控制方法。

1 仪器与试药

岛津SPD－10Avp∕10AVvp;岛津LC－10ATvp;岛津2010色谱数据工作站;BS124S型电子天平。硅胶G(青岛海洋化工厂)，乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。芍药苷 (批号:110736－200933)、黄芪甲苷 (批号:110781－200611)对照品和当归对照药材 (批号:120927－200812)均由中国药品生物制品检定所提供;阿归养血糖浆由湖北东信惠济堂药业有限公司提供 (批号:20090517、20091104、20100326，规格:200mL)，各阴性对照品均由本院制剂室 (具备制剂GMP生产许可证)根据生产工艺和制备方法进行生产。

2 成分鉴别

2.1 当归的鉴别 取本品10mL，加乙醚振摇提取3次，每次20mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液;按处方取各药材 (不含当归药材)，照本品工艺及上述方法制成阴性对照品溶液;另取当归对照药材0.5g，加乙醚15mL，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯 (9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (365nm)下检视。通过对供试品色谱检测，在供试产品中与对照产品色谱相对应的位置上，显示出了与对照产品相同颜色的荧光主斑点。阴性对照组显示无干扰。

2.2 黄芪的鉴别 取阿归养血糖浆20mL以水饱和正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇，以1%氨水洗涤2次，弃去氨水，正丁醇蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液;按处方取各药材 (不含黄芪药材)，照本品工艺及上述方法制成阴性对照品溶液;另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取供试品溶液10μL、对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－水(13:6:2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。产品放置在105℃加热，直至斑点显色清晰为止。结果显示，供试品在与对照品色谱相应的位置上，显示出相同颜色的斑点，阴性对照组显示无干扰。

3 含量测定

3.1 色谱条件和系统适用性实验 色谱柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)柱;流动相:乙腈 －水 (15:85);流速 1.0mL/min;检测波长 230nm[3－4];柱温:30℃;进样量20μL，阴性对照品无干扰。理论塔板数如按照芍药苷峰计算，其数据不低于2000。

3.2 溶液制备 对照品溶液制备:按照要求称取干燥至恒重的芍药苷6.1mg置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至所需刻度，充分摇匀，即可得到61μg/mL的芍药苷溶液。供试品溶液制备:称量5g阿归养血糖浆，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至所需刻度，充分摇匀，利用0.45μm滤膜过滤溶液，即得。阴性对照组溶液制备:按照要求称取白芍，参照上述供试品的制备方法，制备阴性对照组。

3.3 标准曲线制备 按照要求吸取芍药苷对照品溶液2、4、8、12、16、20μL，分别注入色谱仪中，按照上述的色谱条件进行检测。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作回归方程分别为:Y=1028.596X+39.48，r=0.9996(n=6)，且在0.122～1.22μg范围内呈现良好的线性关系。

3.4 精密度试验 吸取对照品芍药苷溶液10μL，并且重复进样6次，按照上述的色谱条件测定峰面积，RSD=1.67%，显示精密度良好。

3.5 重复性试验 吸取同一批号的阿归养血糖浆6份，按上述方法制备供试品溶液并进行测定，芍药苷的RSD=1.35%。结果表明，本试验所采取的方法重复性良好。

3.6 稳定性实验 吸取同一批的供试品阿归养血糖浆溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12h进样20μL，按上述色谱条件进行测定，RSD=1.78%。结果表明，本试验设计的供试品溶液在12h内稳定。

3.7 专属性试验 取上述的阴性对照组溶液10μL，按照上述条件进行测定。结果表明，阴性对照组样品无干扰(见图1)。

3.8 加样回收试验 精取已测知含量 (含芍药苷0.1628mg/mL)的同一批号的阿归养血糖浆2.5g，共6份，再分别精确加入含0.1316mg/mL的芍药苷对照品溶液3.0mL，按上述方法制成供试品溶液。按上述色谱条件进行测定，结果见表1。

图1 HPLC色谱图

表1 芍药苷加样回收试验 (N=6)

3.9 样品的测定 分别称取3批样品 (批号:20090517、20091104、20100326)，按上述方法制备供试品溶液。吸取20μL供试品阿归养血糖浆溶液与对照品芍药苷溶液10μL，分别依次注入色谱仪中，按照上述的色谱条件进行测定峰面积并计算。结果标明，阿归养血糖浆中的芍药苷含量分别为0.1628、0.1732、0.1563mg/mL.

4 讨论

阿归养血糖浆是属于滋补性药品，近年来又发现其具有美容功效[1]，是深受女性喜爱的OTC药品之一，而其原有的质量标准不能满足其质量控制，有必要对其质量标准进行提高。

在当归的薄层鉴别中，参照中国药典 (2010版)四物合剂，阴性的制备应同时去除川芎，考虑到本品中当归投料量 (257g)数十倍于川芎投料量 (8g)，在实验中没有出现干扰现象，可能是在本品中，川芎的检出限不以干扰当归的鉴别。所以，在阴性的制备中没有去除川芎。

在白芍的含量测定中，样品曾先用饱和的正丁醇溶液萃取。浓缩，蒸干，再加甲醇溶解，测定计算。结果表明，采用本方法的测量值更高，且操作方法简单，所以样品的处理本实验方法。

[1]徐晓月，张广伟，李展，等.阿归养血糖浆美容作用的实验分析[J].河南大学学报，2009，28(1):13－16.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [M].北京:中国医药科技出版社，2010:649－650、附录34－35.