不同来源枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸含量比较研究

郭 娜 徐榕青 林文津 张亚敏 林玉霖

1.福建中医药大学，福建 福州 350003;2.福建省医学科学研究院，福建省医学测试重点实验室，福建 福州 350001;3.福建省莆田市医学科学研究所，福建 莆田 351100

枇杷叶为蔷薇科枇杷属常绿小乔木枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Linld.干燥叶，是常用传统中药，也是福建道地药材之一。枇杷叶味苦，微辛，性微寒，归肺、胃经，具有清肺镇咳、降逆止呕的治疗功效［1］。现代药理研究表明，枇杷叶主要成分为三萜酸类的齐墩果酸、熊果酸，具有抗炎、抗病毒、降低血糖等作用［2－4］。现行版中国药典已将齐墩果酸、熊果酸含量测定列入枇杷叶项下质量控制项目。福建枇杷叶不仅资源储量大，而且枇杷叶种源极为丰富。本研究采用HPLC法比较福建不同种源枇杷叶中齐墩果酸、熊果酸含量，旨在为枇杷叶的采收及品质评价提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 材料 不同种源枇杷叶共23份，其中19份采自福建莆田常太枇杷叶GAP生产基地，树龄5年;4份采自莆田常太镇野生枇杷树。所有样本经福建莆田市中医药研究所林力强鉴定，凭证标本存于福建莆田医学科学研究所标本室。

1.2 仪器及试剂 LC－20A液相色谱仪(岛津公司);AL204型电子分析天平(梅特勒－托利多公司);5L/H50w型超纯水机(艾科浦公司);KQ2200E型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110709－201206)、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110742－200519)，乙腈、甲醇(色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 齐墩果酸、熊果酸含量测定多采用HPLC法［5－8］，齐墩果酸和熊果酸是一对结构相似、性质相近的同分异构体，常以结合或游离的形式同时存在于植物中，较难分离［9］。为了同时检测出两种成分，并得到较高的响应，选择210nm为检测波长。

色谱条件:色谱柱为 Inertsil ODS－SP(5μm，4.6×250mm);乙腈－甲醇－醋酸铵(67:12:21)为流动相;柱温:室温;进样量10μl;检测波长210nm。此色谱条件下齐墩果酸与熊果酸分离度良好，理论塔板数不低于5000。

2.2 溶液的制备 取枇杷叶粉末1g，精密称定，按料液比1:50加入95%乙醇，超声萃取30min，过滤，滤液浓缩，静置备用。加95%乙醇定容至5ml，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。精密称量齐墩果酸、熊果酸对照品，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别制成0.5mg·ml－1的对照品溶液。

2.3 线性关系 精密吸取齐墩果酸与熊果酸对照品溶液，分别制成浓度为 0.3125、0.625、1.25、2.5、5μg·ml－1和1.25、2.5、5、10、20μg·ml－1的溶液，用 0.45μm 的微孔滤膜，取续滤液进样，以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，建立标准曲线方程。齐墩果酸标准曲线方程:y=49287x－18238，R2=0.9919(n=5)，熊果酸标准曲线方程:y=41244x+1546，R2=0.9981(n=5)，线性关系良好。

2.4 精密度实验 取同一浓度对照品溶液，反复进样6次，齐墩果酸与熊果酸色谱峰峰面积的RSD分别为0.6%和0.8%，表明仪器的精密度良好。

2.5 重复性实验 取同一供试样品粉末6份，按上述方法分别独立制备供试品溶液，进样检测。齐墩果酸与熊果酸色谱峰峰面积的RSD值分别为1.4%与1.3%，方法重复性良好。

2.6 稳定性实验 精密吸取同一份供试品溶，分别在0、1、2、4、6、10、24h进样检测，齐墩果酸与熊果酸色谱峰峰面积的RSD值分别为1.8%与2.0%，24小时内测定稳定性良好。

2.7 回收率 齐墩果酸、熊果酸平均加样回收率分别为98.5%(n=6)和101.2%(n=6)。

2.8 样品测定 取23个福建不同种源枇杷叶样本，按上法制备供试品溶液产并进样测定，结果见表1。

表1 福建不同种源枇杷叶中齐墩果酸与熊果酸含量

3 讨论

23个不同种源枇杷叶中齐墩果酸与熊果酸总量具有显著差异性。总量最高者为解放钟种源枇杷叶(1.78%)，最低者为湖南白沙种源枇杷叶(0.57%)，两者相差三倍多。齐墩果酸、熊果酸含量最高的均为解放钟种源枇杷叶，分别为0.29%和1.49%;齐墩果酸含量最低的为夹脚种源枇杷叶(0.09%)，熊果酸含量最低为湖南白沙种源枇杷叶(0.45%)。

解放钟、早钟6号、长红3号为福建枇杷主栽品种，也是福建枇杷叶的主要来源，实验表明这三个种源枇杷叶中齐墩果酸、熊果酸总量较高，平均高达1.60%，是中国药典含量规定的2倍以上，提示解放钟、早钟6号、长红3号福建枇杷叶具有较高的药用品质。

与采自福建枇杷叶GAP基地的样本相比，单边种、湖南白沙、软条白沙、夹脚4个野生枇杷叶中齐墩果酸、熊果酸总量较低，平均仅为0.72%。其中湖南白沙、夹脚的总量低于中国药典含量规定(齐墩果酸、熊果酸总量不低于0.7%)，为不合格品。对于同一种源枇杷叶野生品与栽培品的化学成分比较，有待进一步研究。

枇杷品种极为丰富，初步统计有14个种，1个新变种，600多个品种［10］。枇杷作为经济作物，近年来主要从其果实的丰产性、抗逆性、商品性及耐贮性等角度出发，选育推广了一系列新品种，但品种繁杂也给枇杷叶的药用品质带来重要影响。实验表明不同种源枇杷叶中齐墩果酸与熊果酸总量具有显著性差异，因此枇杷叶药材的采收有必要考虑种源因素，以保证福建主要道地药材枇杷叶的优良品质。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(第一部)［M］.北京:北京化学工业出版社，2005:142.

［2］李婷，林文津，徐榕青.枇杷叶的化学成分和药理作用研究进展［J］.中国野生植物资源，2010，29(5):11－14.

［3］De Tommasi N，De simone F，Cirino G，et al.Hypoglycemic effect of sesquiterpene glycosides and polyhydroxylated trierpenoids ofEriobotrya japonica［J］.PlantaMed，1991，57(5):414－416.

［4］葛金芳，李俊，胡成穆，等.枇杷叶三萜酸的免疫调节作用研究［J］.中国药理学通报，2006，22(10):1194－1195.

［5］吕寒，习超鹏，陈剑，等.不同产地枇杷叶中三萜酸类成分的含量比较［J］.时珍国医国药，2010，21(12):3170－3171.

［6］陈世斌，徐社金，江小蓉，等.高效液相色谱法测定枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］.今日药学，2009，19(2):46－47.

［7］杜丰玉，陈钧，许月明.高效液相色谱法测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸含量［J］.中国医院药学杂志，2008，28(1):21－23.

［8］王颖，余晓琴.HPLC同时测定枇杷叶糖浆中熊果酸和齐墩果酸含量［J］.中成药，2009，31(9):1389－1391.

［9］杜丰玉，陈钧，宣寒，等.RP－HPLC测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量［J］.中成药，2006，28(12):1790－1793.

［10］章恢志，彭抒昂，蔡礼鸿，等.中国枇杷属种质资源及普通枇杷起源研究［J］.园艺学报，1990，17(1):5－11.