宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中JNK、STAT3蛋白的表达变化及意义

冯 姝，瞿全新

(天津医科大学第一临床学院，天津300070)

宫颈癌(CC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中居第二位。全球每年约有20万妇女死于此病，其中5．3万发生在中国。早发现、早治疗可使CC患者的生存率明显提高。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用。信号转导及转录活化因子3(Signal transducer and activator of transcription 3，Stat3)与肿瘤血管生成、免疫抑制及肿瘤侵袭和转移有关，并通过多途径影响肿瘤的发生、发展。本研究采用免疫组化链霉亲和素—生物素—过氧化物酶(SABC)法检测了CC和宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织中JNK、STAT3蛋白的表达情况，旨在为阐明CC与宫颈癌前病变的发病机制奠定实验基础，同时为临床预测宫颈癌前病变的发展提供客观依据。

1 资料与方法

1．1 临床资料 天津市第一中心医院2005年1月～2008年12月确诊的CIN患者105例，年龄22～65岁(中位年龄38岁)，其中CINⅠ38例、CINⅡ33例、CINⅢ34例;CC患者66例，年龄21～76岁(≤35岁11例、＞35岁55例，中位年龄47岁)，病理分类为鳞状细胞癌56例、腺癌8例、腺鳞癌2例，组织学分级为低分化23例、中分化33例、高分化10例，按2009年国际妇产科联盟(FIGO)临床分期标准I期19例、Ⅱ期31例、Ⅲ期13例、Ⅳ期3例，手术或影像学检查证实有淋巴结转移21例。上述患者术前均未行放疗、化疗或激素治疗，并于手术过程中留取病变组织经病理专家确诊。同时选取10份正常宫颈组织作为对照(NCE)。

1．2 JNK、STAT3蛋白表达的检测 采用免疫组化SABC法。实验步骤按试剂盒要求进行(试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司):切片染色后经梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树脂封固，显微镜下观察，以细胞质、细胞核内或细胞膜上出现棕黄色颗粒为阳性标志。JNK蛋白表达于细胞质或细胞核，STAT3蛋白主要表达于细胞质或细胞膜(少数见于细胞核)。根据文献［1］以半定量方法判定染色结果，每张切片光镜下(400×)观察10个视野，每个视野计数100个细胞，共计1 000个细胞，阳性细胞数＜5%为0分、5% ～25%为1分、26% ～50%为2分、＞50%为3分;细胞质、细胞核或细胞膜无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。上述两分值的乘积≥1判为阳性，＜1判为阴性。

1．3 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件。组间率的比较用χ2检验，相关关系的分析用Spearman相关分析法。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 三种组织中JNK、STAT3蛋白的表达 JNK、STAT3蛋白在NCE、CIN及CC组织中的阳性表达率均呈逐渐增高趋势，两两比较均有显著差异，详见表1。

表1 三种组织中JNK、STAT3蛋白阳性表达率比较(%)

2．2 JNK、STAT3蛋白的表达与CC临床病理参数的关系 JNK、STAT3蛋白的表达与CC患者的年龄、临床分期、淋巴结转移均无关(P＞0．05)，但与肿瘤组织学分级有关(P＜0．005，χ2值分别为12．08、12．61)，详见表 2。

表2 JNK、STAT3蛋白的表达与CC临床病理参数的关系

3 讨论

3．1 JNK蛋白在宫颈癌前病变、CC组织中的表达及临床意义 JNK家族是1990年被发现的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族成员之一，属进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。大量实验显示，JNK信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应及多种人类疾病的发生与发展中起至关重要的作用。朱德淼等［2］研究显示，JNK1在胃癌组织中的高表达率为45．16%、低表达率为54．84%，JNK2在胃癌组织中的高表达率为46．77%、低表达率为53．23%，高、中分化胃癌组织中的JNK1、JNK2表达显著高于低分化胃癌组织，且二者均与淋巴结转移有关，而与患者年龄、性别、肿块大小及PTNM分期无关。

本研究结果显示，CIN和CC组织中JNK蛋白阳性表达率均显著高于NCE组织，提示JNK异常表达可能参与了宫颈癌前病变、CC的发生及发展，并支持CIN与CC为同一疾病连续病变的学说。本研究还显示，CC组织中JNK蛋白的表达与肿瘤组织学分级有关(在分化差的CC组织中的阳性表达率明显高于分化好的组织)，而与患者年龄、临床分期、盆腔淋巴结转移无关。提示JNK蛋白过表达可能与CC预后不良有关。因此，JNK有可能成为判断CC预后的一个重要参考指标。

3．2 STAT3蛋白在宫颈癌前病变、CC组织中的表达及临床意义 STAT3是Shuai等［3］于1993年在研究γ-干扰素诱导的细胞基因表达中首次发现的重要信号分子。研究发现，人类多种肿瘤中可检测到STAT表达，如头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、白血病等［4～8］。Yang等用免疫组化方法对56例CIN患者病变组织中STAT3和Ki-67蛋白的表达进行了研究，结果发现p-STAT3染色主要位于核内，在CINⅢ组织中阳性表达率为76．92%、在 CINⅠ/Ⅱ中阳性表达率为 13．33%，两者比较差异有统计学意义(P＜0．001)。表明p-SATA3异常表达与CIN分级和细胞增殖有关，并可能作为评价CC预后的一个新指标。Yang等进一步分析了STAT3和Ki-67表达与CIN的关系，发现高级别CIN和CC组织中STAT3的表达明显高于正常宫颈组织和CINⅠ组织。本研究结果显示，STAT3蛋白在NCE、CIN及CC组织中的阳性表达率呈逐渐增高趋势，两两比较均有显著差异。提示STAT3蛋白异常表达在宫颈病变发生与进展中发挥重要作用。本研究还显示，STAT3蛋白表达与CC组织学分级有关，但与患者年龄、临床分期、淋巴结转移等临床病理特征无关。因此，STAT3蛋白异常表达有可能作为判断CC预后不良的一个客观指标。

综上所述，JNK、STAT3蛋白在CIN及CC组织中的表达增加，与CC发生、发展及分化有关;检测两者表达可作为判断CC患者预后不良的客观指标及指导个体化治疗的依据。

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［3］Shuai K，Stark GR，Kerr IM，et al．A single phosphotyrosine residue of STAT91 required for gene activation by interferon gamma［J］．Science，1993，261(5129):1744-1746．

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［5］Weber-Nordt RM，Egen C，Wehinger J，et al．Constitutive activation of STAT proteins in primary lymphoid and myeloid leukemia cells and in Epstein-Barr virus(EBV)-related lymphoma cell line［J］．Blood，1996，88(3):809-816．

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