济南汉族人群人类白细胞抗原B座位等位基因多态性分析

刘 艳，周 媛，张 毅，朱传福

(山东省血液中心，济南250014)

人类白细胞抗原(HLA)基因位于6号染色体短臂上，由一组紧密连锁的基因座组成，其基因表达产物与同种异体组织器官移植及移植物的急性排斥反应有关，所以称为主要组织相容性抗原。研究表明，HLA等位基因的分布具有高度多态性，目前已确认的HLA等位基因达8 496个［1］。HLA等位基因的分布特点在不同种族、不同民族、同一民族的不同群体中都存在明显差异，因此，一个群体高分辨水平的HLA多态性数据可以为组织器官移植寻找合适供者、群体遗传学、疾病相关性研究和法医学提供重要参考［2，3］。本研究对486例中华骨髓库济南籍汉族志愿捐献者的HLA-B座位高分辨等位基因多态性进行分析。现报告如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择2010～2011年无血缘关系的汉族造血干细胞志愿捐献者483例，男304例、女179例，年龄19～51岁，祖籍均为山东济南，入组时均知情同意。

1．2 方法

1．2．1 DNA提取 采集受试者EDTA抗凝静脉全血5 mL，使用 EZBeadTM全血DNA提取试剂盒，在EZBead DNA提取工作站(美国TBG公司)进行全血基因组DNA提取，DNA浓度20～100 ng/μL，纯度1．7 ～2．0。

1．2．2 HLA-B 座位基因分型 严格按照试剂盒(德国Rose Europe)说明书操作步骤进行PCR-SBT分型，对B座位进行第2、3和4外显子双向测序。对无法确定高分辨HLA分型结果的样本，则选择序列特异性测序引物对该样本再次测序，获得相应的高分辨结果。测序反应纯化后的产物置于ABI 3730测序仪上进行电泳分析，导出的结果由ATF1．0．2．41 软件(澳大利亚 Conexio Genomics公司)分析。

1．2．3 统计学方法 采用Arlequin V3．5软件计算HLA等位基因频率［4］，比较济南汉族和其他群体中等位基因分布的差异采用χ2检验。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 HLA-B高分辨等位基因频率 共检出B座位等位基因56个，频率最高的等位基因是B*13:02(11．63%)，其余频率大于5%的等位基因分别是B*15:01(5．78%)、B*40:01(5．45%)、B*46:01(5．76%)、B*51:01(5．45%)、B*5801(5．66%)。B*15组多态性最高，有11种等位基因。见表1。

2．2 济南汉族人群与其他人群［5～9］HLA-B 座位等位基因分布频率的比较 见表2。

3 讨论

HLA在抗原识别、呈递、T细胞分化与活化、调节免疫细胞相互作用等方面起着非常重要的作用。HLA是免疫学领域的一个重大发现，其为基础免疫学带来突破性进展的同时，也使器官移植和骨髓移植成为一项重要的治疗手段。

表1 济南汉族HLA-B座位等位基因频率(%，2n=966)

HLA的分型经历了血清学分型、细胞学分型和基因分型三种方法。前两种方法由于技术上的缺陷已逐渐被淘汰，目前临床移植配型和中华骨髓库HLA分型均采用基因分型。基因分型方法又经历了PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)、PCR-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)、基因芯片和PCR-测序分型(PCR-SBT)等。PCR-SSP和PCR-SSOP操作简单，对实验条件和设备要求不高，但只能得到HLA中、低分辨结果，且对新的等位基因无法得出准确结果。PCR-SBT直接对HLA基因的DNA进行测序分析，具有分型准确、分辨率高的特点，是HLA高分辨分型的最佳选择。本研究采用PCR-SBT对483例济南地区健康汉族个体进行HLA-B座位的高分辨基因分型，共检出56个等位基因，多态性最高的B*15组有11等位基因，说明该群体中HLAB座位多态性较为丰富。频率＞5%的常见等位基因共6个，其中最常见的是 B*13:02，频率达11．63%，提示携带这种等位基因的患者在济南汉族找到高分辨水平HLA-B座位等位基因相配合供者的概率较高。对济南汉族人群B座位等位基因分布特征与其他地区进行比较，结果显示，其与山东半岛汉族和鲁南汉族近似，而与江苏汉族、广东汉族、新疆维吾尔族差异较大。如济南汉族人群中最常见的等位基因B*13:02，在江苏汉族、广东汉族、新疆维吾中的频率分别为 8．23%、1．04%、3．85%，差异均有统计学意义。上述差异可能与抽样误差或地域、民族差异有关。

表2 济南汉族HLA-B座位常见等位基因频率与其他地区人群比较(%)

本研究提供了济南汉族人群的HLA高分辨水平的多态性数据，可以帮助患者找到HLA相配合的供者，同时也为该人群的疾病相关性、群体遗传学、法医学等相关研究提供了有价值的参考资料。

［1］Robinson J，Mistry K，McWillia H，et al．The IMGT/HLA database［J］．Nucleic Acids Res，2011，39(1):1171-1176．

［2］Lee SJ，Klein J，Haagenson M，et al．High Resolution Donor Recipient HLA matching contributes to the success of unrelated donor m arrow transplantation［J］．Blood，2007，110(13):4576-4583．

［3］Shi L，Shi L，Yao YF，et al．Genetic link among Hani，Bulang and other southeast Asian populations:evidence from HLA-A，-B，-C，-DRB1 genes and haplotypes distribution［J］．Int J Immunogenet，2010，37(6):467-475．

［4］Excoffier L，Lischer HL．Arlequin suite ver 3．5:a new series of programs to perform population genetics analysis under linux and windows［J］．Mol Ecol Resour，2010，10(3):564-567．

［5］刘晓华，冯智慧，胡彬，等．山东半岛地区汉族人群 HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性的研究［J］．中国输血杂志，2010，23(8):592-595．

［6］张毅，聂向民，庄云龙，等．鲁南地区汉族人群 HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多态性分析［J］．中国实验血液学杂志，2011，19(6):1482-1488．

［7］王晓艳，潘芹芹，樊甦，等．江苏汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性和单体型研究［J］．南京医科大学学报(自然科学版)，2011，31(4):507-511．

［8］朱为刚，金士正，邹红岩，等．广东汉族 HLA-A、C、B、DRB1和DQB1基因的高分辨多态性及连锁不平衡分析［J］．中国输血杂志，2009，22(12):987-993．

［9］Shen CM，Zhu BF，Deng YJ，et al．Allele polymorphism and haplotype diversity of HLA-A，-B and-DRB1 loci in sequence-based typing for Chinese uyghur ethnic group［J］．PLoS One，2010，5(11):e13458．