白芷提取物的稳定性研究

2013-05-30何珊珊武尉杰

川北医学院学报 2013年1期

何珊珊，武尉杰，谭睿

(西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都 610031)

本刊网址:http://www.nsmc.edu.cn 作者投稿系统:http://noth.cbpt.cnki.net 邮箱:xuebao@nsmc.edu.cn

白芷为伞形科植物白芷［Angelica dahurica(Fisch.ex.Hoffm.)Benth.et Hook.f.］或杭白芷［Angelica dahurica (Fisch.ex.Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana (Boiss.)Shan.et Yuan］的干燥根。现市面上所售白芷，按产地不同可以分为祈白芷(主要产地为河北)、禹白芷(主要产于河南)和川白芷(主要产地是四川和杭州)。由于白芷药材植物来源和品种有所差异，收获、加工及储存的方式也不相同以及生态环境等因素的影响，不同产地的白芷产品之间会存在一定的差异［1］。白芷味辛，微苦，气芳香。具有抗炎、解热、镇痛、祛风、通窍、行气活血的功能。杭白芷脂溶性成分方面的研究，主要为香豆素和香豆苷类。赵兴增等［2］对杭白芷的化学成分进行了进一步的研究，得到了8 个香豆素和香豆素苷，包括欧前胡素(imperatorin，Ⅰ)、异欧前胡素(isoimperatorin，Ⅱ)、水合氧化前胡素(oxypeucedanin，Ⅲ)、比克白芷素(byakangelicin，Ⅳ)等。白芷的提取方法有多种，经郑翠英等［3］研究表明白芷中香豆素的提取证明提取方法中:渗漉法优于回流提取和超声法。本实验利用乙醇提取法提取白芷［4］，并用紫外分光光度法［5］对白芷提取物的稳定性进行研究，为白芷制剂的提取与储存提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

旋转蒸发器RE-52AA(上海亚荣生化仪器厂)，T6 新世纪紫外可见分光光度计(T6 spectrophotometer)(北京普析通用仪器有限责任公司)，数显恒温水浴锅HH-4(金坛市岸头良友实验仪器厂)，电子分析天平AB204-S(上海精科天平)，玻璃比色皿(江苏咸徳环保科技有限公司)

1.2 材料与试剂

白芷切片于2012 年3 月下旬购于兰州榆中夏官营经三路春草堂，经检验符合药典规定。无水乙醇(含量不少于99.7%，ρ = 0.789 ～0.791 g/mL(20℃)天津化学试剂有限公司)，CuCl2(三级，北京化工厂)，FeCl2(分析纯(AR)天津市恒兴化学试剂制造有限公司)，Na2HPO4(分析纯，上海中秦化学试剂有限公司)，NaH2PO4(分析纯，莱阳市双双化工有限公司)，H2O2(分析纯，天津市百世化工有限公司)，二次纯水。白芷提取物:把白芷切片压碎至一定大小，称取5.0 g，以25.0 mL 的70%的乙醇浸泡24 h，在常温常压下回流提取两次，每次1 h。将两次滤液合并后旋转浓缩备用。

2 白芷提取物的稳定性研究

2.1 溶液的配制

白芷提取物溶液的配制:精确称取所得提取物250.0 mg，以70%的乙醇溶液定容到250.0 mL，将其配制成1.0 mg/mL 的溶液，备用。

缓冲溶液的配制:精确称取24.20 g NaH2PO4，加水至 1 000.0 mL，得 A 液;精确称量NaH2PO471.63 g，加水至1 000.0 mL 得B 液。分别取A、B 液的不同体积配制成pH 值分别为2.0、4.0、6.0、7.0、8.0、10.0 的磷酸盐缓冲溶液，备用。

2.2 最大吸收波长的测定

以70%的乙醇溶液为参比液，在200 ～600 nm波长范围内测定白芷提取物溶液的紫外吸收情况，根据结果确定在最大吸收A =0.944 处的波长即为最大吸收波长，即λ=299 nm(图1)。

2.3 光照对提取物稳定性的影响

取提取物溶液两份，各25.0 mL，分别放置在自然光和避光处，以70%的乙醇溶液为参比溶液，每隔1 h 分别测定一次溶液在最大吸收波长(299 nm)处的紫外吸收，观测6 h 内溶液吸光度变化，结果见图2。

2.4 温度对提取物稳定性的影响

取白芷提取物溶液5 份，各15.0 mL，分别置于20 ℃、40 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃水浴中保温，以70%的乙醇溶液为对照，分别测定个溶液在299 nm 处的最大吸光度，观察其变化情况，结果见图3。

2.5 pH 值对提取物稳定性的影响

量取提取物溶液6 份，每份8.0 mL，分别以pH值为2.0、4.0、6.0、7.0、8.0、10.0 的缓冲液定容到10 mL，以70%的乙醇溶液为参比液，测定各溶液的紫外吸收情况，测定299 nm 处的吸光度变化，结果见图4。

2.6 氧化剂对提取物稳定性的影响

精确配制浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%、30%的过氧化氢溶液，量取提取物溶液6 份，各8 mL，分别用上述各溶液定容到10 mL，以70%的乙醇溶液为对照，测定所得6 份溶液的紫外－可见吸收，观察各溶液在299 nm 处的紫外吸收情况，结果见图5。

2.7 金属离子对提取物稳定性的影响

Fe2+的影响:以FeCl2为药品，分别配制浓度为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL 的溶液。量取提取物溶液6份，每份8 mL，分别以上述溶液定容至10 mL，以70%的乙醇溶液为参比液测定各溶液在299 nm 波长处的吸光度，观察其变化情况，见图6。

Cu2+的影响:以CuCl2为试剂，配制浓度分别为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL 的溶液。量取提取物溶液6份，各8 mL，分别以上述溶液定容至10 mL。以70%的乙醇溶液为参比测定各溶液在299 nm 处的紫外吸收，见图7。

3 结果

利用乙醇提取白芷，并对白芷提取物的稳定性进行研究发现白芷的提取物(呋喃香豆素类化合物)的最大吸收波长为299 nm;避光放置时，6 h 内物质吸光度变化不大，在光照条件下，6 h 内物质的吸光度有明显下降;随温度的升高，呋喃香豆素类化合物的稳定性先增加后降低，60 ℃时的稳定性最好;不同pH 值使提取物溶液的吸光度改变不同，酸性缓冲液会使溶液吸光度减小，碱性缓冲液会使溶液的吸光度变化不大;加入不同浓度的氧化剂使物质的吸光度变化不大;加入不同浓度的Fe2+和Cu2+溶液，提取物溶液的吸光度增大，因Fe2+具有一定的还原性，说明白芷提取物的抗还原性较好。