血清葡萄糖—6—磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的价值

谭维贤

[摘要] 目的 探讨血清葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）在类风湿关节炎（RA）诊断中的临床价值。 方法 采用ELISA法检测GPI和抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）；间接免疫荧光法检测抗角蛋白抗体（AKA）；速率免疫散射比浊法检测类风湿因子（RF）。共检测65例类风湿关节炎（RA组）、85例其他风湿病患者（非RA组）和60例健康正常成人（正常对照组）。 结果 4项血清学指标比较，GPI和抗CCP在诊断RA中有着较高的灵敏度和特异性；RF的灵敏度虽然最高，但特异性却最差。 结论 GPI对RA早期诊断有着重要的意义，且与抗CCP、AKA、RF无明确的相关性，GPI与RF联合检测更有利于RA的早期诊断。

[关键词] 类风湿关节炎；葡萄糖-6-磷酸异构酶；类风湿因子；抗环瓜氨酸肽抗体；抗角蛋白抗体

[中图分类号] R593.22 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）06-0108-02

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是由于自身免疫发生的一种关节疾病，其发病机制尚不清楚，随病情发展可出现骨及骨骼肌的萎缩，最后导致关节强直。由于其致畸致残率较高，因此，对于类风湿关节炎的防治重点在于早期诊断和早期治疗，而对于已患病者而言，及时做到病情控制或改善预后则更重要。传统的血清学指标被广泛应用于RA的诊断中，其中类风湿因子（RF）的检测具有较高的敏感性，但由于其特异性差，因此很难将其作为早期诊断提供可靠依据。近年来的研究发现，血清葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）和抗角蛋白抗体（AKA）等血清学指标与RA等自身免疫性疾病的关系密切，特别是在RA的早期诊断和预后判断中具有重要价值[1]。为此，本研究检测了65例RA、85例其他非RA风湿病患者和60例健康正常成人的GPI、抗CCP、AKA和RF等4项血清学标志物，以探讨它们在类风湿关节炎诊断中的价值，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

RA组：类风湿关节炎患者65例，均为2009年1月～2010年8月期间我院皮肤科门诊或住院患者，男33例，女32例，年龄18～70岁，平均（45±12）岁。所有研究患者均符合美国风湿病学会1987年修订的诊断分类标准。非RA组：非RA的其他风湿病患者85例，符合国内和国际相应的诊断标准，均为同期我院皮肤科门诊或住院患者，男39例，女46例，年龄17～72岁，平均（45±11）岁。其中系统性红斑狼疮（SLE）患者23例，强直性脊柱炎（As）患者32例，原发干燥综合征（ss）患者l6例，混合性结缔组织病（MCTD）患者l4例。正常对照组：选择无自身免疫性疾病临床体征及影像学表现、各种自身免疫性疾病血清学指标检测阴性，且无肝、肾、心血管及糖尿病等疾病的健康体检者60例作为健康对照，其中男29例，女31例，年龄24～67岁，平均（43±10）岁。

1.2 实验方法

1.2.1 GPI检测 采用上海北加生化试剂有限公司生产的双抗体夹心法（ELISA）GPl检测试剂盒。严格按照试剂说明书进行操作；其中包括6个GPI标准品（0、0.16、0.33、1.0、2.0、20 μg/mL）和阴、阳性对照；待检血清1∶10稀释，GPl值I>0.2 ug/mL为阳性。

1.2.2 抗CCP检测 采用德国欧蒙医学试验诊断有限公司提供的体外定量检测CCP（IgG型）抗体ELISA试剂盒。严格按照试剂说明书进行操作；待检血清1∶100稀释，结果>5 U/mL为阳性。如果抗体超过曲线范围，将血清适度稀释后重新进行检测。

1.2.3 AKA检测 AKA间接免疫荧光法（IIF）检测试剂购自德国欧蒙医学试验诊断有限公司，待检血清1∶10稀释，荧光显微镜下观察结果。食管组织角质层出现线性、板层状的典型荧光染色者判断为阳性。

1.2.4 RF检测 采用美国贝克曼公司的IMMAGE特定蛋白分析仪及其配套速率散射比浊法试剂进行检测。RF>30 U/mL为阳性。

1.3统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，应用χ2检验分析各指标阳性率之间的差别。计算GPI、抗CCP、AKA和RF的敏感性、特异性，率的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 四项血清学指标的阳性检出率（表1）。

2.2 四项血清学标志各自单独对诊断RA的特异性比较

GPI（96.7%）、抗CCP（94.1%）和AKA（95.3%）对诊断RA具有很高的特异性；RF（76.0%）的特异性相对较低。

2.3 四项血清学标志联合检测对诊断RA的灵敏度和特异性比较

GPl、抗CCP和AKA分别与RF联合检测均可明显提高RF对RA的诊断特异性；GPl与RF联合检测对RA的诊断特异性可达l00%，灵敏度也明显高于其他组合。见表2。

3讨论

类风湿关节炎（RA）是一种致畸很高的自身免疫性疾病[2]。RF是美国风湿病协会推荐用于RA分类诊断的唯一血清学指标，目前常用于RA的辅助诊断，其本质是抗变性IgG分子Fc片断的自身抗体。由于RA的检测技术简便、而快速、且灵敏度高，因此在RA的诊断中得到了广泛的应用。但是RF检测结果的特异性不高，主要是由于SLE等多种自身免疫性疾病以及一些感染性疾病患者的血清中均可出现RF的增高的情况，而在某些正常的老年人中亦有一定的阳性率，因此极大地限制了PF在RA诊断中的临床应用。本研究的结果也证实了这一点，4项血清学指标各自单独诊断RA的比较中RF的敏感度最高，但特异性最差。近年来的研究发现，AKA、抗CCP及GPl等血清标志物在RA的早期诊断中具有较好的敏感度和很高的特异性[3]。

AKA是1979年YOUNG等[4]发现并命名的，是一组不溶性的纤维蛋白，为细胞骨架的一种构成成分，IgG型的AKA抗体对RA具有较高的特异性。AKA在RA患者血清和关节液中均可检出，甚至在RA早期和临床表现出现前即可呈阳性，且与RA病情的严重程度及活动性相关；而AKA检测呈阳性往往提示RA预后不良。因此，AKA对RA的早期诊断和预后判断都有意义，但由于AKA的检测易受操作者的主观因素影响，且抗原底物的个体差异性及其底物的获取和保存不易，操作不易标准化等实际困难[5]，限制了AKA在RA辅助诊断中的推广应用。

2000年荷兰学者Schellekens等合成了CCP[6]，并利用ELISA方法在RA患者体内检测到了抗CCP。在RA早期即可出现抗CCP，并已证实对骨侵蚀的发生有很高的预测价值[7]，通过检测抗CCP可尽早对阳性患者进行干预、阻断疾病的进展，有效减少骨侵蚀和关节破坏。本研究中RA组患者抗CCP的检出率高达52.3%，仅次于RF和GPI，但其特异性明显高于RF，对RA的早期诊断有重要作用。

GPI是一种多功能蛋白质分子，广泛存在于人体各种组织细胞中，其主要功能是催化6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖之间的转化，是糖酵解、糖异生的主要酶类。同时GPI也具有细胞生长因子活性，可诱导髓样干细胞向单核细胞及B细胞向浆细胞的分化。推测GPI的细胞生长因子活性可能对RA患者的血管增生、滑膜增殖和骨破坏起一重要作用，同时增加了RA的易感性[8]。GPI虽然是一种全身细胞普遍存在的具有自身抗原性的蛋白质，但在RA中的阳性率要远高于其他自身免疫性疾病[9]。MATSU-MOT0等[10]用免疫组化的方法研究了GPI的定位分布，发现在各种组织的细胞内，GPI均匀分布，但在关节腔内，特别在软骨表面，有一层薄而清晰的GPI沉着线。本研究中，单独检测GPI对诊断RA的灵敏度和特异性分别为67.7%和96.7%；联合RF检测后，尽管灵敏度有所下降，但特异性达到l00%。另有研究表明[11，12]，GPl浓度与RA患者关节肿胀和骨侵蚀性程度相关，而与RF、AKA及抗CCP无明显相关性，提示GPI有可能成为独立于RF、AKA和抗CCP之外的新的标记物，从而增强RA诊断的灵敏度和特异性，很有希望广泛应用于RA的诊断及活动性的判断，在一定程度上可以弥补RF的不足。用于检测GPI的ELISA方法简单、不需要特殊设备，非常适用于普通医疗机构的临床实验室推广使用，具有广泛的临床应用和研究前景。

[参考文献]

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[3] 许育兵，张速林. 联合检测抗CCP抗体、AKA与GPI在类风湿性关节炎诊断中的应用[J]. 华南国防医学杂志，2009，23（5）：35-36，39.

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[5] 陆红，夏勇，周蔚，等. 四项指标联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用[J]. 中国热带医学，2009，9（1）：72-73.

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[7] 王海，何建发，李荣藻. 抗环瓜氨酸抗体阳性的早期类风湿关节炎患者骨侵蚀的临床观察[J]. 实用医学杂志，2007，23（15）：2361-2363.

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[10] Matsumoto，Lee DM，Goldbach-mansky R，et al. Low prevalence of antibodies to glucose-6-phosphate isomerase in patients with rheumatoid arthritis and a spectrum of other chronic autoimmune disorders[J]. Arthritis Rheum，2006，48（4）：944-954.

[11] 张旗，朱新兴，伊心浩，等. 类风湿关节炎血清葡萄糖-6-磷酸异构酶治疗前后变化特点[J]. 军医进修学院学报，2009，30（1）：15-17.

[12] 李慧颖，姜国平，吕英春，等. 葡萄糖-6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义[J]. 吉林医学，2009，30（11）：961-963.

（收稿日期：2012-11-16）