牛羊口蹄疫病毒O型亚洲Ⅰ型灭活疫苗不同免疫程序免疫抗体效价对比试验

雷新开

摘要：对黄牛多次免疫接种牛羊口蹄疫O型亚洲1型灭活苗的抗体效价进行检测。结果表明，首免、二免、三免多次免疫牛羊口蹄疫O型亚洲1型灭活苗获得免疫效果和抗体水平依次不同。其中首免、二免的免疫抗体水平较低，免疫合格率为63%左右，三免的免疫抗体水平较高，免疫合格率达93.3%以上，免疫的整体水平达到国家规定要求。

关键词：口蹄疫；免疫接种；抗体检测；比较试验

中图分类号：S851.35 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）06-0029-02

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度接触性传染病。被列为A类传染病的首位，我国将它列为一类动物传染病。口蹄疫病毒有7个血清型，其中O型亚洲Ⅰ型影响最为严重。为有效预防口蹄疫的发生和传播，实行以春秋两季免疫为主，长期进行全覆盖强制免疫的口蹄疫免疫程序。在具体操作过程中，发现首次接种疫苗主要是激活免疫细胞产生免疫记忆，产生的抗体水平不高，也存在有个体免疫应答的差异。免疫间隔时间长短也直接影响免疫抗体水平的高低，不能形成较高的保护力，达不到抵御外界病毒侵袭的抗体水平。为使畜群免疫抗体水平能始终保持在有效保护的状态，应用牛羊口蹄疫病毒O型亚洲Ⅰ型灭活疫苗进行多次免疫对比试验，检测黄牛体内的免疫抗体水平情况和形成保护力的状况，旨在为有效防控该病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

（1）试验动物。选择昭平县五将镇义德村黄新牛场30头黄牛作为试验对象。

（2）抗体检测仪器。酶标分析仪ZMX-988B型全自动酶标洗板机，台式高速离心机（sigma1-15K），KH系列智能型电热恒温器；96孔ELISA板、U型96孔抗原抗体反应板、封板膜等。

（3）疫苗及试剂。牛羊口蹄疫病毒O型亚洲Ⅰ型灭活疫苗由贺州市动物疫病预防控制中心统一调拨，是新疆金宇保灵生物有限公司生产，批号2216006，检测O型亚洲Ⅰ型口蹄疫抗体所用正向间接血凝试剂为中国农科院兰州兽医研究所生产，批号20121013，均在有效期内。

1.2 方法

（1）试验方法。选择30头2～3岁的黄牛进行首次免疫注射牛羊口蹄疫病毒O 型亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗，每头2.0 mL，间隔30 d进行二次免疫，依次间隔30 d，对30头黄进行第3次免疫接种，要求免疫接种口蹄疫病毒O型亚洲Ⅰ型灭活疫苗的时间和间隔时间要一致。

（2）采样方法。分为2个试验组，即二免组（2B组）和三免组（3B组）。二免后30 d，分别对已进行第二次免疫的30头试验黄牛进行血液采样，共采血30份，每头牛采血10 mL，并将采集的血样离心，分离出血清样品不能溶血，无菌分离血清待检。三免后30 d，同样对已经免疫第3次的30头试验黄牛进行血液采样，共采血30份，每头牛采血10 mL，将采集的血样离心，分离的血清样品不能溶血，无菌分离血清待检。

（3）检测方法。按照国标《正向间接血凝试验监测口蹄疫抗体操作规程》进行。将待检血清灭活，56 ℃水浴灭活 30 min；然后用稀释液将待检血清分别稀释成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1 024；用稀释液将阴性对照血清稀释成1：16，再将阳性对照血清稀释成1：512；在干净的V型96孔血凝板上每排的第1～8孔加各稀释度待检血清50 μL，第10孔加1：16的阴性对照血清，50 μL，第11孔加阳性对照血清（1：512）50 μL，第12孔各加稀释液50 μL（空白对照）；将液体诊断液混匀，每排1～8孔和10～12孔加诊断液，每孔25 μL。

（4）振荡。将加完样品的V型滴定板在微量振荡器上振荡1 min，置室温1.5～2.0 h，最后判定结果。

（5）结果判定标准。抗体效价≥1：128，99%以上起保护作用；抗体效价在1：（32～90），50%保护；抗体效价≤1：16不保护。

2 结果与分析

2.1 检测结果

二免组和三免组各30头黄牛的免疫抗体效价状况见表1。由表1可见，二免组抗体效价较低，抗体效价≥1：32的为19份，占63.3%，最高抗效价为1：64；三免组抗体效价较高，抗体效价≥1：28的有28份，占93.3%，最高抗体效价达1：512。三免效果明显好于二免。

2.2 分析

①在山区环境，同一条件下， 因个体差异，存有产生免疫抗体水平不一致的现象。

②首次免疫30 d后，进行二次免疫，间隔30 d开始血液采样，检测结果表明此阶段牛体内产生的免疫抗体水平比较低，无法达到有效的保护力。

③按照免疫程序，二免后间隔30 d，进行第三次免疫，30 d后采样检测，检测结果表明此阶段牛体内产生的免疫抗体水平比较高，并形成较高的保护力可抵御外界病毒侵袭，有效地防控该病的发生。

3 结论

从试验结果分析来看，两次免疫注射口蹄疫疫苗的2B组省工省钱，但是免疫动物体内产生的抗体有效保护率较低，易被野毒和病毒感染，给疫病的发生、传播留下了机会；而3B组虽然费工费时，费用比较高，但是免疫动物体内产生的抗体效价保持在一个相对均衡的水平上，起到了预防疫病的目的。因此，建议在生产中按免疫程序对牛使用免疫接种3次口蹄疫疫苗的免疫方案。

参考文献：

[1] 丁永志.牛羊口蹄疫病毒O型亚洲1型灭活苗多次免疫程序免疫抗体效价对比试验[J].甘肃兽医导刊，2011（5）：31-33.