骨刺消胶囊中水提工艺的正交试验研究

王文骊 刘军锋 高锦成 陕西中医学院附属医院（咸阳712000）

骨刺消胶囊由海马、鹿角胶、续断、杜仲等十六味药材组成，具有补益肝肾、舒筋活血、通络止痛的功效。临床上主要用于骨质增生，风湿性关节炎等疾病［1］。杜仲、续断等七味药材作为水提工艺的主要药物，川续断皂苷Ⅵ作为续断的主要代表成分。为了有效的控制该工艺，我们通过正交工艺设计，对骨刺消胶囊水提工艺采用高效液相色谱法测定川续断皂苷Ⅵ的含量，结合干膏率两个指标，确定最佳工艺。

1 仪器与试药 1.1 仪器 日本岛津2010液相色谱仪，class－vp数据工作站；BP211D型电子分析天平（德国塞多利斯天平有限公司）d＝0.01mg；BS210S型电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）d＝0.1mg；LXJ－Ⅱ型台式离心机（南京第一医疗器械厂）；DK－98－ⅡA型水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药 杜仲、续断等七味药材购于陕西省药材公司。川续断皂苷Ⅵ对照品购于中国药品检验鉴定中心（批号：111685－200401）。乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

2 方法与结果 2.1 检测方法的确定 2.1.1干膏率的测定：按1／10处方量比例，称取杜仲、续断、威灵仙各1.8g，熟地6.5g，泽泻2.4g，山楂2g，黄芪1.5g，平行9份，随机取样编为1～9个试验号。按正交表表2中每个试验号要求进行试验，合并提取液，滤过，精密量取滤过后的滤液100mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称重，计算干浸膏得率，结果见表2。

2.1.2 测定川续断皂苷Ⅵ含量［2］：供试品溶液的制备按连翘药材1g量计，精密量取离心滤过后的滤液适量，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用10mL甲醇转移至25mL量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品2.77mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含0.11mg的溶液，即得。

色谱条件 色谱柱：C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（30：70）；检测波长：212nm；进样量10μL；流速：1.0mL。理论板数按川续断皂苷Ⅵ峰计算应不低于3000。

干扰性试验：按处方比例照样品制备工艺制成阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。在上述色谱条件下，进样10μL，依法测定，结果表明处方中其它成分对川续断皂苷Ⅵ含量测定无干扰。

含量测定：取样品，平行操作2次。每次分别精密量取对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

2.2 正交试验 2.2.1 试验因素和水平设定：通过多因素的正交试验，优选水提取工艺的各项参数。以水提取干浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ提取量作为考核指标，以选择最佳的工艺参数。影响水提取的主要因素有加水量、提取时间和提取次数，故我们选择正交方式进行设计研究。为了系统考察水提取的工艺参数，我们设计的因素与水平见表1。

表1 试验因素水平表

2.2.2 正交试验安排及结果具体见表2。

2.2.3 将正交试验结果分析：结果见表3。

表2 L9（34）正交表及正交试验结果

表3 干浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ提取量方差分析

由表2K及R值可知，以干浸膏得率为考察指标时，A3＞A2＞A1，B2＞B1＞ B3，C3＞C2＞C1，C因素影响最大，B、A因素次之。结合表3干浸膏得率方差分析知，各因素作用主次为C＞A＞B，其中C因素影响比较显著，A、B次之，D因素影响较小，均无显著性差异，因此水煎煮最佳提取工艺为A3B2C3。由表2K及R值可知，以川续断皂苷Ⅵ提取量为考察指标时，A3＞A2＞A1，B2＞B1＞B3，C3＞C1＞C2，A因素影响最大，B、C因素次之。结合表4川续断皂苷Ⅵ提取量方差分析，水煎煮最佳提取工艺为A3B2C3。

2.2.4 验证试验：由于优选的工艺不包括在正交表的9次试验中，故对其进行了验证试验。用同一批药材，称取1／10处方量，按A3B2C3进行对比试验，测定水煎浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ含量，结果见表4。

表4 验证试验结果

由上表可见，以干浸膏得率和川续断皂苷Ⅵ提取量为指标，数据较稳定，且干膏率和含量较高。故确定A3B2C3为最佳工艺，即药材加水煎煮3次，每次加水12倍量，煎煮1.5h。

3 讨 论 本实验研究杜仲、续断等药材的水提工艺，因其主要有效成分为川续断皂苷Ⅵ，故本实验以干膏率及川续断皂苷Ⅵ为考察指标，通过正交试验结合方差分析结果表明，水提影响干膏得率的主要因素是煎煮次数，加水量和煎煮时间影响较小。水提影响川续断皂苷Ⅵ得率的主因素也是煎煮次数。最佳提取工艺为加水12倍量，煎煮3次，每次1.5h，所得浸膏得率和川续断皂苷Ⅵ含量均较高。

［1］ 陈 平，翁树凡.中药治疗骨质增生50例［J］.陕西中医，1985，7（04）：175.

［2］ 国家药典委员会.中国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005：118.