可口革囊星虫多糖的提取及含量测定

庹康秀，廖共山，胡仁统，雷丹青

（广西医科大学医学科学实验中心，广西 南宁 530021）

可口革囊星虫富含人体需要的多种氨基酸、微量元素和可调节大脑功能的牛磺酸，能增强机体的免疫功能，被誉为“海中冬虫夏草”。我国多版药典中记载了其食用和药用价值。星虫性寒，味甘、咸，具有滋阴降火、清肺补虚、活血强身及补肾养颜等功效[1－2]。牛磺酸有增强胰岛素促进肝糖原转化的作用，而糖原是体力脑力活动效率及持久力的物质保证，能改善心脏及血液循环功能，具有保肝作用。笔者用水提法从可口革囊星虫中提取多糖，并用苯酚－硫酸比色法对其含量进行测定。现报道如下。

1 仪器与试药

Lamb Da Bio 20型双光束紫外分光光度计（美国PE公司）；Tomyr S －20 Ⅱ型高速冷冻离心机（Tomy Seiko Co．，Ltd．）；冰冻真空干燥仪（Nihon Freezer Co．，Ltd．）；DS － I型高速组织匀浆机（上海标本模型厂）；AG245型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。水饱和苯酚，浓硫酸、丙酮等均为分析纯；可口革囊星虫（购于南宁海鲜批发市场）。

2 方法与结果

2．1 可口革囊星虫多糖的提取

取新鲜可口革囊星虫，加入生理盐水（1∶1），充分匀浆，置60 ℃ 水浴抽提 3 次，每次 0．5 h，间隔震荡，离心（5 000 r／min）20 min，收集上清液，冻干备用。

2．2 溶液制备

精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖对照品20．2 mg，置200 mL容量瓶中，加水溶解，定量至刻度，得质量浓度为0．101 g／L的对照品溶液。精密称取可口革囊星虫冻干粉，置10 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解，稀释至刻度，质量浓度为0．15 g／L，作为供试品溶液。量取0．5 mL苯酚，用蒸馏水溶解定容至10 mL，置棕色容量瓶中，得5%苯酚试液。

2．3 检测波长选择

精密吸取对照品溶液1 mL，置试管中，加5%苯酚试液0．5 mL，混匀，迅速加入 2．5 mL浓硫酸，振摇2 min，置沸水浴加 15 min，取出，置冰水中冷却，以苯酚－硫酸溶液为空白，用紫外分光光度计在200～800 nm波长范围扫描。结果对照品溶液在490 nm波长处均有最大吸收，故测定波长定为490 nm。

2．4 方法学考察

线性关系考察：参照文献[3－4]方法并并略加改进。分别吸取对照品溶液 0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7 mL，分别以蒸馏水补至 1 mL，使得其质量浓度依次为 10．1，20．2，30．3，40．4，50．5，60．6，70．7 μg ／mL。依法显色，于 490 nm 波长处测定吸光度，求得回归方程 Y＝0．019 2 X＋0．106 3，r＝0．998 8(n＝7），式中 Y表示吸光度，X为葡萄糖质量浓度。结果表明，葡萄糖质量浓度在10．0～70．7 μg／mL范围内与吸光度有良好的线性关系。标准曲线为1条不通过原点的直线，故供试品溶液测定用外标两点法定量。

精密度试验：精密吸取质量浓度为40．4 μg／mL的对照品溶液 5份，依法显色后测定吸光度。结果的 RSD＝2．70%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：每隔30 min测定同一供试品溶液在不同时间的吸光度。结果的 RSD＝1．45%，表明供试品溶液显色后至少在3 h内稳定。

加样回收试验：取6支试管，精密加入供试品溶液 0．1 mL，精密加入适量对照品溶液，最后补足1 mL，依法测定含量。结果见表 1。

表1 加样回收试验结果

2．5 样品含量测定

准确吸取供试品溶液0．1 mL加水补至1 mL，按线性关系考察项下方法测定各提取物的吸光值。反应浓度（C反应）＝C样品／D，多糖含量（%）＝C／C反应×100%，式中 C为通过吸光值由回归方程计算出的葡萄糖质量浓度（μg／mL），D为多糖的稀释倍数。结果多糖含量为15．85%。

3 讨论

硫酸－苯酚法可使显色后的多糖产生较好的吸收峰。本试验用此法测定可口革囊星虫中多糖含量，方法简便、准确、稳定性好。糖类成分分子量大，进一步应用现代化学提取分析方法加强多糖的化学研究。可口革囊星虫的开发，符合当前广大人民群众追求营养丰富、风味独特、种类丰富、口味多样的绿色健康饮食文化需要，是一种开发前景较好的小型海洋经济动物[5]。可口革囊星虫有较高的药用价值，笔者将对可口革囊星虫多糖作进一步的分离纯化，对其活性成分和生物学活性的作用作深入研究，为开发可口革囊星虫功能性食品，研究海洋生物的多糖药物和保健功能提供资料。

[1]李德伟，孙艳红，谭 敏，等．一种新兴的高蛋白海产品——可口革囊星虫[J]．水产科技情报，2008，35（ 4）：174-175．

[2]黄晓春，苏秀榕，苏月萍．沙蚕和星虫的营养成分研究[J]．水产科学，2005，24（ 6）：10-11．

[3]钟方晓，任海华，李 岩．多糖含量测定方法比较[J]．时珍国医国药，2007，18（8）：1 916-1 917．

[4]倪受东，严德江，徐先祥．大黄多糖的提取及含量测定 [J]．中国药业，2007，16（13）：10-11．

[5]黄晓春，苏秀榕，苏月萍．沙蚕和星虫的营养成分研究 [J]．水产科学，2006，24（6）：10-11．