原发性肝癌患者血清DJ-1蛋白的检测意义

黄远虹 何显龙

研究已证明，DJ-1基因在人体22个以上组织中广泛存在，DJ-1基因较多的研究发现与帕金森病有关，认为DJ-1基因的突变可导致早发性帕金森病的发生[1]。DJ-1（帕金森疾病相关蛋白）蛋白是种多功能蛋白质，广泛存在于胰腺、肾脏、肌肉、肝脏等多种器官，参与抑制凋亡、负性调节、细胞转化等过程[2]。近年来的研究表明，DJ-1蛋白在许多肿瘤中异常表达，且与肿瘤的发生、发展、转移及预后有密切相关[3]。本研究对正常人、乙型肝炎、肝硬化、原发性肝癌患者血清中DJ-1蛋白的含量进行比较，探讨DJ-1蛋白在原发性肝癌诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年1～12月本院肝病住院患者150例，其中乙型肝炎50例，肝硬化50例，初诊原发性肝癌50例。另选门诊健康体检者50例（男25例，女25例）为正常对照组，均符合1999年全国原发性肝癌诊断与分期标准（草案）。

1.2 方法 标本为清晨空腹采集血清，标本无脂血，无溶血。离心分离后保存于-20℃条件下待测。DJ-1蛋白检测采用双抗体酶联免疫吸附法进行检测。具体步骤为：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL（样品最终稀释度为5倍）。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。用封板膜封板后置37℃温育30min。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。置37℃温育30min，洗涤5次。每孔先加入显示剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10min。每孔加终止液50μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）。以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。752N型紫外可见分光光度计为上海天普分析仪器，试剂盒购自郑州博赛生物试剂实验研究所，所有步骤均严格按照操作规程进行。

1.3 统计学方法 应用统计软件包SPSS17.0进行分析，用单因素方差（one-way）分析各组之间差异性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

正常对照组血清中DJ-1蛋白含量为（5.76±1.35）ng/L、乙型肝炎组为（8.63±2.05）ng/L、肝硬化组为（8.98±1.59）ng/L、原发性肝癌组为（40±3.69）ng/L。乙型肝炎、肝硬化、肝癌组DJ-1蛋白的含量与正常对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），肝癌组与肝硬化、乙型肝炎组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨论

研究表明，DJ-1蛋白在各种肿瘤组织中含量升高：Pardo等[4]首次发现乳腺癌患者的DJ-1蛋白及其抗体较非癌者明显增多，且在此类患者的血清能检测出DJ-1抗体。Le Naour等[5]发现眼葡萄膜恶性黑色素瘤能表达DJ-1蛋白，并且在此类患者的血清能检测出DJ-1蛋白，认为DJ-1蛋白是眼葡萄膜恶性黑色素瘤潜在的血清标志物。DJ-1蛋白在宫颈癌组织中高度表达，认为DJ-1蛋白可作为宫颈癌潜在病变期的检测标志物。吴芳等[6]的研究显示，肝癌组织中DJ-1蛋白的表达阳性率均明显高于癌旁肝组织。目前认为DJ-1基因与恶性肿瘤的发生和预后密切相关并可能是潜在抗癌治疗靶点，其具体作用机制不清，DJ-1蛋白已成为研究的热点。

在本研究中，选取初诊原发性肝癌患者作为研究对象，并以正常人、乙型肝炎、肝硬化患者作为对照。本研究研究结果表明，DJ-1蛋白在原发性肝癌患者血清中含量显著升高，与其他组比较差异有统计学意义。结果提示DJ-1蛋白可能与肝癌的发生有关，其有望成为原发性肝癌诊断的一个潜在标志物。

[1]Honbou K,Suzuki n N,Horiuehi M,et al.The crystal structure of DJ-1,a protein related to male fertility and Parkinson’s disease[J].Biol Chem,2003,278(33):31380-31384.

[2]严金金，舒宽勇，朱其舟.DJ-1与肿瘤的关系[J].广东医学，2011，12（3）：3147-3149.

[3]祝小林，雷文斌，何小洪.DJ-1蛋白在喉鳞状细胞癌与Hep-2细胞系表达[J].中山大学学报，2007，28(2):142-144.

[4]Pardo M,García A,Thomas B,et al.The characterization of the invasion phenotype of uveal melanoma tumour cells shows the presence of MUC18 and HMG-1 metastasis markers and leads to the identification of DJ-1 as a potential serum biomarker [J].Int J Cancer，2006，119(5):1014-1022.

[5]Le Naour F,Misek DE,Krause MC,et al.Proteomics-based identification of RS/DJ-1 as a novel circulation tumor anti-gene in breast cancer[J].Clin Cancer Res，2001，7(11):3328-3335.

[6]吴芳，梁瑾琦，黄智铭.DJ-1基因在肝细胞癌中的表达及其肝癌侵龚和转移的关系[J].中华肝病杂志，2009，17（3）：203-206.