HPLC法测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量

2013-03-04关向杭朱明蕾

中国民族民间医药 2013年14期

关键词：甲苷液相黄芪

关向杭朱明蕾

南京同仁堂药业有限责任公司，江苏南京 210012

HPLC法测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量

关向杭朱明蕾

南京同仁堂药业有限责任公司，江苏南京 210012

目的：测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，以乙腈－水（35∶65）为流动相；流速：1.2ml/min；蒸发光散射检测。结果：黄芪甲苷线性范围为0.5～5μg，平均回收率为，RSD＝2.08%。结论：高效液相法测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量，方法专属性强，结果可靠，可用于糖肾康颗粒的质量控制。

糖肾康颗粒；高效液相色谱；黄芪甲苷

糖肾康颗粒为治疗糖尿病肾病的颗粒剂。由黄芪、生地、山药、大黄、白芍、丹参、益母草、赤芍、全蝎等九味组成。具有益气养阴，泄浊通络之功效。黄芪与它药配伍有益气生津止渴，治疗消渴，具有良好的消蛋白和改善肾功能作用，因此定为君药，黄芪甲苷为其主要成分。本文采用高效液相法测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量，方法专属性强，结果可靠，可用于糖肾康颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

安捷伦高效液相色谱仪1200，ESLD蒸发光散射检测仪，电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

乙腈为色谱纯，水为去离子水，其余试剂为分析纯。黄芪甲苷对照品（110781－200613供含量测定用）中国药品生物制品鉴定所提供。糖肾康颗粒自制。缺味阴性样品：按处方配成相应的缺味处方药，并按制剂工艺，加相应辅料制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件依利特SinoChrom ODS－BP柱（5μm，4.6×250mm）；流动相：乙腈－水（35∶65）；流速：1.2m l/min；蒸发光散射；柱温：30℃

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品细粉3g，精密称定，精密加取2%氢氧化钾甲醇溶液60ml，称定，回流1.5小时，补足重量，滤过，精密量取续滤液40m l蒸干，加水10ml溶解，置分液漏斗中，加入氯仿－正丁醇（2∶1）萃取4次（20m l，15m l，15ml，15m l），合并萃液，用1%磷酸二氢钾洗涤二次（15ml，15m l），弃去，有机相用水15ml洗涤后，弃去水液，有机相蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备取缺黄芪的样品，同供试品溶液的制备项下操作制成阴性对照溶液

2.3 专属性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μl，按2.1项下的色谱条件分别进样测定，色谱图见图1～3，结果无干扰。

2.4 线性关系考察精密量取黄芪甲苷对照品溶液（0.49mg/m l）1、2、4、6、8、10ml，分别移入10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10μl注入液相色谱仪，测定，记录峰面积Y。以峰面积Y和进样量X的对数值进行线性回归，黄芪甲苷进样量在0.5～5μg之间范围内线性关系良好，回归方程为lgY＝1.353lgX＋1.672，r＝0.9999（n＝6）

2.5 精密度试验精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD＝0.07%。

2.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液和对照品溶液10μl，在24小时内分别进样7次（0，1，2，4，8，12，24h），记录峰面积，结果供试品溶液黄芪甲苷峰面积RSD＝0.13%，黄芪甲苷对照品峰面积RSD＝0.11%，表明供试品溶液及对照品溶液在24小时内稳定。

2.7 重复性试验取批号10101样品6份，按上述方法提取和测定，结果样品平均含量为0.404mg/g，RSD＝1.43%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验取已知含量为0.404mg/g的样品1g，精密称定，精密加入一定量黄芪甲苷对照品，按上述方法提取和测定，结果平均回收率为95.4%，RSD为2.08%。结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.9 样品含量测定取5批样品按上述方法提取和测定，结果见表2。

表2 四批样品含量测定结果

药典对黄芪药材中黄芪甲苷的含量限度定为不得少于0.040%，根据上述测定结果，故暂定：本品每袋含黄芪以黄芪甲苷计，不得低于2.0mg。

3 讨论

提取时间：取细粉3g三份，加2%氢氧化钾甲醇溶液60m l，分别回流0.5、1、1.5小时，按正文操作，测定，含量分别为0.24mg/g、0.41mg/g、0.40mg/g。回流1h与1.5h所得样液含量相近，节约起见，选择回流1小时。

分析方法选择：由于黄芪甲苷在液相测定时，需使用蒸发光散射检测器，考虑仪器的配置和成本问题，不少人采用薄层分析方法。但就本实验比较而言，易受结构相近成分干扰，专属性弱，结果偏高，偏差相对偏大。因而选用高效液相法作分析适宜。

本文采用高效液相法测定糖肾康颗粒中黄芪甲苷的含量，方法专属性强，结果可靠。

Determination of Astragaloside A in Tangshenkang Granule

GUAN Xiang－hang，ZHU Ming－lei
Nanjing Tongrentang Pharmaceutical CO.LTD.Nanjing 210012，China

Object：To determine the content of astragaloside A in Tangshenkang granule.Methods：A HPLC method was used.The mobile phase consisted of acetonitrile－water（35∶65）.The flow rate was 1.2mL/min.ELSD was used to determineResults：The linear range of astragaloside A was 0.5μg－5μg.The average recovery rate was 95.4%（RSD＝2.08%）.Conclusion：The HPLC method is accurate and can be used to control the quality of the Tangshenkang granule.