蚤休醇提物对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响

宋 强金 曼肖 阳杨刘英姿刘 丹林 欢李旭伟胥正敏

1.川北医学院基础医学院机能实验中心，四川 南充 637000；2.川北医学院麻醉学系，四川 南充 637000；3.川北医学院药学院，四川 南充 637000

蚤休醇提物对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响

宋 强1，2金 曼1，2肖 阳1，2杨刘英姿1，2刘 丹1，2林 欢1，2李旭伟1胥正敏3

1.川北医学院基础医学院机能实验中心，四川 南充 637000；2.川北医学院麻醉学系，四川 南充 637000；3.川北医学院药学院，四川 南充 637000

目的：研究蚤休醇提物对蟾蜍离体坐骨神经动作电位传导阻滞作用。方法：观察蚤休醇提物对蟾蜍离体坐骨神经复合动作电位的振幅和传导速度的影响。结果：0.0075g/ml，0.0175g/ml，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/ml 5种浓度的蚤休醇提物均使坐骨神经复合动作电位的振幅变小 （P＜0.01），传导速度变慢 （P＜0.01）并最终使坐骨神经动作电位消失。结论：蚤休醇提物能阻滞神经动作电位的传导。

蚤休醇提物；离体蟾蜍坐骨神经；复合动作电位；阻滞

蚤休（manyleaf paridis rhizome）出自明·陈嘉谟《本草蒙筌》。别名七叶一枝花、重楼。为百合科植物华重楼或七叶一枝花的根茎。华重楼分布华南、华东、西南及陕西、山西、甘肃、河南、湖北、西藏等地。七叶一枝花分布四川、贵州、云南、西藏等地。苦，寒，有小毒。入心、肝经。清热解毒，消肿，定惊，止咳［1］。相关研究表明，蚤休在热板法［2］实验中能显著提高小鼠的痛阈值；在醋酸扭体法［3］实验中能有效减少扭体次数。说明蚤休具有较好的抗炎、镇痛、活血作用［4］。可能与抑制一些内源性炎症介质，阻滞神经传导有关，表现为镇痛效应［5］。本研究从电生理学的角度，观察不同浓度蚤休醇提液对蟾蜍离体坐骨神经动作电位的影响，以进一步探讨蚤休醇提液镇痛作用的可能机制。

1 材料和方法

1.1 实验试剂 任氏液（NaC1 6.5 g，KC1 0.14 g，CaCl20.12 g；NaHCO30.20 g；NaH2PO40.01g加蒸馏水至1000 m1，所用试剂均为化学纯，购自成都科龙化工试剂厂）；蚤休（购自四川南充市百姓大药房）；95%乙醇溶液；85%乙醇溶液；75%乙醇溶液 （以上3种乙醇溶液均购自北京贞玉民生药业有限公司）。

1.2 实验仪器 超声波提取器（上海比郎仪器有限公司）；旋转蒸发仪 （上海禾青仪器设备有限公司）；恒温水浴箱（天津艾维欧科技发展有限公司）；BL－420F生物机能实验系统 （四川成都泰盟科技有限公司）；神经屏蔽盒 （四川成都泰盟科技有限公司）；电子天平Model：ES6000－1（沈阳龙腾电子有限公司生产）。

1.3 蚤休醇提物提取 取100g蚤休药材浸泡于400ml95%乙醇溶液中24小时，将其放入超声波提取器中，设置温度为25℃，提取40分钟，过滤，将滤液保存于4℃的冰箱中，滤渣再次浸泡，重复上述步骤，分别将滤渣浸泡于85%、75%的乙醇溶液中，得初提液1167ml。将初提液置于旋转蒸发仪中蒸馏30分钟，得液体113ml，将所得液体置于37℃水浴箱中，水浴5小时，烘干，得固体8.7g。用任氏液分别配置0.0075g/ml，0.0175 g/ml，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/m l的蚤休溶液。

1.4 实验动物分组 中华大蟾蜍24只，雌雄兼用，体重80～100g，由川北医学院实验动物中心提供，随机分为6组（任氏液组，0.0075g/ml，0.0175 g/m l，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/m l蚤休溶液组），每组6只。

1.5 坐骨神经标本制备 将蟾蜍进行称重，捣毁脑和脊髓，分离坐骨神经3～5cm，尽量将神经干周围的组织剔除干净，神经干脊柱端和足端用棉线结扎，置于任氏液中浸泡孵育10分钟以稳定其兴奋性。

1.6 动作电位引导并记录 将孵育后的神经干慢慢沿培养皿壁取出，沥干其水分，搭到神经屏蔽盒的电极上，测定动作电位振幅和传导速度。再将神经干取出屏蔽盒，放入不同浓度四数九里香溶液中浸泡2分钟，沿管壁轻轻取出，沥干其水分并防止刮伤神经。将该神经干依照之前的位置搭在电极上，在位于刺激电极与引导电极的神经干上分别放置浸湿药液（0.0075g/m l，0.0175 g/ml，0.0250g/ml，

0.0500g/ml，0.1000g/ml蚤休溶液）的小棉条，用BL－420F生物机能实验系统每隔2分钟检测动作电位相关值。动作电位速度测定需要测量两个电极之间距离。单个动作电位及传递速度测定仪器设置值：方式，单刺激；延时，5.00ms；波宽，0.05ms；强度，1.00V；频率，10KHz；采样率，1.25ms/div。

1.7 数据处理 记录各组给药前与浸泡后坐骨神经复合动作电位的振幅与传导速度，实验数据用±s描述，采用配对t检验进行显著性检验。

2 结果

2.1 蚤休溶液对蟾蜍坐骨神经复合动作电位振幅的影响随着药物作用时间的延长，5种浓度的药物均使得坐骨神经干复合动作电位的振幅逐渐变小，具有统计学意义 （P＜0.01）。药物浓度越大，动作电位振幅的变化越大 （见表1）。

表1 蚤休溶液对蟾蜍坐骨神经复合动作电位振幅的影响

2.2 蚤休溶液对蟾蜍坐骨神经动作电位传导速度的影响随着药物作用时间的延长，5种浓度的药物均使得坐骨神经干复合动作电位的传导速度逐渐变小，具有统计学意义（P＜0.01）。药物浓度越大，动作电位传导速度的变化越大，神经传导速度的改变与神经动作电位振幅的改变基本同步 （见表2）。

表2 蚤休溶液对蟾蜍坐骨神经动作电位传导速度的影响

3 讨论

本实验通过离体实验方法，观察了蚤休醇提物对蟾蜍坐骨神经复合动作电位传导的影响。实验结果表明蚤休醇提物对坐骨神经动作电位的传导具有明显阻滞的作用，提示阻滞神经动作电位的传导是蚤休的镇痛作用可能的机制之一。

有关蚤休的化学成分，张宏武等［6］从蚤休醇提物中分离并鉴定出七叶一枝花根含蚤休甙、薯蓣皂甙，薯蓣皂甙元的3－葡萄糖甙、3－鼠李糖葡萄糖甙、3－鼠李糖阿拉伯糖葡萄糖甙和3－四糖甙，娠二烯醇酮－3－查考茄三糖甙等多种皂甙。蚤休的活性成分极性较大，含量较小，化学成分研究进展较为困难，对于蚤休的镇痛药理机制及现代中药药学的开发探索，还可做进一步的深入研究。

［1］李经纬，区永欣，余瀛鳌，等.简明中医辞典 ［M］.北京：中国中医药出版社，2001：15－16.

［2］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学，第3版 ［M］.北京：人民卫生出版社，2002：883－913.

［3］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2000：484－484.

［4］柳燕，窦昌贵.蚤休合剂镇痛抗炎活血作用实验研究 ［J］.时珍国医国药，2005，16（8）：736－737.

［5］Abbott FV，Franklin KB.Noncompetitive antagonism of morphine analgesia by diazepam in the formalin test［J］.Pharmacol Biochem Behav，1986，24（2）：319－321.

［6］张宏武，邹钟梅，徐丽珍，等.蚤休脂溶性化学成分的研究 ［J］.西北药学杂志.2004，19（4）：161－162.

Effects of manyleaf paridis rhizome on Com pound Action Potential of Sciatic Nerve of Toad

Objective：To study the blockade effect of manyleaf paridis rhizome on action potential of sciatic nerve of toad.Methods：The influence of manyleaf paridis rhizome on amplitude and conduction velocity of compound action potential of sciatic nerve of toad was observed in vitro.Results：The decoction of manyleaf paridis rhizome in five different concentrations（0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/m l）could decrease the amplitude（P＜0.01）and slow down the conduction velocity（P＜0.01）.The action potential of sciatic nerve vanished at last.Conclusion：manyleaf paridis rhizome can block the conduction of action potential of nerve.

manyleaf paridis rhizome；Sciatic nerve of toad in vitro；Compound action potential；Blockade

R282.74

A

1007－8517（2013）09－0026－02

2013.03.28）

川北医学院2012年大学生科研项目。

宋强，川北医学院麻醉学系2010级本科学生，e－mail：875373158＠qq.com。

李旭伟（1980－），汉，硕士研究生，四川富顺人，讲师，研究方向为心血管生理与神经电生理学。E－mail：lxwhi＠qq.com