XS-800i血细胞分析仪显微镜复检规则的建立与评价

孙 燕，鲜玉萍

（四川省成都市第六人民医院检验科 610051）

近年来，随着分析技术的不断发展，血常规检测的准确性、灵敏度和检测效率均大大提高。同时，全自动血细胞分析仪的使用也使细胞数量及形态学分析的参数不断增多，为临床提供了更多的诊疗依据。但由于血细胞分析仪尚不具备识别细胞形态的能力，因此，在形态学检查方面只能作为筛选的手段。对于可疑或异常的标本进行显微镜复检很有必要［1］。目前五分类血细胞分析仪的检测筛检标准在国内外无统一规定，如果不在本室制定严格的复检规则可能会导致错误的检测报告发放及一些疾病的漏检［2］。2005年国际血液学复检专家组通过对13 289例血液标本进行分析后，推荐了41条自动血细胞分析和分类复检规则［3］。但这只是通则，对于不同的实验室并无针对性。因此，本科室根据本实验室的具体情况及Sysmex XS-800i血细胞分析仪的性能特点，参考41条复检规则，与临床医生讨论，制订了适合本实验室的显微镜复检规则，并对复检规则进行了验证，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2011年9月11～20日共收集1 002例标本，均来自于本院住院及门诊患者的静脉血抗凝标本（抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾），用Sysmex XS-800i血细胞分析仪按常规进行血细胞检测。

1.2 仪器与试剂 XS-800i全自动血细胞分析仪、原装配套试剂、质控物均由日本Sysmex公司提供。显微镜为日本Olympus产品。

1.3 方法

1.3.1 人员培训 根据《全国临床检验操作规程》和《白细胞分类计数参考方法》中制定的操作程序（SOP）［4－5］，对参与人员进行培训。仪器操作和结果判断由1名有经验的主管技师负责，涂片染色和镜下检查分别由另外4名主管技师负责，进行双盲检验。

1.3.2 仪器准备 由Sysmex公司工程师对仪器进行校准，每天的室内质控监测必须在控。

1.3.3 检测方法 每例标本制备1张血涂片，写好编号，风干后用瑞氏染液进行染色，保证涂片和染色良好。由有经验的检验人员按培训方法进行镜检。内容包括：（1）白细胞（WBC）分类计数每人每张血涂片分类200个 WBC，并观察形态；（2）WBC和血小板（PLT）数量估计；（3）红细胞（RBC）及PLT 的大小、形态；（4）有无巨大PLT及PLT聚集；（5）有无有核RBC及血液寄生虫。

2 结 果

2.1 复检规则建立的依据 利用Sysmex XS-800i血细胞分析仪自身的报警系统，根据仪器报警提示对 WBC、RBC、PLT的数量异常和形态异常进行判断，参照“国际41条规则”，与临床医生讨论，结合本科室工作量大的具体情况，制订出复检规则17条。

2.2 判断标准

2.2.1 仪器结果阳性判断标准 仪器检测结果符合17条显微镜复检规则中任一条即为阳性。

2.2.2 涂片镜检阳性判断标准 由国内血液学复检专家小组将国际制定的12条镜检阳性规则进一步量化完善，统一了评估标准［6］。（1）RBC明显大小不均（大小相差1倍以上），中空淡染（大于1／2淡染区的RBC＞30% ）；（2）巨大PLT＞15%；（3）见到PLT聚集；（4）有Dohle小体的粒细胞大于1%；（5）有中毒颗粒的中性粒细胞大于10%；（6）空泡变性粒细胞大于10% ；（7）原始和幼稚细胞大于或等于1% ；（8）早幼和中幼粒细胞大于或等于1% ；（9）晚幼粒细胞大于2%；（10）异型淋巴细胞大于5% ；（11）NRBC大于或等于1%；（12）浆细胞大于或等于1%。镜检结果符合上述12条中任何一条即为阳性。

2.2.3 真阳性、假阳性及真阴性、假阴性判断标准 真阳性为仪器及镜检结果均为阳性；假阳性为仪器结果为阳性，镜检结果为阴性；真阴性为仪器及镜检结果均为阴性；假阴性为仪器结果为阴性，镜检结果为阳性。

2.3 验证

2.3.1 1 002例标本的验证情况 根据上述判断标准，将人工显微镜镜检结果与仪器报警信息进行比较，1 002例标本中真阳性率6.7%（67／1 002），假阳性率15.7%（157／1 002），真阴性率75.1%（753／1 002），假阴性率2.5%（25／1 002）。

2.3.2 1 002例标本中真阳性、假阳性情况分析 1 002例标本中需复检标本数为224例，将224例中各项的真阳性与假阳性进行了分类分析结果见表1。

2.3.3 17条复检规则在实际工作中的应用情况 2011年10月至2012年1月本科室每月的复检率分别为24.6%、21.9%、23.5%、21.3%，4个月的平均复检率为22.8%，与验证结果相符。

3 讨 论

为了弥补血细胞分析仪对细胞形态识别能力的不足，需要建立适合本实验室的显微镜复检规则，并进行必要的显微镜复检。复检规则建立后，需对其科学性及实用性进行验证。本实验室制订Sysmex XS-800i全自动血细胞分析仪17条显微镜复检规则遵循的原则：（1）根据该仪器对细胞形态的识别能力；（2）该仪器均能提供复检规则涉及的参数；（3）复检范围涵盖了仪器的所有参数及形态学特征；（4）在确保病理细胞不漏检，保证筛选质量的基础上尽量降低复检率，使患者能在较短的时间内获得正确的检验报告；（5）假阴性是制定复检规则的关键参数，具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性，其他参数的假阴性率应小于5%，国际血液学复审协作组认为5%是为保证患者检测结果安全性的最大可接受的假阴性率；（6）在较低假阴性率的前提下降低假阳性率，假阳性率过高会增加工作量，延迟报告发放时间；（7）白血病患者及临床医生提出阅片需求的必须镜检［7］。疾病的正确诊断需要了解患者的病史，进行体格检查及实验室检查。无论仪器有无异常提示，只要临床医生要求人工镜检，就必须进行。涂片镜检可确切反映白血病细胞特征，在白血病诊治过程中起关键作用，因此，对白血病患者的标本必须进行镜检。

按照本实验室制订的复检规则，通过1 002例标本进行验证，总符合率为81.8%（真阳性加真阴性）。其中假阴性25例。2例幼稚细胞漏检，但并非白血病患者，该病例均为癌症化疗患者，白细胞总数正常，分类200个白细胞中中幼粒细胞只见到2个（仅占1% ），处在早幼粒、中幼粒大于或等于1%镜检阳性临界值附近。出现这种情况与人工镜检分类计数的变异率有关，比例越低，变异越大，而未见到其他幼稚细胞。另外在1 002例标本中2例白血病复检均为阳性，未漏检。

复检以规则统计，血小板（规则13、15）复检率最高，占总复检率的41.1%，但其假阳性率高达71.7%。其主要原因可能是乙二胺四乙酸抗凝剂和静脉采血过程欠规范造成。白细胞报警（规则14））次之，占总复检率32.1%；白细胞（规则2～7）第3，约占总复检率22.8%，后二者假阳率虽然分别高达81.9%、52.9%，但为了防止白血病幼稚细胞漏检是必要的。其他规则虽然复检率低，但复检阳性率高，其复检尤为重要。

按照上述复检规则，在这次验证过程中，仪器检测结果需要复检的有224例，复检率为22.4%，后经本科室使用4个月统计，复检率分别为24.6%、21.9% 、23.5% 、21.3%；平均复检率为22.8%。通过1 002例标本进行分析，对该17条复检规则进行验证，经统计分析得出真阳性率为6.7%，假阳性率为15.7%，真阴性率为75.1%，假阴性2.5%。2.5%的假阴性率符合国际血液学复审协作组关于假阴性率小于5.0%的规定，22.4% 的复检率是合理的。

［1］ 彭黎明，邱广斌，赵威，等.自动血细胞计数和白细胞分类计数的复检规则［J］.中华检验医学杂志，2007，30（4）：377.

［2］ 孙芾，王厚芳，于俊峰，等.血细胞显微镜复检标准的制定及临床应用［J］.中华检验医学杂志，2005，28（2）：155-157.

［3］ Barnes PW，McFadden SL，Machin SJ，et al.The International Consensus Group for Hematology Review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC diferential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（1）：83-90.

［4］ 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，2006：133.

［5］ 中华人民共和国卫生部.白细胞分类计数参考方法［M］.北京：人民卫生出版社，2005：4.

［6］ 中华检验医学杂志编辑委员会.全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检标准释义［J］.中华检验医学杂志，2007，30（3）：380.

［7］ 丛玉隆，王昌富，乐家新.血细胞自动化分析后血涂片复审标准制定的原则与步骤［J］.中华检验医学杂志，2008，31（6）：731.