PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义*

李向阳 钱如林 刘凤娟 张会民 崔东 王珂

肺癌是起自肺支气管与肺泡上皮细胞中的临床常见疾病，属于恶性肿瘤，对人类健康与生命有严重威胁，且已成为全球范围内恶性肿瘤中第一致死疾病[1]。肺癌发病机制较为复杂，其发病及发展过程中有许多基因参与其中[2]。非小细胞肺癌是肺癌常见类型，在所有肺癌中占比高达80%以上[3]。增殖细胞核抗原（PCNA）属于DNA多聚酶辅助蛋白，已有临床研究证实，PCNA可对细胞增值活性予以直接反映，是DNA复制中必不可少的附属蛋白，可对DNA增值发挥重要调节作用[4]，其含量变化和细胞增值间具有一定联系。为对PCNA与非小细胞癌发病及发展间的关系进行深入探讨，笔者选取本院手术切除非小细胞肺癌组织蜡块76例，同时选取正常肺组织24例，利用免疫组化SP法对两组组织中PCNA表达情况进行分析，现将相关情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2008年6月-2010年7月手术切除非小细胞肺癌组织蜡块76例作为观察组，所有标本均为手术过程中切取，且已经病理确诊。其中男42例，女34例，患者年龄为35～81岁，平均为（56.7±4.6）岁；其中腺癌29例，鳞癌43例，腺鳞癌4例。根据国际抗癌联盟（UICC）于1997年制定的TNM分期标准进行分级，其中Ⅰ期18例，Ⅱ期33例， Ⅲ期25例。所有患者在手术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。手术中同时在距离肿瘤至少5 cm处取健康肺组织24例作为对照组。

1.2 方法 采用免疫组化SP法对两组组织中PCNA表达情况进行检测。SP试剂盒由北京中山生物技术有限公司生产，鼠抗人PCNA单克隆抗体由迈新公司生产，严格按照说明书展开操作，具体操作步骤为：对切片行脱蜡水化，利用3%H2O2在室温下进行5～10 min孵育，置于高压锅中行抗原修复；将一抗滴入其中，于4 ℃环境下静置过夜，第2天加入二抗，在37 ℃下进行20 min孵育；用DAB进行显色处理，以苏木素作为标准对比染色结果，利用树脂进行封片。

1.3 判定标准 通过对PCNA蛋白染色结果分析对检测结果进行判定。PCNA阳性：染色部分位于细胞核上，为褐色或棕色染色，且染色方式为弥漫型或颗粒型（其中颗粒型较为常见）；阴性：切片中未见阳性细胞。

1.4 统计学处理 利用统计学分析软件SPSS 14.0对相关数据进行统计学分析，计数资料采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组间PCNA表达情况对比 所有PCNA表达均于细胞核中均匀分布，阳性表达为细胞核中有棕黄色颗粒物出现。对照组PCNA阳性率为8.33%（2/24），观察组PCNA阳性率为72.37%（55/76），观察组PCNA阳性率显著高于对照组（P<0.05）。

2.2 不同分期中PCNA表达情况 在76例非小细胞肺癌组织标本中，Ⅰ～Ⅱ期共51例，经检测PCNA阳性36例，阳性率为70.59%；Ⅲ 25例，经检测PCNA阳性19例，阳性率为76.00%。Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ患者PCNA阳性率间比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 PCNA阳性与阴性患者1年及3年生存率对比 对观察组76例患者展开为期3年随访，对1年生存率及3年生存率进行记录。其中 55例PCNA阳性患者1年生存率为52.73%（29/55），3年生存率为16.36%（9/55）；21例PCNA阴性患者1年生存率为80.95%（17/21），3年生存率为38.10%（8/21）。对比可知，PCNA阳性患者1年及3年生存率均显著低于PCNA阴性患者（P<0.05）。

3 讨论

PCNA也叫做周期素，属于酸性核蛋白，其分子量为36 KD。PCNA是对细胞增值活性予以直接反映的重要标志物，可在细胞增殖过程中，对G1期向S期过渡阶段发挥调节作用，可对DNA前导链与后随链合成予以协调，和细胞核增殖关系密切，可作为对细胞增殖状态予以衡量的重要客观指标[5-6]。通常情况下，当肿瘤细胞分化程度较低时，其增殖能力相对较强，此时PCNA表达也相对较强。因此，PCNA表达可对肿瘤细胞DNA复制活跃程度予以直观反映，从而对肿瘤恶性程度予以显示。

肺癌组织中细胞增殖活性较为旺盛，因此其PCNA含量与正常细胞相比明显增高。在本组研究中，对照组PCNA阳性率为8.33%，观察组PCNA阳性率为72.37%，观察组PCNA阳性率显著高于对照组（P<0.05），由此可知在肺癌组织中有显著增殖上调现象。同时，本次研究发现，虽然Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ期患者PCNA阳性率间差异无统计学意义（P>0.05），但随着临床分期推移，非小细胞肺癌组织中淋巴结的转移范围会不断扩大，PCNA阳性表明肿瘤增殖具有较高活跃性。在76例非小细胞肺癌组织中，PCNA阳性者1年及3年生存率均显著低于PCNA阴性患者（P<0.05）。由此可见，PCNA阳性表达说明患者预后相对较差。

因为非小细胞肺癌组织中PCNA阳性表达提示肿瘤细胞有旺盛增殖能力，这说明PCNA阳性表达水平和是否发生淋巴结转移与肺癌分化程度间有密切联系[7-9]。因此，PCNA表达可在肺癌患者接受个体化治疗中发挥重要指导作用，同时有利于肿瘤预后判断工作。在非小细胞肺癌患者病理分期为Ⅰ～Ⅲ期、可行手术切除治疗时，应展开分子靶向药物、手术治疗与化疗的综合治疗过程。在术前应利用经皮肺穿刺及气管镜活检等方式对病理予以明确，同时利用免疫组化SP法对患者PCNA表达水平进行检测。若检测结果显示PCNA为阳性表达，则提示患者肿瘤恶性程度相对较高且预后较差。因此在患者无绝对禁忌证时，手术治疗对其肿瘤分期降低或远期生存率提高有重要意义。

总之，PCNA高度表达是对小细胞肺癌患者预后造成影响的重要因素，其异常表达和肺癌发病、进展与转移间有密切关系，可作为对肺癌恶性程度与预后进行准确判断的重要指标。

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