趋化因子受体7和血管内皮生长因子C在前列腺癌中的表达

袁 振 蒋雷鸣 王 松 (桂林医学院附属医院泌尿外科，广西 桂林 541001)

肿瘤的生长、转移受多种因素影响，有研究〔1〕发现多种肿瘤细胞可表达趋化因子受体(CCR)7，而其配体CCL19/CCL21则高表达于癌细胞转移相关部位，且他们与多种肿瘤的迁移、侵袭和转移密切相关。血管内皮生长因子C(VEGF-C)被认为是特异性很强的新生淋巴管刺激因子，在肿瘤微环境中，肿瘤细胞、基质成纤维细胞可分泌VEGF-C，其通过激活受体促进内皮细胞增生，亦可增强淋巴管的通透性，有利于逃逸的肿瘤细胞通过淋巴管道发生转移〔2〕。但CCR7和VEGF-C在前列腺肿瘤中的研究甚少，两者在前列腺肿瘤淋巴转移中是否具有协同作用也罕见报道，本实验采用快捷免疫组化方法检测前列腺癌组织中CCR7和VEGF-C蛋白的表达情况，探讨其与前列腺癌临床病理因素和淋巴转移的关系。

1 材料与方法

1.1 实验材料 标本取自桂林医学院附属医院2007～2009年手术切除并经病理检查确诊且术前未经任何抗癌和激素内分泌治疗的前列腺癌组织蜡块45例，年龄56～85岁，平均72岁。按修订的Gleason评分系统(2004年)进行病理分期:2～4分为高分化癌，10例;5～7分为中分化癌，16例;8～10分为低分化癌，19例。按TNM分期(2002年)标准进行临床分期:T1～T225例，T3～T420例;经临床客观检查、影像检查及手术资料判断其中有淋巴结转移15例，无淋巴结转移30例。对照组15例石蜡标本均取自前列腺电切术且经病理证实为良性前列腺增生。

1.2 主要试剂及方法 兔抗人CCR7多克隆抗体是加拿大PLLABS公司产品(购自深圳华拓生物技术公司 PL031305R，rabbit IgG)。兔抗人VEGF-C多克隆抗体(ZA-0266)购于北京中杉金桥生物技术有限公司。DAB显色剂购于福州迈新生物技术有限公司。严格按照二步快捷免疫组化法试剂盒使用说明书进行操作，行CCR7和VEGF-C免疫组化染色，DAB显色。以PBS代替一抗行阴性染色，用已知阳性切片做阳性对照。

1.3 结果判定 根据染色的深度及阳性细胞的数量分别记分，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞数＜5%为0分，5% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。二项结果相加，＜2分阴性，2～3分弱阳性，4～5分中等阳性，6～7分强阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行 χ2检验;CCR7和VEGF-C相关性采用Spearman秩相关性分析。

2 结果

2.1 CCR7和VEGF-C在不同前列腺组织中的表达 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌组织中阳性表达率分别为64.45%和68.89%，CCR7和 VEGF-C蛋白主要定位于细胞膜与胞质。CCR7和VEGF-C蛋白在良性前列腺增生组织中表达率分别为13.33%、26.67%，癌组织与正常组织比较差异显著(P＜0.01)。在高、中组和低分化组中CCR7和VEGF-C蛋白阳性表达率分别为50.00%和84.21%，53.85%和89.47%，组间比较差异显著(P＜0.05);在不同TNM分期中，T1～T2组的CCR7和VEGF-C蛋白阳性表达率分别为44.00%和52.00%，明显低于T3～T4组的90.00%和90.00%，差异显著(P＜0.01);转移组的CCR7和VEGF-C蛋白阳性表达率分别为93.33%和100%，明显高于无转移组50.00%和53.33%，同样差异显著(P ＜0.01)。

2.2 CCR7和VEGF-C在前列腺癌中表达的相关性 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌中同时表达阳性57.78%，同时阴性24.45%，二者正相关(rs=0.616，P ＜0.01)。

3 讨论

CCR7/CCL21主要与肿瘤向淋巴系统转移相关，而CXCR4/CXCL12则主要与肿瘤向肺、肝脏、骨髓和脑等远端器官转移相关〔3，4〕。更多研究进一步证实〔5，6〕，多种肿瘤细胞均可表达趋化因子受体CCR7，且CCR7阳性的肿瘤细胞优先转移至其配体CCL21和/或CCL19富集的淋巴结内从而促进肿瘤的转移。近年来，关于黑色素瘤、头颈部肿瘤、乳腺癌及胃癌的研究，都表明了CCR7在促进肿瘤特异性地向淋巴结转移过程中的重要作用。在小鼠移植瘤实验中发现，鼠黑色素瘤高表达CCR7，且能明显提高其向区域淋巴结转移的速度和效率，而且通过其单克隆抗体可阻断CCL21的作用，能阻止淋巴结转移的发生，这表明CCL21/CCR7的确可介导淋巴结转移〔7，8〕。本研究说明CCR7在前列腺癌淋巴转移中起关键作用;同时CCR7表达还与肿瘤病理分化程度及临床分期密切相关，且随肿瘤恶性程度增加CCR7表达有逐渐增强趋势。

新的淋巴管生成是肿瘤淋巴道转移的始动因素〔9〕。淋巴管生长因子VEGF-C作为VEGF家族成员之一，是促进淋巴道新生的关键因子。在成人，VEGF-C通过结合并激活淋巴内皮细胞表面的受体VEGFR-3，能促进淋巴内皮细胞的增殖、存活与迁移〔10〕。在动物模型中发现，VEGF-C的过表达可诱导肿瘤新生淋巴管生成，促进淋巴结转移。VEGF-C通过旁分泌的形式结合表达于微淋巴管内皮的特异性受体VEGFR-3，导致受体酪氨酸磷酸化，诱导微淋巴管的生成并影响淋巴管内皮的通透性，从而促进肿瘤转移〔11〕。还有文献报道VEGF-C还可以促进肿瘤新生血管的形成，肿瘤血管生成促使肿瘤的体积增加，肿瘤边缘部位的肿瘤细胞易通过静脉-淋巴管吻合处从血循环中进入淋巴管，并且淋巴结转移的概率随血循环中肿瘤细胞的增加而增高，因此肿瘤血管生成对淋巴结转移具有间接的促进作用〔12〕。Valtola等〔13〕对乳腺癌的研究结果也证实，VEGF-C 阳性表达者的淋巴转移率和死亡率均高于阴性表达者。本研究说明VEGF-C在前列腺癌淋巴转移中起关键作用;VEGF-C表达还与肿瘤病理分化程度及临床分期密切相关，且随肿瘤的发生、发展VEGF-C表达有逐渐增强之势;VEGF-C在取自尸检的4例正常前列腺组织均也呈阴性表达。总之，VEGF-C在前列腺癌的发生、进展和转移中起着重要作用，因此检测其表达对肿瘤进展程度、有无淋巴转移有一定临床意义。

CCR7和VEGF-C在前列腺癌的疾病进程中有一定协同作用，Cassella等〔14〕研究认为，VEGF-C激活的淋巴管可促进淋巴管内皮细胞产生更多的趋化因子CCL21，这样更方便CCR7表达阳性的肿瘤细胞进入淋巴管内。本研究提示在前列腺癌的疾病进程中CCR7与VEGF-C的表达正相关，两者之间具有某种协同促进作用，但具体机制还不十分清楚。有研究认为〔15〕靶器官趋化因子及肿瘤细胞中受体的表达在决定肿瘤细胞转移部位上起着关键作用。肿瘤细胞可能发生了基因突变或翻译异常致表达CCR7，并通过趋化因子调节淋巴细胞归巢的机制而形成转移。肿瘤组织中VEGF-C表达增高，促进淋巴管生成和通透性增强，淋巴内皮表达的趋化因子也相应增多。CCR7阳性的肿瘤细胞受到来自淋巴管内皮和淋巴结中趋化因子的吸引，最终侵入淋巴管而发生转移。

1 Kodama J，Hasengaow A，Kusumoto T，et al.Association of CXCR4 and CCR7 chemokine receptor expression and lymph node metastasis in human cervical cancer〔J〕.Ann Oncol，2007;18(1):70-6.

2 Issa A，Le TX，Shoushtari AN，et al，Vascular endothelial growth factor-C and C-C chemokine receptor 7 in tumor cell-lymphatic cross-talk promote invasive phenotype〔J〕.Cancer Res，2009;69(1):349-57.

3 Liu Y，Li J，Gu Q，et al.Correlation effect of EGFR and CXCR4 and CCR7 chemokine receptor in predicting breast cancer and prognosis〔J〕.J Esp Clin Cancres，2010;29(1):16-25.

4 Ueda M，Shimada T，Goto Y，et al.Expression of CC-chemokine receptor7(CCR7)and CXC-chemokine receptor 4(CXCR4)in head and neck squamous cell carcinoma〔J〕.Auris Nasus Larynx，2010;37(4):488-95.

5 Mashino K，Sadanaga N，Yamaguchi H，et al.Expression of chemokine receptor CCR7 is associated with lymph node metastasis of gastric carcinoma〔J〕.Cancer Res，2002;62(10):2937-41.

6 Ding YZ，Yutaka Shimada，Masato Maeda，et al.Association of CC chemokine receptor 7 with lymphnode metastasis of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Clin Cancer Res，2003;9(9):3406-12.

7 Barthel SR，Gavino JD，Descheny L，et al.Targeting selections and selection ligands in inflammation and cancer〔J〕.Expert Opin Targets，2007;11(11):1473.

8 Tobita K，Zuckerbraun BS，Mc Curry KR.Toll-like receptor 4 mediates the early inflammatory response after cold ischemia/reperfusion〔J〕.Transplantation，2005;84(10):1279.

9 Williams CS，Leek RD，Robson AM，et al.Absence of lymphangiogenesis and intratumoural lymph vessels in human metastatic breast cancer〔J〕.J Pathol，2003;20(4):195-206.

10 Joukov V，Pajusola K，Kaipainen A，et al.A novel vascular endothelial growth factor，VEGF-C，is a ligand for the FLt4(VEGFR-3)and KDR(VEGFR-2)receptor tyrosine kinases〔J〕.EMBO，1996;15(7):1751-60.

11 David G.New molecular markers for the study of tumor lymphangiogenesis J〔J〕.Anticancer Res，2001;21(9):4279-83.

12 Liotta LA，Kohn EC.The microenvironment of the tumour host，interface〔J〕.Nature，2001;411(6835):375.

13 Valtola R，Salven P，Helkkila P，et al.VEGFR 3 and its ligand VEGF-C are associated with angiogenesis in breast cancer〔J〕.Am J Pathol，1999;154(5):1381.

14 Cassella M，Skobe M.Lymphatic vessel activation in cancer〔J〕.Ann NY Acad Sci，2002;979(10):120-30.

15 Muller A，Homey B，Soto H，et al.Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis J〔J〕.Nature，2001;410(6824):50.