核酸原位杂交技术在细胞病理学的应用

赵 乐韩 玲

（1 河南省南阳市中心医院，河南 南阳 472000；2 河南省南阳市控制中心，河南 南阳 472000）

核酸原位杂交技术在细胞病理学的应用

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（1 河南省南阳市中心医院，河南 南阳 472000；2 河南省南阳市控制中心，河南 南阳 472000）

核酸原位杂交技术；细胞病理学

杂交的技术原理是核酸碱基互补，指DNA互补链，DNA与RNA或RNA互补链间发生杂交。原位杂交是互补碱基序列形成氢键的过程。构成稳定的复合体或杂交体。主要工具是标记的特定序列探针。目前应用的探针标记物多是非放射性核位素。探针种类主要有四类：双链DNA，单链DNA，反义RNA和自动化合成的寡核苷酸探针。它们各有其本身特点。

原位杂交的杂交形式主要有三类：①DNA原位杂交。在细胞和组织水平上，多用于感染因子的检测，如人乳头状瘤病毒（HPV）、乙型肝炎病毒（HBV）等。②荧光原位杂交，多用于细胞遗传性疾病，在间期核和染色体水平上分析染色体异常如三体病、基因扩张、基因易位。③RNA原位杂交，主要用于RNA病毒和基因表达水平检测，如肿瘤的某种生物标志物以及病原微生物基因表达的RNA，EB病毒编码的小RNA。

在感染性疾病、细胞遗传性疾病和肿瘤三大类疾病中，都有应用原位杂交技术的成功经验。

1 人类乳头状病毒

HPV是国际公认的第一类致癌物，特别被列为女性高发肿瘤宫颈癌的重要病因。现已发现HPV有200多种亚型，HPV可感染多种器官，其中30余亚型或更多与生殖道感染有关。从HPV于癌发生的相关性，可分为高危型和低危型。通常可以采用HPV广谱探针原位杂交作为病原诊断的初筛。HPV原位杂交所采用的探针通常是双链DNA，将HPV原位杂交检测与液基细胞学结合起来可应用于宫颈癌筛查和预防。适用于临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型。

2 乳腺癌Her2/neu（c-erbB_2）基因

采用原位杂交技术检测乳腺Her2/neu（c-erbB_2）基因扩增是诊断细胞遗传性疾病染色体结构畸变的一个例子。有Her2/neu基因扩增的乳腺癌患者预后差，与乳腺癌复发时间、总体生存高度相关。大量研究证明有Her2/neu基因扩增的乳腺癌，对人源性单克隆抗体曲妥珠/赫赛汀治疗有良好的反应。

3 EB病毒

EB病毒除了作为感染源引起人类感染性疾病，如传染性单核细胞增多症，慢性活动性EB病毒感染等。更重要的是它与许多恶性肿瘤有关。在国际上也被列为第一类致癌物。常见的有Burkitt淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，鼻咽癌以及胃腺癌等，另外也包括一些免疫缺陷相关的淋巴组织增生性疾病如器官移植后淋巴组织增生性疾病，HIV病毒感染相关淋巴瘤等。对上述疾病进行相关病原检测，最佳选择是采用DNA探针，与EB病毒编码的小RNA进行原位杂交。其优势在于感染的细胞通常有106～107小RNA拷贝数，最容易被捕捉而获得确切结果。在中国90%以上人存在有EB病毒的潜伏感染。因此在人体的淋巴结和扁桃体中发现这类潜伏感染细胞并无特殊诊断价值。检测到疾病感染状态细胞，还要注意分析感染的细胞类型，密切结合常规组织学和细胞学才能分清EBER阳性信号的诊断价值和意义。

R361+.3

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：1671-8194（2013）02-0377-02