畲族与汉族乙肝患者HBV拉米夫定和阿德福韦天然耐药分析

吴根凤 浙江省景宁县人民医院检验科 景宁 323500

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染性疾病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。乙型肝炎病毒感染可引起肝脏炎症和纤维化，严重者可发展为肝硬化甚至肝癌，是严重的社会和公共卫生问题。HBV感染呈世界性流行，不同地区HBV感染流行强度不同，主要治疗方法是抗病毒治疗[1]。2005年—2010年，中国年报告乙肝发病98万～118万例[2]。根据2010年慢性乙型肝炎病毒治疗专家委员会制定的《慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识》，核苷（酸）类似药物（NUCs）如拉米夫定和阿德福韦逐渐成为乙肝临床抗病毒治疗的的常规一线药物，而NUCs类药物存在耐药变异率高的特性[3]，因此，对HBV感染者使用拉米夫定和阿德福韦治疗前进行用药筛选十分必要。现对我县畲族与汉族乙肝患者HVB拉米夫定和阿德福韦天然耐药情况进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年6月—2011年4月在本院初诊确诊感染HBV的患者100例，诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》[4]，其中畲族50例，均来自本县畲族聚居自然村；汉族50例；男62例，女38例；年龄20～59岁，平均38岁。检查HBsAg阳性均超过6个月，HBV-DNA阳性伴有肝功能受损，无服用拉米夫定或阿德福韦等核苷（酸）类似药物治疗史。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 试 剂 HBV-DNA定量检测的引物及探针，均由杭州艾迪康医学检验中心提供；DNA提取试剂盒及扩增试剂、基因芯片由宝生物工程（大连）有限公司提供。

1.2.2 仪 器 日本TaKaRa扩增仪、ABI3500XL测序仪、Roche Light Cycle荧光定量扩增仪、安捷伦MX3000P荧光定量PCR分析仪。

1.3 方 法 采用一次性添加促凝剂真空采血管采集患者静脉血3mL,37℃水浴8min，4 000r/min离心5min，分离血清1mL于灭菌微量离心管转移。采用PCR技术扩增乙型肝炎病毒（HBV）的P基因片段，使芯片上特异性核酸探针(检测探针包括rt180、rt181、rt204、rt173、rt233、rt236)与HBV病毒特定基因进行杂交、洗脱，通过生物信号放大检测技术，使用仪器研读结果。

1.4 统计学方法 不同数据组间比较及构成比采用Pearson Chi-square Test（χ2）和Fisher's Exact Test，P＜0.05差异有统计学意义。所有数据采用SPSS 18.0统计软件分析完成。

2 结果

2.1畲族与汉族HBV患者携带天然耐药突变率比较 100例血清样本分析，共检到天然耐药患者10例，天然耐药率为10%（10/100）；其中畲族2例，耐药率4.0%（2/50）；汉族8例，耐药率16.0%（8/50）。畲族天然耐药率明显低于汉族，差异有统计学意义（χ2=4.000，P＜0.05）

2.2畲族与汉族HBV天然耐药基因类型分布结果通过对10例天然耐药患者携带的HBV耐药基因类型进行统计分析，其中2例畲族患者携带的天然耐药HBV株耐药基因突变位点均为对拉米夫定耐药的rt204，其协同位点rt173、rt180以及阿德福韦耐药相关基因rt181、rt233、rt236均未发生突变，rt204突变类型为rtM204I；分析8例汉族患者携带的天然耐药HBV株耐药基因突变位点，其中1例对拉米夫定及阿德福韦均耐药，5例对拉米夫定耐药，2例对阿德福韦耐药，见表1。

3讨 论

景宁畲族自治县是全国唯一一个畲族自治县，居民以汉族和畲族为主。全县常住畲族人口3万人，本次研究采集的畲族标本均来自于畲族聚居的畲族自然村，居民以务农为主，交通相对封闭，人口流动性不大，使得畲族HBV感染者在HBV-DNA水平及同为rtM204I。

总之，在本次景宁畲族自治县HBV感染人群对拉米夫定及阿德福韦的天然耐药调查中，畲族天然耐药率为4.0%，汉族16.0%。汉族人群乙肝病毒天然耐药率明显高于畲族人群，差异存在统计学意义（χ2=4.000，P＜0.05）。故而，应根据具体情况选择抗病毒治疗方案，而在抗病毒药物使用前以及使用过程中，对耐药基因的随时检测，也是必须的，这不仅能够使抗病毒药物发挥最大的效用，及时控制病情，更能够有效降低患者HBV的耐药率。但本课题研究样本总量较少，整体族群天然耐药发生率有待进一步加大样本量进行观察比较。病毒基因型上存在差异。调查表明，丽水地区畲族人群感染HBV以B和C型为主，其中C型基因占比大于B型，与同一地区的汉族人群相比具有显著差异；丽水地区畲族人群中，B型感染者较C型感染者HBV-DNA拷贝数低，HBeAg阳性率低，预示B型感染者较C型感染者的病毒活动性弱，肝脏损害轻，预后好[5]。而HBV共价闭合环状DNA（ccc DNA）与患者血清中HBV-DNA含量呈正相关[6]。由此畲族和汉族在抗病毒治疗方案的选择和疗效的判断上可以存在差异。

研究表明，未经拉米夫定治疗的乙肝患者亦存在较高的YMDD变异率，临床上应用抗病毒治疗前应对患者进行是否存在耐药基因变异进行检测[7]。而汉族相对于畲族，在人员流动性以及接触人群上都较为广泛，使其感染HBV的概率增加，而随着核苷（酸）类似药物（NUCs）如拉米夫定和阿德福韦在乙肝临床抗病毒治疗一线的使用，感染高变异的耐药株可能性也随之增加。本研究中，汉族患者样本中就存在1例对拉米夫定和阿德福韦同时耐药的菌株。同时，畲族自然村的民族聚居特性，使得感染到同一类型HBV株的可能性增加，在本研究中，2例畲族患者样本中检到的HBV天然耐药位点变异类型即

［1］李晨，万谟彬.慢性乙型病毒性肝炎抗病毒治疗指南的比较和解读［J］.中国实用内科杂志，2010，30（12）:1085-1086.

［2］崔富强，王富珍，吴振华，等.中国2005-2010年报告乙型病毒性肝炎发病分析［J］.中国疫苗和免疫，2011，（6）:483-486.

［3］慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家委员会.慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识［J］.中华实验和临床感染病杂志，2010，4（1）:49-53.

［4］中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）［J］.中国肝脏病杂志（电子版），2011，3（1）:40-52.

［5］蒋卫平，李旭明，赵志钢，等.畲族人群感染乙型肝炎病毒基因型及相关调查［J］.中国预防医学杂志，2011，12（2）:202-203.

［6］张文杰，毛维武，田淑菊，等.乙型肝炎病毒标志物定量检测及肝组织病理学检测应用于慢性乙肝病毒性肝炎患者的临床意义［J］.国际检验医学杂志，2011，32（13）：1507-1509.

［7］王莉，陆笼辉.未经拉米夫定治疗而发生乙型肝炎病毒YMDD变异的临床分析［J］.白求恩军医学院学报，2010，8（1）：26-27.