狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞检测临床意义

马纪林 蔡 龙 施华萍 周红娟 张风卫 于健宁 陶筱娟

杭州市红十字会医院风湿免疫科 杭州 310003

狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞检测临床意义

马纪林 蔡 龙 施华萍 周红娟 张风卫 于健宁 陶筱娟

杭州市红十字会医院风湿免疫科 杭州 310003

目的：检测狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例，探讨其临床意义。方法：采用流式细胞仪检测35例狼疮性肾炎患者及11名健康对照者的外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例，并分析其与肾脏病理类型和疾病活动的相关性。结果：狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例与健康对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），并与疾病活动性无相关性。但III型和IV型狼疮性肾炎患者，CD4+CD25high调节性T细胞的比例较II型和V型患者明显降低（P＜0.05）。结论：检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例可以辅助判断狼疮性肾炎的病理类型，并可为治疗狼疮性肾炎提供理论依据。

狼疮性肾炎 调节性T细胞 肾脏病理

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）是一种累及多个器官的自身免疫病，其中肾脏是最常受累和决定预后的器官。狼疮性肾炎的临床和病理表现多种多样，但具体发病机制尚不明确。调节性T细胞（regulaory T cells,Treg）是一群能“主动”抑制免疫反应的CD4+T细胞亚群[1]。笔者前期研究中[2]发现活动性SLE患者存在Treg与自身反应性T细胞间的失衡，但Treg在狼疮性肾炎中的作用尚不清楚。本研究通过检测不同病理类型的狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例，探讨Treg在狼疮性肾炎中的作用。

1 临床资料

选取2008年9月—2012年6月我科住院诊断为狼疮性肾炎患者35例，其中女32例，男3例，年龄18～40岁；采用SLE疾病活动指数（SLEDAI）评价疾病活动程度。所有患者均行肾活检明确肾脏病理类型，按ISN/RPS狼疮性肾炎的病理分类方法进行分型，其中II型8例，III型5例，IV型15例和V型7例。选择健康对照组11名，其中女9名，男2名，年龄20～38岁，两组年龄和性别具有可比性（P＞0.05）。

2 方 法

2.1 CD4+CD25highT细胞的检测 取肝素抗凝全血3mL，分别加入20μL的藻红素标记的鼠抗人CD4单抗（美国BD公司）和异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人CD25单抗（美国BD公司），并设立同型对照管。混匀后避光15min，再加入1mL细胞裂解液，37℃孵育10min，离心弃去上清，PBS洗涤3次，上Epics XLMCL型流式细胞分析仪（Beckman-Coulter公司），按常规操作进行，根据向散射光和侧向散射光以淋巴细胞群设门，EXPO32软件分析结果，其中CD4+CD25highT细胞的比例定义为2倍于CD4+CD25+T细胞的平均荧光强度的细胞占CD4+T细胞的比例。

2.2 统计学方法 应用SigmaStat3.5统计软件进行分析处理。数据采用（）表示，多组间比较采用单因素方差分析（AVONA），两组间比较采用t检验，变量间的相关性用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 狼疮性肾炎患者外周血Treg比例 狼疮性肾炎患者和健康对照组外周血CD4+CD25highTreg细胞的比例分别为(1.31±0.25)%、(1.43±0.24)%，两组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），III型和IV型狼疮性肾炎患者的CD4+CD25highTreg细胞明显低于II型和V型患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各病理类型狼疮性肾炎患者CD4+CD25highT细胞比例（）

注：与II型和V型比较，△P＜0.05

组别狼疮性肾炎组II型III型IV型V型健康对照组n/例35 851 571 1 CD4+CD25high/% 1.31±0.25 1.49±0.12 1.03±0.30△1.21±0.17△1.53±0.10 1.43±0.24

3.2 狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25highTreg细胞比例及与疾病的相关性 本组狼疮性肾炎患者中，SLEDAI分值区间为2～16，通过Pearson相关性分析，未发现CD4+CD25highTreg细胞与SLEDAI有相关性（P＞0.05）。

4 讨论

SLE是一种常见的多系统病变的自身免疫病，其发病机制主要是机体免疫耐受的失衡，产生大量的自身抗体，形成的抗原抗体复合物沉积于肾脏，导致肾脏病变。现已明确III型和IV型狼疮性肾炎临床较重，预后和治疗效果较差，常发展至终末期肾病。

免疫系统的稳定需要免疫耐受来维持，调节性T细胞是一群能够“主动”地抑制自身反应性T细胞的免疫反应，抑制细胞的活化和细胞因子的分泌[1]，是维持外周免疫耐受的最重要机制。1995年，Sakagu⁃chi等首次定义高表达IL-2受体α链（CD25）的CD4+T细胞为Treg，其通过细胞间的直接接触和抑制性细胞因子发挥免疫抑制作用。随着研究的不断深入，发现多箭头转录因子Foxp3是小鼠Treg的标记物和功能调节基因。然而，在人活化的T细胞中也能短暂表达Foxp3，说明其并不是人Treg的特异标记物。目前仍认为CD4+CD25highT细胞是人较特异的标记物[3]，因此，本研究选择此群细胞来定义Treg。

已有相关研究发现，活动性SLE患者外周血Treg的数目减少[4]，但有少数研究发现其比例正常[5]。相反，还有研究发现活动性SLE患者的Treg上升[6]。以上结果提示Treg在SLE中的作用不尽一致，可能与标记物选择及病变类型有关。本研究检测发现CD4+CD25highT细胞在狼疮性肾炎患者中的比例并不降低，且与SLEDAI无相关性，而III型和IV型狼疮性肾炎患者存在Treg水平的明显下降，可能是导致肾脏持续的炎症反应，最后引起肾脏纤维化的决定因素，但有待进一步从肾组织检测Treg的表达以明确。

综上所述，III型和IV型狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25highT细胞较II型和V型明显降低，此结果可辅助作为判断狼疮性肾炎疾病严重程度的指标，更重要的是为利用Treg治疗重症狼疮性肾炎提供理论依据。

［1］SakaguchiS.Naturally arising Foxp3-expressing CD25+CD4+regulatory T cells in immunological tolerance to self and non-self［J］.Nat Immunol，2005，6（4）:345-352.

［2］Ma J，Yu J，Tao X，et al.The imbalance between regulatory and IL-17-secreting CD4+T cells in lupus patients［J］. Clin Rheumatol，2010，29（11）:1251-1258.

［3］Baecher-Allan C，Brown JA，Freeman GJ，etal.CD4+CD25highregulatory cells in human peripheral blood［J］.J Immunol，2001，167（3）:1245-1253.

［4］Valencia X，Yarboro C，IlleiG，etal.DeficientCD4+CD25highT regulatory cell function in patientswith active systemic lu⁃pus erythematosus［J］.J Immunol，2007，178（4）:2579-2588.

［5］Alvarado-Sánchez B，Hernández-Castro B，Portales-Pérez D，et al.Regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus［J］.JAutoimmun，2006，27（2）:110-118.

［6］BonelliM，von Dalwigk K，Savitskaya A，etal.Foxp3 expres⁃sion in CD4+T cells of patientswith systemic lupus erythe⁃matosus（SLE）:A comparative phenotypic analysis［J］.Ann Rheum Dis，2008，67（5）:664-671.

Frequency and Significance of CD4+CD25highRegulatory T Cells in the Peripheral Blood of Lupus Nephri⁃tis Patients

MA Jilin，CAI Long，SHI Huaping，et al.Department of Nephrology,Hangzhou Red Cross Hospital, Hangzhou(310003),China

Objective:To investigate the frequency of CD4+CD25highregulatory T cells in the peripheral blood of lupus nephritis patients with diverse pathology.M ethods:Peripheral blood mononuclear cells from 35 lupus ne⁃phritis patients based on the 2003 ISN/RPS classification system and 11 healthy controls were counted and stained for CD4 and CD25.The relation between CD4+CD25highregulatory T cells and renal pathology anddisease activity was analyzed.Results:No significant difference in the frequency of CD4+CD25highregulatory T cells was noted between the lupus nephritis patients and normal controls(P＞0.05).Although the frequency of this cell pop⁃ulations was not correlated to the disease activity(P＞0.05),it was significantly decreased in lupus nephritis pa⁃tients with Class III and IV when compared with patients with Class II and V(P＜0.05).Conclusion:CD4+CD25highregulatory T cells in the peripheral blood could be a promissory biomarker for active lupus nephritis pa⁃tients and this may give rationale to use regulatory T cells as target cells in the treatment of lupus nephritis.

lupus nephritis regulatory T cells renal pathology

2012-12-31