EGFR蛋白在非小细胞肺癌中的表达*

袁 莉 赵 辉 郭晓燕

(菏泽医学专科学校药理学教研室,山东 菏泽 274000)

目前，肺癌已经成为公认的发病率和死亡率最高的恶性肿瘤[1]，但治疗方法依旧是传统的手术、放疗和化疗。传统的治疗方法不仅疗效差，并且在治疗过程中会给患者带来极大的痛苦。因此，各界学者都在寻找可以突破传统方法的治疗措施，分子靶向治疗是目前恶性肿瘤治疗的研究热点。PI3K/AKT通路通过一系列信号转导被活化后可将各因子的生存信号传递到细胞内，促进肿瘤细胞的增殖、抑制肿瘤细胞的凋亡。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一种跨膜酪氨酸激酶受体，可激活下游的PI3K，活化PI3K/AKT信号通路，参与恶性肿瘤的发生发展[2]。因此，本研究主要检测EGFR在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况，为NSCLC的靶向治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1标本 标本采自菏泽医专附属医院2008年1月到2010年12月经确诊为非小细胞肺癌，并手术切除的石蜡标本79例，其中，男性53例，女性26例；有淋巴结转移者41例，无淋巴结转移者38例；腺癌27例，鳞癌52例；高中分化47例，低分化32例。对照组为同期手术切除的正常肺组织，所有病例均有完整的临床资料，患者均未做放化疗。

1.2试剂 EGFR鼠抗人单克隆抗体(即用型)，免疫组化Maxvision试剂盒，EDTA抗原修复液，DAB显色剂均购自福州迈新生物科技有限公司。

1.3方法 所有标本经4 μm连续切片，HE染色。采用免疫组织化学Maxvision二步法操作，常规高压修复，修复液均为EDTA(乙二胺四乙酸)，一抗为即用型，已知阳性切片为阳性对照，PBS替代一抗为阴性对照。

1.4结果判断 EGFR的染色部位位于细胞质和细胞膜，染色部位以棕黄色颗粒为准。随机选取5个高倍视野(×400)，每个视野计数100个癌细胞，然后观察阳性癌细胞的染色强度并算出阳性癌细胞在总癌细胞中所占的比例，染色比较浅并且阳性率<25%的为阴性，染色比较深并且阳性率≥25%的为阳性。

1.5统计分析 统计学处理采用SPSS17.0软件进行分析，癌组织与正常肺组织比较用χ2检验，癌组织各临床病理特征间的比较采用χ2检验，P≤0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1EGFR在癌组织和正常肺组织中的表达 EGFR在正常肺组织和NSCLC中的阳性率分别为27.3%(3/11)和68.4%(54/79)，EGFR在正常肺组织中的阳性表达显著低于NSCLC组织中的阳性表达(P﹤0.05，图1～3)。

图1 EGRF在高分化肺腺癌中的表达(400×)

图2 EGRF在中分化肺鳞癌中的表达(400×)

图3 EGRF在低分化肺腺癌中的表达(400×)

2.2EGFR与NSCLC中临床病理特征的关系 见表1。EGFR在NSCLC中的阳性率为68.4%(54/79)，与NSCLC的性别、有无淋巴结转移、病理类型均无关(P>0.05)，与分化程度密切相关(P﹤0.05)。在不同分化程度组中高中分化组的阳性率为59.6%(28/47)，明显低于低分化组的阳性率81.3%(26/32)，两组比较差异显著(P﹤0.05)。

表1 EGFR与临床病理特征的关系

3 讨 论

EGFR是一种位于细胞膜表面的糖蛋白受体，基因位于第7号染色体的短臂，分子量为170×106，是原癌基因C-er-1(HER-1)的表达产物。EGFR有四部分组成，包括胞外区、跨膜区、胞内区和羧基末端，其中胞外区主要发挥与配体结合的作用，而胞内区含有保守的酪氨酸激酶区和典型的ATP结合区，配体通过EGFR信号转导来控制肿瘤生长，并与新生血管生成、肿瘤的侵袭和转移等有密切关系。可与之结合的配体有EGF、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)2α和双调蛋白(amp hiregulin,AR)等。当与配体结合后，可形成同源或异源二聚体，激活胞内区的酪氨酸激酶活性，磷酸化自身酪氨酸残基，与下游含SH2和PTB区域的蛋白结合，激发信号级联反应，促进细胞进入有丝分裂期。EGFR参与恶性肿瘤细胞的增殖，因此被认为在癌的生长和发展中发挥着重要作用[3-5]。

经研究表明，EGFR在NSCLC以及其他多种恶性肿瘤中均有高表达，比如乳腺癌、结肠癌等，表明EGFR的高表达与多种恶性肿瘤的形成有关联。在本研究中，EGFR在正常肺组织和NSCLC中的阳性表达分别为27.3%(3/11)、68.4%(54/79)，与NSCLC的分化程度有关。焦昕等[6]采用组织微阵联合免疫组化染色技术检测94例NSCLC组织中EGFR的表达情况，结果显示，EGFR在NSCLC中的阳性率为60.6%，其中女性患者阳性率为81.0%，男性患者阳性率为54.8%，女性患者的阳性率明显高于男性患者。这与本研究结果不一致。朱有才等[7]采用免疫组化S-P法检测EGFR在82例NSCLC中的表达，结果EGFR在癌组织中的阳性率为64.6%，明显高于正常肺组织的6.7%，并与临床分期和淋巴结转移相关。Zhang Z等[8]采用免疫组化染色法检测NOK、EGFR在155例NSCLC中的蛋白表达，结果显示两因子在癌组织中均为高表达，同时与组织学分级和TNM分期有关。

EGFR属于Ⅰ型酪氨酸激酶受体家族，其自身磷酸化是激活下游一系列信号传递的关键，也是肿瘤细胞生长、增殖、转移的关键，因此，若可抑制EGFR的功能，则可切断下游的信号传递，从而达到遏制肿瘤继续发展的目的。Wu SG等[9]通过检测EGFR基因在NSCLC中的突变率，得出结论EGFR是治疗NSCLC的主要靶点，EGFR酪氨酸激酶抑制剂可以作为亚洲人治疗NSCLC的首选。目前，EGFR酪氨酸激酶抑制剂已有应用于临床的实例。李俭杰等[10]对54例晚期NSCLC患者一线给予口服EGFR-TKI治疗，完全缓解的为0%，其中，部分缓解占90%，症状稳定患者占6%，症状加重占4%，总体症状缓解率为90%，疾病控制率为96%。以上提示，以EGFR为治疗靶点对非小细胞肺癌是可行的，并且，EGFR还可以作为一个可参考的肺癌预后检测指标。

[1] Zhi-jie Wang, Tong-tong An, Tony Mok, et al. Immediate versus delayed treatment with EGFR tyrosine kinase inhibitors after first-line therapy in advanced non-small cell lung cancer[J]. Chin J Cancer Res, 2011, 23(2):112-117.

[2] 倪琛琛，于敏，张志红.EGFR与PI3K/AKT信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义[J].安徽医科大学学报，2011,46(12):1264-1266.

[3] Sun PL,Seol H,Lee H,et al.High incidence of EGFR mutations in Korean men smokers with no intratumoral heterogeneity of lung adenocarcinomas: correlation with histologic subtypes, EGFR/TTF-1 expressions, and clinical features[J]. J Thorac Oncol, 2012, 7(2):323-330.

[4] Miao Z, Ren G, Liu H,et al. PET of EGFR expression with an 18F-labeled affibody molecule[J]. J Nucl Med, 2012,53(7):1110-1118.

[5] Lee Y,Shim HS,Park MS,et al.High EGFR gene copy number and skin rash as predictive markers for EGFR tyrosine kinase inhibitors in patients with advanced squamous cell lung carcinoma[J]. Clin Cancer Res, 2012, 18(6):1760-1768.

[6] 焦昕，金波，曲秀娟，等. C-Cbl、Cbl-b和EGFR在非小细胞肺癌中的表达及其预后价值[J].中国肺癌杂志，2011,14(6)：512-517.

[7] 朱有才，杜开齐，尹满香，等. EGFR在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J].Journal of Oncology,2010,16(8):618-619.

[8] Zhang Z, Jiang T, Deng Y, et al. Expression and its clinical significance of NOK, EGFR in NSCLC[J].中国肺癌杂志,2009,12(9):983-988.

[9] Wu SG, Hu FC, Chang YL,et al. Frequent EGFR mutations in non-small cell lung cancer presenting with miliary intrapulmonary carcinomatosis[J].Eur Respir,2012,41(2):417-424.

[10] 李俭杰，曲莉莉，卫星，等.EGFR-TKI一线治疗EGFR基因突变的晚期非小细胞肺癌临床观察[J].中国肺癌杂志，2012,15(5)：299-304.