地佐辛与酮咯酸氨丁三醇注射液配伍后变化及镇痛试验

胡海勋，姚景春，宋洪运，商庆节，罗涟荣 （鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心，山东 临沂273400）

酮咯酸氨丁三醇（ketorolac tromethamine）注射液作为一种强效止痛、中度抗炎和解热的非甾体类抗炎药，通过抑制前列腺素的生物合成产生强大的镇痛作用，用于急性中、重度疼痛的短期治疗，通常用于手术后镇痛。与阿片类镇痛药地佐辛（Dezocine）注射液联合应用符合临床上对于特别严重的疼痛，多采用多模式镇痛的方法要求，同时还可起到协同作用，且减少各自药物的使用剂量，降低地佐辛成瘾的概率。但在临床应用时，有医生发现酮咯酸氨丁三醇注射液与地佐辛注射液合用时，在较小容器内混合易发生析出现象［1－2］。针对这种现象，本文旨在研究不同浓度地佐辛注射液与酮咯酸氨丁三醇注射液配伍后不溶性微粒、pH值和含量的变化，同时采用固定剂量改变比例的正交试验设计方法筛选2种注射液最佳镇痛作用配伍比例，为临床用药提供参考。

1 材料

1．1 仪器 美国Agilent 1200型自动进样高效液相色谱仪；丹弗（北京）UB－7型pH计；天津天河GWF－8JC微粒分析仪；广州瑞悦YB－Ⅱ澄明度检测仪。

1．2 s试药 醋酸氨、醋酸为分析纯；甲醇为色谱纯；地佐辛注射液为扬子江药业集团有限公司生产（规格：1 mL∶5 mg，批号12021321）；酮咯酸氨丁三醇注射液为山东新时代药业有限公司生产（规格：1 mL∶30 mg，批号120722－4）。

1．3 动物 雌性ICR小鼠，体质量18～22 g，由山东新时代药业有限公司动物中心提供，动物合格证号：0008036。

2 方法与结果

2．1 色谱方法

2．1．1 色谱条件 色谱柱：Sepax C18（4．6 mm×250 mm，5μm）。流动相A为0．02 mol·L－1醋酸氨溶液（醋酸调至pH4．05），流动相B为甲醇。梯度洗脱：A：48%～48%，B：52%～52%（0～7．5 min）；A：48%～30%，B：52%～70%（7．5～12 min）；A：30%～48%，B：70%～52%（12～15 min）。检测波长：281 nm。进样量：20μL。流速：1．0mL·min－1。柱温：30℃。在本色谱条件下，所得色谱图见图1。在该条件下，地佐辛（Rt≈6．5 min），酮咯酸（Rt≈10．1 min）的色谱峰与其他物质峰分离良好。

图1 样品色谱图Fig 1 Chromatogram of sample

2．1．2 溶液的配制 取地佐辛酮咯酸对照品各适量，用0．9%氯化钠溶液溶解并稀释，配成质量浓度为0．407 mg·mL－1地佐辛对照品储备液和0．410 mg·mL－1酮咯酸对照品储备液，备用。

2．1．3 标准曲线制备 精密吸取“2．1．2”项下地佐辛对照品储备液各0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0mL，置于25 mL的量瓶中定容，混匀，配制成标准系列溶液，各取20μL进样，按外标法以峰面积（A）对地佐辛质量浓度（C）做线性回归，结果表明线性关系良好，地佐辛线性关系范围：0．008 1～0．130 2 mg·mL－1，回 归 方 程 为：A＝6 067C－2．249，r＝0．999 6，n＝6；另精密吸取“2．1．2”酮咯酸溶液各0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0mL，置于25 mL 的量瓶中定容，混匀，配制成标准系列溶液，各取20μL进样，按外标法以峰面积（A）对酮咯酸质量浓度（C）做线性回归，结果表明线性关系良好，酮咯酸线性关系范围：0．008 2～0．131 2 mg·mL－1，回归方程为：A＝3 684C－1．086，r＝0．999 7，n＝6。

2．1．4 精密度试验 分别取“2．1．2”项下储备液稀释成0．065 1 mg·mL－1地佐辛溶液和0．065 6 mg·mL－1酮咯酸溶液，各取20μL进样，各重复进样6次，测定峰面积。结果地佐辛和酮咯酸RSD分别为0．37%和0．29%。

2．1．5 方法回收率 精密量取“2．1．2”项下储备液适量，混合，用0．9%氯化钠溶液稀释成高、中、低3种质量浓度溶液，按“2．1．1”项下色谱条件进样20 μL，测定峰面积，代入回归方程计算浓度，并计算回收率，结果地佐辛和酮咯酸平均回收率分别为99．92%和98．87%，RSD分别为1．74%和1．38%。

2．2 不溶性微粒检测

2．2．1 不同配伍比例可见异物检查［3］分别将地佐辛注射液（A）和酮咯酸氨丁三醇注射液（B）按不同体积比例下混匀，在澄明度检测仪下检测是否有可见异物。地佐辛注射液（A）和酮咯酸氨丁三醇注射液（B）配伍后在体积比例小于1∶2条件下无可见异物。

2．2．2 配伍液配制 根据临床常用配伍剂量，配伍液中地佐辛注射液和酮咯酸氨丁三醇注射液体积比为3∶1，根据“2．2．1”项下可知，有可见异物。分别将配伍液，用过滤后的0．9%氯化钠溶液稀释至3，6，12，20，25倍（对应规格分别为24，48，96，160，200 mL），得不同质量浓度配伍液。

2．2．3 可见异物和不溶性微粒检测［4］用澄明度监测仪和微粒分析仪，按《中国药典》方法中光阻法测定“2．2．2”项下不同质量浓度配伍液的可见异物和不溶性微粒，若可见异物不合格，不溶性微粒不需要检测。若不溶性微粒检测合格，放置，分别在0，2，4，6，8，12 h检测不溶性微粒变化。结果见表1。将溶液稀释至12，20，25倍时，可见异物和不溶性微粒均符合要求，且在12 h内无变化。

表1 不同浓度配伍液不同时间可见异物与不溶性微粒变化（n＝3）Tab 1 Changes of number of visible and insoluble particles and compatible solution in different concentration at different time periods（n＝3）

2．3 相对含量和pH值变化

2．3．1 可见异物对含量变化的影响 分别以“2．2．2”项中不同质量浓度的配伍液稀释到约0．1 mg·mL－1后，百分含量定为100．0%，在“2．1．1”项下色谱条件下测定将可见异物过滤后稀释的配伍液含量。取“2．2．2”项下稀释配伍液，分别在0，2，4，6，8，12 h内测定含量变化，相对含量变化±5%视为无变化。结果见表2，表3。配伍液稀释3，6倍，室温放置12 h，稀释液中酮咯酸相对含量变化大于5%，稀释12，20，25倍相对含量变化小于5%；配伍液稀释3，6，12，20，25倍，稀释液中地佐辛相对含量变化小于5%。

表2 不同质量浓度酮咯酸氨丁三醇配伍液相对含量变化（n＝3）Tab 2 Changes of relative content to ketorolac tromethamine in different concentration compatible solution（n＝3）

表3 不同质量浓度地佐辛配伍液相对含量变化（n＝3）Tab 3 Changes of relative content to dezocine in different concentration compatible solution（n＝3）

2．3．2 pH 值变化 取“2．2．2”项下不同稀释倍数配伍液，分别在0，2，4，6，8，12 h内测定pH 值变化，与0h比较，相对pH变化±0．5视为无变化。结果见表4。将配伍原液稀释3，6，12，20，25倍，室温放置12 h，同一稀释液pH无变化。

表4 不同质量浓度配伍液相对pH值变化（n＝3）Tab 4 Changes of relative pH to different concentration compatible solution（n＝3）

2．4 小鼠醋酸扭体试验［4］

2．4．1 供试品溶液分析 分别配制复方以及单方高、中、低3个剂量组，酮咯酸氨丁三醇质量浓度为0．01，0．02，0．04 mg·mL－1，地佐辛质量浓度均为0．01 mg·mL－1，按“2．1．1”项下色谱条件测定复方的相对含量，结果均符合要求。

2．4．2 试验方法 将小鼠按体质量简化随机法分组，每组10只，给药后20 min，每鼠腹腔注射0．6%醋酸溶液0．1 mL／10 g。记录注射醋酸后20 min内各小鼠扭体次数，采用单因素方差分析法比较组间差异，并计算药物镇痛百分率即抑制率，采用低剂量地佐辛作为阳性对照组。

2．4．3 试验结果 对地佐辛与酮咯酸氨丁三醇最佳配伍比例筛选，采用固定剂量改变比例的正交试验设计方法。地佐辛和酮咯酸氨丁三醇的给药量分别定为A、B两因素，为重点考察低剂量地佐辛与不同剂量酮咯酸氨丁三醇的协同作用，采用混合水平L8（2×4）正交表，A因素设2个水平，B因素设4个水平，进行8次试验。当因素水平完全相同时，因素的主次关系完全由极差R的大小来决定。当水平数不完全一样时，无法进行直接的比较，这是因为当因素对指标有同等影响时，水平多的因素极差应大一些。因此需要利用折算系数对极差进行折算。

表5 正交试验结果分析Tab 5 Results of analysis on orthogonal experiment

由上计算R’A＞R’B可知因素主次顺序为地佐辛优于酮咯酸氨丁三醇。本试验旨在探索地佐辛低剂量下的配伍作用，所以没有设置地佐辛高剂量组。从表5中也可看出B3较优，综合A1B3确为表中最优结果，选择此比例作为注射给药的最佳配比。协同作用采用Q值法进行判定。q值由以下的公式求得：q＝PA＋B／（PA＋PB－PA×PB）式中PA、PB和PA＋B分别为地佐辛组、酮咯酸氨丁三醇组和两药联用组小鼠扭体次数的抑制率。若q≤0．85说明两药合用后产生拮抗作用；若q≥1．15，说明两药合用后产生协同作用。从表5中看出，两药联用低、中、高3个剂量都具有良好的协同作用。

3 讨论

酮咯酸氨丁三醇（pH6．5）酸性比地佐辛（pH 4．6）弱，地佐辛与酮咯酸氨丁三醇盐发生反应，生成酮咯酸和地佐辛氨丁三醇盐，其中酮咯酸和地佐辛氨丁三醇盐，其中酮咯酸在水溶液中析出。随稀释倍数增加，酮咯酸逐渐溶解于水。酮咯酸与地佐辛均为弱酸，配伍后与氨丁三醇形成缓冲盐溶液，因此在缓冲能力范围内将配伍液稀释不同倍数时，pH无明显改变。地佐辛为精神类药物，作用于中枢神经起镇痛作用，虽然临床上没有滥用倾向，但对于具有阿片滥用史的人群仍具有滥用倾向。本试验得出了镇痛作用最佳的配伍比例，但是考虑到酮咯酸氨丁三醇和地佐辛的药物不良反应，因此推荐以酮咯酸氨丁三醇的中剂量或低剂量与地佐辛进行联用。本试验通过小鼠镇痛试验验证了地佐辛和酮咯酸氨丁三醇的协同作用，但对于两者协同作用还有待进一步的临床数据来验证。

［1］张露婷，刘景和．地佐辛联合酮咯酸氨丁三醇用于全麻病人术后镇痛的临床研究［J］．海峡药学，2012，24（1）：86－88．

［2］刘筱凌，徐海英．酮咯酸氨丁三醇注射液和喷他佐辛注射液存在配伍禁忌［J］．中华现代护理杂志，2011，17（24）：2881．

［3］中国药典．二部［S］．2010：71，76．

［4］张玉玲，佟继铭．疼痛实验动物模型研究概况［J］．承德医学院学报，2009，26（2）：195－198．