二次回归正交旋转组合设计优化21～42日龄肉仔鸡胆碱和蛋氨酸需要量

王斯佳 蔡辉益 刘国华 闫海洁 廖瑞波 邓会玲 汤建平

(中国农业科学院饲料研究所，家禽营养与饲料研究室，北京 100081)

胆碱是维持动物体正常生理功能和代谢活性的必需营养物质，在构成细胞结构和调节脂肪代谢中发挥着重要作用。胆碱缺乏通常表现为生长受阻、饲料利用率下降、腿部疾病增多、脂肪代谢能力低下及肾脏出血等。蛋氨酸是动物的必需氨基酸，它在机体内直接或间接参与甲基化过程、体蛋白质合成、谷胱甘肽等生物活性物质的合成。家禽蛋氨酸缺乏将造成体内蛋白质合成受阻，表现为发育不良、肌肉萎缩、生长减慢、羽毛变质、肝肾机能损坏、胆碱或维生素B12缺乏症加剧。胆碱的需要量受饲粮、日龄等因素，特别是饲粮中甲基供体物质含量的影响，因此，胆碱需要量的研究多数都是围绕胆碱与其他营养物质的相互关系进行的［1］。胆碱和蛋氨酸都是重要的甲基供体，二者通过甜菜碱实现了甲基的循环传递。胆碱在细胞线粒体内转化为甜菜碱，甜菜碱可将甲基转移给高半胱氨酸合成蛋氨酸，蛋氨酸经活化为S－腺苷蛋氨酸形式为机体提供活性甲基，代谢后的蛋氨酸又生成高半胱氨酸进入甲基循环之中。一般认为，动物机体对蛋氨酸和胆碱本身的需要量一旦满足，对活性甲基的需要可通过胆碱或蛋氨酸来提供，即胆碱能节约正常用于甲基转移的蛋氨酸［2］。由此可见，试验饲粮中胆碱水平的差异，将会影响蛋氨酸的需要量。因此，对两者需要量的研究也不可孤立开来。然而，目前所使用的胆碱和蛋氨酸营养标准是基于几十年前的研究结果，并且是以纯合饲粮的结果外推得出，已无法满足当前集约化饲养下肉仔鸡的快速生长的需要。本试验通过两因子二次回归正交旋转组合设计，以饲粮中胆碱和蛋氨酸水平为自变量，以21～42日龄肉仔鸡生长性能和屠宰性能的部分指标为因变量，旨在研究胆碱和蛋氨酸需要量的理想组合。

1 材料与方法

1.1 试验设计

采用两因子二次回归正交旋转组合设计，建立以胆碱和蛋氨酸水平为自变量，关于肉仔鸡生长性能和屠宰性能的函数，以获得21～42日龄肉仔鸡胆碱和蛋氨酸最佳需要量的参数，并对各因素如何影响各响应目标值进行分析，具体编码情况见表1。根据设计要求，本试验共分为12个组，1～8组为试验组，9～12组为中心组。以NRC(1994)提供的21～42日龄肉仔鸡胆碱和蛋氨酸的需要量为中心点，各组试验饲粮胆碱和蛋氨酸水平见表2。胆碱和蛋氨酸分别以DL－蛋氨酸(纯度≥99%)和氯化胆碱(纯度≥50%)的形式添加，蛋氨酸购自住友化学公司(日本)，氯化胆碱购自沧州伟业饲料科技有限公司。

表1 因素水平编码表Table 1 Coding table of factors and levels

1.2 试验动物及饲养管理

购入同期出雏的1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡580只。1～21日龄期间统一饲喂由前期试验［3］所得出的满足1～21日龄肉仔鸡最佳生长性能的胆碱和蛋氨酸水平的饲粮，胆碱和蛋氨酸水平分别为 1 500 mg/kg和 0.47%，代谢能为12.46 MJ/kg，粗蛋白质为 20.02%。21日龄时，肉仔鸡空腹12 h后称重，根据体重选出480只试鸡，随机分为12个组，每组4个重复，每个重复10只鸡，公母各占1/2，各组试鸡初始重差异不显著(P＞0.05)。常规饲养免疫程序。试验期为21 d。试验期间试鸡自由采食、饮水。

1.3 基础饲粮

本试验采用胆碱和蛋氨酸含量较低的原料配制玉米－豆粕型基础饲粮，除胆碱和蛋氨酸水平外，其他营养水平参照NRC(1994)21～42日龄肉仔鸡营养需要量。基础饲粮组成及营养水平见表3。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生长性能指标

平均日增重:分别在试验的第1天和第21天，以重复为单位对空腹12 h后的肉仔鸡进行称重，并计算每只试鸡平均日增重。

平均日采食量:统计试验全期每个重复的耗料量，对死淘鸡进行校正后，计算每只鸡平均日采食量。

表2 试验饲粮胆碱和蛋氨酸水平Table 2 The levels of choline and methionine in experimental diets

表3 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 3 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

料重比:用每只鸡平均日采食量除以每只鸡的平均日增重，计算出每只鸡的料重比。

1.4.2 屠宰性能指标

试验结束时，每个重复选取接近平均体重的2只试鸡(1公1母)，称活重，经颈静脉放血致死。

屠宰率:去毛、脚角质层、趾壳及喙壳后的重量即为屠体重。

屠宰率(%)=100×屠体重/宰前活重。

全净膛重:屠体重去气管、食道、嗉囊、肠道、脾脏、胰脏、胆囊、生殖器官、心脏、肝脏、腺胃、肌胃、肺脏、腹脂和头脚的重量。肝脏密封后－20℃保存备用。

胸肌率:由胸骨剥离右侧胸肌并称重即为胸肌重。胸肌密封后－20℃保存备用。

胸肌率(%)=100×2×(右侧胸肌重/全净膛重)。

腿肌率:取右侧腿，去骨、皮肤及皮下脂肪后称重即为腿肌重。腿肌密封后－20℃保存备用。腿肌率(%)=100×2×(右侧腿肌重/全净膛重)。

腹脂率:将腹腔脂肪及肌胃周围脂肪剥离后称重即为腹脂重。

1.4.3 血脂指标

试验结束时，每个重复选取接近平均体重的2只试鸡(1公1母)，心脏采血，血液经离心后取血清，由中国解放军第三零九医院采用日立H7600－020全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量。

1.4.4 组织中脂肪含量的测定

将待测组织经冷冻干燥机(FD－1B－50，北京博医康公司)冷冻干燥72 h，回潮后粉碎制成干样。称取干样1.5 g左右，用索氏提取法测定胸肌、腿肌和肝脏的粗脂肪含量。

1.4.5 肉品质指标

肌肉pH:于左侧胸肌相同位置取宽度和厚度约为3 cm的肉样，在屠宰45 min后，按pH计使用说明，将电极直接插入肉样，插入深度约为1 cm，测定pH45min，而后将肉样保存在4℃的冰箱中，24 h后用同样方法测定pH24h。

滴水损失:于左侧胸肌中部相同位置，顺肌纤维方向取1 cm×1 cm×2 cm的肉样，置于感应量为0.01 g的天平上称重，记为W1。用棉线将肉样系于封闭的塑料瓶中，避免肉样与瓶壁接触，4℃贮存24 h后称重，记为W2。

滴水损失率(%)=100×［(W1－W2)/W1］。

1.5 数据处理与统计分析

试验数据采用SPSS 16.0统计分析软件中GLM程序进行方差分析，经F检验差异显著后，用Duncan氏法进行多重比较。所有数据均以“平均值±标准误”表示。应用Design Expert 8.0软件中的Central Composite对生长性能和屠宰性能各指标进行多元非线性回归分析，Statistics 7.0绘制3D响应面图。

2 结果

2.1 不同胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡生长性能的影响

如表4所示，不同组间的平均日增重、平均日采食量和料重比的差异不显著(P＞0.05)。但中心组的平均日增重和平均日采食量较其他组高，料重比较低。通过采用协方差分析方法进行统计，各组试鸡的初始重对平均日增重、平均日采食量及料重比的回归关系影响不显著(P＞0.05)，无需进行校正。

2.2 不同胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡屠宰性能的影响

如表5所示，第2组的屠宰率显著高于第3、7组(P＜0.05)。第5组的腹脂率显著低于第3、4、8组(P＜0.05)，并极显著低于第 6组(P＜0.01)。但不同胆碱和蛋氨酸水平对21～42日龄肉仔鸡的胸肌率和腿肌率影响不显著(P＞0.05)。

2.3 不同胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡血脂的影响

如表6所示，第9、12组血清的甘油三酯含量显著低于第6组(P＜0.05);第5组的血清低密度脂蛋白含量显著低于第8组(P＜0.05);但不同组间血清总胆固醇和高密度脂蛋白含量无显著差异(P ＞0.05)。

2.4 不同胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡体脂沉积的影响

如表7所示，不同胆碱与蛋氨酸水平对肉仔鸡体脂沉积的影响显著(P＜0.05)。第1组的腿肌肌脂率显著高于第3组和中心组(P＜0.05);第1组胸肌肌脂率显著高于第8组(P＜0.05)，并极显著高于第3组(P＜0.01);第2组的肝脂率显著低于第8组(P＜0.05)且极显著低于第4组(P＜0.01)。

2.5 不同胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡胸肌品质的影响

如表8所示，第3、5组45 min的初始pH显著高于第1、2和6组(P＜0.05)，第5组24 h的终末pH显著高于第9组(P＜0.05)，第1和6组45 min～24 h的△pH显著低于第3、8、9组(P＜0.05);第5组的滴水损失率显著低于第8组(P＜0.05)并极显著低于第7组(P ＜0.01)。

表4 胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡生长性能的影响Table 4 Effects of dietary choline and methionine level on growth performance in broilers

表5 胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡屠宰性能的影响Table 5 Effects of dietary choline and methionine level on slaughter performance in broilers %

2.6 回归分析

根据二次回归正交旋转组合试验设计要求，以胆碱和蛋氨酸为自变量，以生长性能和屠宰性能的各指标为因变量，利用Design Expert 8.0软件，建立二元二次回归方程:

并用Statistics 7.0软件绘制相应的3D响应面图，对其显著性进行分析并试图找出饲粮中胆碱和蛋氨酸的最佳需要量，见表9、表10。对回归方程的显著性进行评价，平均日采食量、料重比、腹脂率和肝脂率的方程拟合良好。

表6 胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡血脂的影响Table 6 Effects of dietary choline and methionine level on blood lipids in broilers mmol/L

表7 胆碱和蛋氨酸水平对体脂沉积的影响Table 7 Effects of dietary choline and methionine level on body fat deposition in broilers %

表8 胆碱和蛋氨酸水平对肉仔鸡胸肌品质的影响Table8 Effects of dietary choline and methionine level on quality of breast muscle in broilers

表9 不同胆碱和蛋氨酸水平下肉仔鸡生长性能的回归分析Table 9 Regression analysis of growth performance based on different levels of choline and methionine in broilers

表10 不同胆碱和蛋氨酸水平下肉仔鸡屠宰性能的回归分析Table 10 Regression analysis of slaughter performance based on different levels of choline and methionine in broilers

如图1所示，X1和X2轴分别代表了胆碱和蛋氨酸的水平编码值，Y轴代表肉仔鸡的平均日采食量。曲面上各坐标点代表了不同胆碱和蛋氨酸水平组合下肉仔鸡的平均日采食量，高曲面代表平均日采食量较高，反之表示较低。由曲面得知，当胆碱水平编码值在－0.500～0.500时，平均日采食量随着蛋氨酸水平的增加而上升，但蛋氨酸增加至0编码水平后，继续增加对平均日采食量的影响效果不明显;当胆碱水平编码值在－1.414～－0.500或0.500 ～1.414 时，平均日采食量均会随着胆碱编码值距中心距离的增大而下降。

图1 胆碱和蛋氨酸对肉仔鸡平均日采食量影响的响应面图Fig.1 Response surface graph of the effects of choline and methionine on ADFI in broilers

如图2所示，蛋氨酸水平编码值在－0.300～0.300，胆碱水平编码值在 －0.500 ～0.500 时，21～42日龄肉仔鸡的料重比降至最低;料重比随着胆碱和蛋氨酸距中心区域的远离程度逐渐升高。由此可见，胆碱和蛋氨酸水平过高或过低，都会对肉仔鸡的平均日采食量和料重比产生不利影响，从而妨碍生长性能的发挥。

图2 胆碱和蛋氨酸对肉仔鸡料重比影响的响应面图Fig.2 Response surface graph of the effects of choline and methionine on F/G in broilers

如图3所示，当蛋氨酸水平编码值在－1.414～ －1.000时，腹脂率随着胆碱水平的增加而下降，但胆碱和蛋氨酸二者水平同时较低，或蛋氨酸水平过高时，会加剧腹脂的沉积。

图3 胆碱和蛋氨酸对肉仔鸡腹脂率影响的响应面图Fig.3 Response surface graph of the effects of choline and methionine on abdominal fat percentage in broilers

如图4所示，胆碱水平较高且蛋氨酸水平较低时，有利于肝脂率的降低;而在低胆碱、高蛋氨酸水平下，肝脂率有下降趋势;两者编码值同时取－1.414时，肝脂率最高;两者编码值同时取1.414时，肝脂率有上升的趋势。因此，我们认为，高胆碱、低蛋氨酸饲粮可有效降低肉仔鸡的腹脂率和肝脂率。二者同时过量或缺乏，都不利于脂肪的出肝转运。

图4 胆碱和蛋氨酸对肉仔鸡肝脂率影响的响应面图Fig.4 Response surface graph of the effects of choline and methionine on liver fat percentage in broilers

经优化分析，在本试验条件下，当饲粮胆碱和蛋氨酸水平分别为1 030 mg/kg和0.43%时，肉仔鸡可达最大平均日采食量;当胆碱水平为990 mg/kg，蛋氨酸水平为0.40%时，料重比降至最低;胆碱和蛋氨酸水平分别为1 880 mg/kg和0.37%时，肉仔鸡腹脂率最低;胆碱和蛋氨酸水平分别为1 780 mg/kg和0.38%时，肝脂率最低。

3 讨论

3.1 家禽生产中胆碱和蛋氨酸的需要量研究

肉仔鸡对胆碱需要量的确定，一般以肝脏脂肪含量、生长性能等作为评定标准。陈承祯［2］用玉米－豆粕型基础饲粮饲喂肉仔鸡，以日增重、肝脂和血脂为标准，认为21～42日龄艾维茵肉仔鸡胆碱需要量为1 366 mg/kg;许丽［4］采用玉米－大豆分离蛋白－葡萄糖半纯合饲粮饲喂AA肉仔鸡时，以最大生长和饲料报酬为标准，认为3～4周龄肉仔鸡的胆碱和蛋氨酸需要量为1 000 mg/kg。由此可见，肉仔鸡对胆碱的需要量因基础饲粮、动物品种、评定标准等的不同而存在差异。本试验中，以玉米－豆粕型基础饲粮饲喂肉仔鸡后，发现满足其最高平均日采食量、最低料重比的胆碱需要量为990～1 030 mg/kg;满足肉仔鸡最低腹脂率和肝脂率的胆碱需要量为1 780～1 880 mg/kg。可以看出，在生产中要达到减少脂肪沉积的目的，机体需要比保证生长更多的胆碱。美国NRC(1994)4～6周龄肉仔鸡胆碱的推荐量为1 000 mg/kg，与本试验中达到最佳生长性能的肉仔鸡胆碱需要量基本一致，但远低于本试验中满足最低腹脂率和肝脂率时的胆碱需要量。究其原因:首先，现代肉仔鸡育种中对生长速率的过分追求，使得肉仔鸡的生长速度不断提高，对营养物质的需求量也大大增加;其次，原料中天然胆碱的含量和利用率差异很大，基础饲粮中原料选择和配比影响了胆碱需要量的确定。

禽类蛋氨酸的研究方法多采用剂量反应法，即根据蛋氨酸水平与生长性能间的关系，确定蛋氨酸的需要量。肉仔鸡的蛋氨酸需要量依衡量指标的不同而异。本试验中，满足肉仔鸡最高饲料利用率的蛋氨酸需要量为0.40%，低于满足其最高平均日采食量的需要量0.43%，但高于最低腹脂率和肝脂率的蛋氨酸需要量0.38%。戴洪伟［5］以料重比和腹脂率为衡量指标，用二次多项式函数模型得出的蛋氨酸需要量分别为0.400%和0.432%，他认为满足最低腹脂沉积的蛋氨酸需要量应比满足最佳料重比时的高，这与本试验的结果有出入。首先，这可能与不同原料中总含硫氨基酸的含量及其消化率间的差异有关;其次，本试验中含有大量的胆碱，胆碱对降低脂肪沉积效果显著，试验中满足最低腹脂率的蛋氨酸需要量较低，可能是胆碱替代部分蛋氨酸的结果。

3.2 胆碱和蛋氨酸对肉仔鸡胴体品质的影响

本研究发现，胆碱和蛋氨酸对21～42日龄肉仔鸡的屠宰率、腹脂率、肝脂率和肌脂率等都有显著影响。前人对脂肪指标之间的相关性研究并不鲜见，但由于试验动物的品种、日龄等的差异，结果也不尽相同。在本研究中，二者对各脂肪指标的影响无明显规律，但总体表现为，高水平胆碱有利于降低腹脂和肝脂。顾志良等［6］研究指出，鸡的腹脂率与肝脂率呈显著正相关，并认为这是由于鸡的脂肪组织本身不能合成脂肪酸，肝脏合成的脂肪酸转运至腹部沉积的缘故。此结果也在血清中甘油三酯和低密度脂蛋白含量上得到了印证。在人上的研究认为，高水平的甘油三酯和低密度脂蛋白更易于脂肪肝的发生［7］;但本试验还发现，胆碱和蛋氨酸在降低肝脂的同时，还增加了肌内脂肪含量。本结果与刘邵扬等［8］腹脂与肌内脂肪沉积一致的结论不符，这可能与胆碱和蛋氨酸影响脂肪的沉积的同时促进蛋白质的合成有关。胆碱和蛋氨酸都是动物体内重要的甲基供体，肉碱、肌酸等重要甲基化产物的合成都需要甲基的参与。甲基的降脂作用主要是通过抑制脂肪合成加速脂肪分解来实现的。一方面，肉碱是长链脂肪酸进入肌肉线粒体进行β－氧化的必需载体。胆碱和蛋氨酸通过增强肉碱的合成，加强肉碱向肌肉中的转运，并与长链脂肪酸形成酸不溶肉碱进入肌肉线粒体进行β－氧化，从而抑制了脂肪的形成，减少体脂沉积，并适量提高肌肉中粗脂肪含量［9］。另一方面，胆碱作为卵磷脂的成分，可促进脂肪酸以脂蛋白的形式被运送出肝脏，防止脂肪在肝脏中过多地积累，从而起到加速脂肪分解，减少脂肪在机体中的沉积;也有人认为，胆碱缺乏造成的脂肪沉积与维生素A代谢受阻有关［10］。维生素A能有效降低过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因的表达量，间接抑制PPARγ调控的脂肪代谢相关基因，如乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、激素敏感酯酶(HSL)等基因的表达，最终抑制脂肪细胞的分化与成熟;也可能维生素A具有直接抑制ACC、HSL基因表达的作用，进而改变脂肪酸代谢的平衡，减少肌内脂肪沉积［11］。此外，胆碱不仅节约了用作甲基供体的蛋氨酸量，提供的甲基还增加了高半胱氨酸转化为蛋氨酸的循环次数，使更多的蛋氨酸进入了蛋白质的合成当中［12］。

肌内脂肪是影响肉品质的重要因素，对肉的风味、嫩度、多汁性等有显著影响［13］。本研究发现，胆碱和蛋氨酸对42日龄肉仔鸡胸肌的pH和滴水损失率影响显著，胆碱可提高胸肌24 h的终末pH，并减少胸肌的滴水损失率，蛋氨酸含量过低或过高都不利于胸肌肌肉的持水性。胆碱和蛋氨酸对肉质的改善主要通过增加肌内脂肪含量和提高抗氧化能力发挥作用。肌肉中脂类的氧化是肉质下降的主要因素，脂类氧化不仅可导致酸败，而且可使多不饱和脂肪酸、脂溶性维生素的含量下降，大大降低肉品质。高酸度的肌肉也会导致蛋白质变性，失去持水能力。胆碱和蛋氨酸作为甲基供体，促进了脂肪酸的β－氧化，加强了体脂的脂肪动员，使肌间脂肪含量升高。通常，在一定范围内，肌肉脂肪含量越高，保水性越强。磷脂酰胆碱(PC)是胆碱在动物体内的主要形式，PC可维持血液中超氧化物歧化酶活性，减少丙二醛含量;蛋氨酸是合成谷胱甘肽(GSH)重要的前体物质，PC与GSH共同作用，可有效防止肉中脂肪的酸败。然而，因蛋氨酸过量造成同型半胱氨酸的堆积，将对肉品质产生不利影响。同型半胱氨酸(Hcy)有较强的促脂质过氧化的效应，但也有人认为Hcy可特异性的抑制谷胱甘肽过氧化物酶，削弱机体抗氧化保护机制，使氧化损伤突现［14］。因此，Pamplona等［15］认为，适当降低蛋氨酸水平，通过减少蛋白质氧化损伤的敏感度和线粒体中的活性氧，有助于机体抵抗氧化应激。

4 结论

①本研究发现，适量的胆碱和蛋氨酸水平可有效改善21～42日龄肉仔鸡的平均日采食量、料重比、腹脂率和肝脂率。

②满足21～42日龄肉仔鸡最佳生长性能的胆碱和蛋氨酸的最佳水平分别为990～1 030 mg/kg和 0.40% ～0.43%;当胆碱和蛋氨酸水平分别为1 780～1 880 mg/kg和0.38%时，可使其肝脂和腹脂含量降至理想水平。

［1］ 王宏，霍启光.家禽机体对胆碱的需要量［J］.中国家禽，1997(8):40－41.

［2］ 陈承祯.烟酰胺、胆碱对肉仔鸡生长性能及脂肪代谢的影响［D］.硕士学位论文.长春:中国人民解放军军需大学，2002:5－7.

［3］ 王斯佳，蔡辉益，刘国华，等.二次回归正交旋转组合设计优化1～21日龄肉仔鸡胆碱和蛋氨酸需要量［J］.动物营养学报，2012，24(5):804 －814.

［4］ 许丽.鸡营养中的胆碱及其效用评价［D］.博士学位论文.哈尔滨:东北农业大学，2002:21－35.

［5］ 戴洪伟.21～42日龄肉仔鸡蛋氨酸需求量的研究［D］.硕士学位论文.杨凌:西北农林科技大学，2003:17－18.

［6］ 顾志良，赵万里，周勤宣.肉鸡腹脂与皮下脂肪、肌脂率、肝脂率的关系［J］.中国家禽，1994(3):27－29.

［7］ 周磊，范茂丹，陆鸣.脂肪肝与血脂参数的相关性分析［J］.中国疗养医学，2001，20(3):214 －215.

［8］ 刘邵扬，黄得纯，吕敏芝，等.仙湖肉鸭B系肌内脂肪含量与屠体性能关系研究［J］.广东畜牧兽医科技，2011，36(3):15 －17.

［9］ 汪以真，许梓荣，冯杰.甜菜碱对猪肉品质的影响及机理探讨［J］.中国农业科学，2000，33(1):94 －99.

［10］ 黄钧，蒋伟明，甘西，等.不同胆碱水平对斑点叉尾鮰幼鱼生产性能的影响［J］.广西畜牧兽医，2010，26(4):195－197.

［11］ 张幸开.维生素A对肉牛肌内脂肪沉积及ACC/HSL、PPARγ基因表达的影响［D］.硕士学位论文.杨凌:西北农林科技大学，2005.

［12］ 高艳霞，李同洲，李建国.甜菜碱在猪营养上的作用［J］.饲料博览，2002(10):39 －41.

［13］ 谭林，姜海龙.肌内脂肪含量与猪肉品质的相关性分析［J］.饲料博览，2010(12):11－13.

［14］ 王玉芳，王树人，陈海艳，等.同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究［J］.中国病理生理杂志，2001，17(3):268 －270.

［15］ PAMPLONA R，BARJA G.Mitochondrial oxidative stress，aging and caloric restriction:the protein and methionine connection［J］.Biochimica et Biophysica Acta，2006，1757(5/6):496 －508.