SHH在胃癌组织中的表达及临床意义

刘森林 谭卫泽 龙剑斌

(邵阳市中心医院 湖南邵阳 422000)

胃癌是我国常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率较高,胃癌的发生发展与遗传、肿瘤抑制基因失活、癌基因激活等多种基因因素有关[1],而最近国外有研究发现SHH可通过激活癌基因引发多种恶性肿瘤[2]。SHH的表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况等的相关性仍在研究阶段,本文以2011年1月至2011年12月期间本院收治的68例胃癌患者为研究对象,对SHH的表达与临床病理特征的关系进行了探讨和分析,现阐述如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2011年1月至2011年12月期间本院收治的胃癌患者68例,均经手术取病理活组织确诊为胃癌,所有患者在手术前均未接受过放、化疗,其中男35例,女33例;年龄在35～74岁之间,平均年龄为(54.32±12.56)岁;肿瘤病灶直径≤5cm者41例,＞5cm者27例;肿瘤位置为:胃底15例,胃体13例,胃窦40例;分化程度:高分化12例,中分化18例,低分化16例,未分化22例;根据国际抗癌联盟(UICC)制定的胃癌TNM分期标准,Ⅰ期10例,Ⅱ期18例,Ⅲ期23例,Ⅳ期17例;胃癌活组织经手术切除后用10%甲醛固定,再经梯度酒精脱水,经石蜡包埋后切成5μm的薄片贴在玻片上,用烤箱烘烤,温度调节为60℃,时间为2d,最后用SP法进行免疫组织化学染色。

1.2 检测方法

1.2.1 仪器及试剂的选择 检测试剂选用SP-9001二步法免疫组化试剂、浓缩型DAB试剂盒、Citrate柠檬酸盐缓冲液0.01mL、磷酸盐缓冲液0.01mL;实验抗体选用兔抗人SHH单克隆抗体,工作浓度为1∶50;仪器选用日本OLYMPUS公司提供的研究级显微镜;生物组织全自动脱水机由上海西域机电系统有限公司提供;石蜡包埋机和切片机均由德国LEICA公司提供。

1.2.2 免疫组织化学染色 免疫组织检测系统为SP法,选用热修复抗原修复方法,抗原修复液为1mmol/LEDTA,所有染色操作均严格按照使用说明书进行,最后进行DAB显色。

1.2.3 设计对照组 阳性对照选用已知SHH阳性的结肠癌组织,阴性对照用PBS代替一抗。

1.2.4 结果判断 SHH主要在细胞浆内表达,注意观察细胞的胞浆,如出现棕褐色颗粒则为SHH阳性细胞;在400倍显微镜镜下随机观察5个区域及至少500个上皮细胞,根据阳性细胞的比例对每张切片进行分级:0分为阴性,评分≥1分即为阳性;阳性率≤30%记为1分,阳性率30%～70%记为2分;阳性率≥70%即为3分。

1.3 统计学方法

应用SPSS 11.5软件对数据进行分析,组间比较采用χ2检验,相关性采用Spearman秩相关分析,P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 SHH表达与TNM分期的关系

68例胃癌组织标本中SHH阳性表达45例,阳性表达率为66.18%,TNM分期:Ⅰ期的SHH阳性表达率为10.00%、Ⅱ期为44.44%、Ⅲ期中为82.61%、Ⅳ期为94.12%,差异具有统计学意义,P＜0.05，见表1。

表1 SHH在胃癌组织中的表达及临床意义

2.2 SHH表达与肿瘤分化程度的关系

SHH表达在高分化胃癌组织中的阳性率为33.33%,中分化胃癌中的阳性率为44.44%,低分化的阳性率为56.25%,未分化的阳性率为68.75%,P＜0.05,差异具有统计学意义,见表1。

2.3 SHH表达与淋巴结转移及浸润深度的关系

有淋巴结转移的患者的SHH阳性率为82.86%,无淋巴结转移的患者的SHH阳性率为48.48%,差异具有统计学意义,P<0.05。浸润深度为T3+T4的阳性率为79.31%,浸润深度为T1+T2的阳性率为48.72%,P＜0.05,差异具有统计学意义，见表1。

3 讨论

人类的SHH基因位于7号染色体长臂的远端,可编码生成SHH前体蛋白,SHH前体蛋白可经自我水解和加工形成氨基末端分泌肽,此氨基末端信号肽具有分泌蛋白的功能,可与多种细胞进行相互作用,近年来发现SHH可通过激活癌基因而与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。在正常的胃组织中,SHH蛋白由胃壁细胞产生并分泌,而在胃癌患者的癌组织中,SHH的表达可能与胃癌的分期、分化、淋巴转移、浸润等相关[3]。SHH蛋白可参与SHH信号通路的转导,并可以调控肿瘤的浸润转移及细胞分化,从而影响肿瘤的分期;SHH蛋白在干细胞的分裂、分化、死亡等过程中起着重要作用,并且根据SHH表达的差异,影响正常胃黏膜上皮细胞的分化,使其停止在不同的分期,因此,SHH表达的差异可能是引发胃黏膜上皮发生癌变的重要原因[4]。本文研究中,SHH的表达阳性率随胃癌TNM分期而增强,与分化程度呈负相关,并淋巴结转移及浸润较深者呈密切相关,说明SHH的表达可提示胃癌的预后,阳性率越高,预后越差。

综上所述,SHH蛋白在大多数胃癌组织中表达升高,其表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况密切有关,可将其作为胃癌的诊断、疗效判断的重要指标。

[1] 陈小鱼,吴钊,王子卫.SHH在胃癌组织中的表达及临床意义[J].重庆医科大学学报,2010，35(3):372～374.

[2] Alakus H,Grass G,Hennecken J K,et al.Clinic pathological significance of MMP-2 and its specific inhibitor TIMP-2 in gastric cancer[J].Histol Histopathol,2008,23(8):917～923.

[3] 王军,贾育红,张志勇.Shh和Ptch在胃癌中的表达及其临床意义[J].免疫学杂志,2011,27(6):544～546.

[4] 冯亚光,魏正强.Shh、Gli1、Foxm1蛋白在胃癌中的表达及临床意义[J].广东医学,2011,32(19):2536～2538.