血清MFGE8与CA125、CEA对乳腺癌诊断价值探讨

李杰宝 张家衡

乳腺癌(breast cancer)早期诊断是提高患者治愈率和降低死亡率的关键。乳腺癌相关肿瘤标志物的研究已取得迅速发展，但寻找特异性强、灵敏度高的理想标志物仍是目前临床医学研究的重点。

乳脂肪球因子8(human milk fat globule EGF factor Ⅷ，MFGE8)最早在小鼠乳房上皮细胞内被发现[1]，随后该蛋白在不同的物种内独立地被鉴定出来，并给予了不同的命名[2-5]，如 BA-46(人 )、PAS-6/7 或 lactadherin(牛 )、P47(猪 )，另外，在小鼠的精子细胞上，该蛋白根据其结构功能也被命名为SED1(Secreted protein containing EGF repeats and Discoidin/F5/8 complement domains 1，SED1)[6]。目前，在乳腺癌患者的血清中发现，MFGE8水平明显高于乳腺良性肿瘤患者和正常人群水平。为此，笔者对乳腺癌患者血清MFGE8、CA125和CEA进行联合检测，探讨其在乳腺癌诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 乳腺癌患者62例(乳腺癌组)，均为女性，平均年龄57.6岁，均经病理确诊。其中浸润性导管癌48例，导管内癌12例，浸润性小叶癌2例。乳腺良性肿瘤患者49例(良性组)，均为女性，平均年龄53.4岁，亦经病理确诊。其中纤维腺瘤32例，乳腺腺病11例，浆细胞性乳腺炎6例。对照组105例，为笔者所在医院保健体检科同期女性健康体检者，平均年龄47.5岁，体检结果均未发现乳腺疾病及其他肿瘤。各组一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 MFGE8、CA125和CEA检测方法 晨起空腹采静脉血，迅速分离血清，-20 ℃保存。采用美国罗氏E170及配套试剂，以电化学方法检测CA125和CEA水平。方法简述如下，采用双抗夹心法，(1)生物素化的抗CA125单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗CA125单克隆抗体混匀，形成夹心复合物；(2)加了链霉亲和素包被和微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上；(3)反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。CEA检测方法同CA125。血清MFGE8水平检测采用亲和素-生物素ELISA法，检测试剂盒为武汉CUSABIO公司产品，酶标仪为Thermo multiskan MK3。方法简述如下，实验操作按试剂盒说明书进行，设标准孔(0 pg/ml，390 pg/ml，780 pg/ml，1560 pg/ml，3120 pg/ml，6250 pg/ml，12500 pg/ml，25000 pg/ml)和待测实验组及对照组孔，分别加样100 μl，37 ℃反应120 min；弃去液体，甩干，每孔加生物素标记抗体工作液100 μl，37 ℃反应60 min；洗板5次；依次每孔加底物90 μl，显色，加终止液50 μl；双波长比色测定OD值并制作标准曲线，查出相应的浓度。

1.3 临界值设定 CEA临界值为3.4 ng/ml，CA125临界值为25 U/ml，超过临界值判定为阳性。

1.4 统计学处理 采取SPSS 13.0软件行统计学分析，计量资料以()表示，组内行配对t检验，组间行成组t检验，计数资料采用检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组MFGE8、CA125和CEA血清水平比较 三项指标的检测结果分别在乳腺癌组与良性组比较，差异有统计学意义(P<0.01)；在乳腺癌组与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。结果见表1。

表1 三组间三项指标检测结果()

表1 三组间三项指标检测结果()

组别 MFGE8(pg/ml) CA125(U/ml) CEA(ng/ml)乳腺癌组(n=62) 6638.50±3529.30 34.58±31.26 4.39±3.25良性组(n=49) 199.35±102.36 8.69±7.26 1.30±0.90对照组(n=105) 201.58±99.35 8.99±7.43 1.40±0.70

2.2 各组MFGE8、CA125和CEA阳性率比较 乳腺癌组MFGE8、CA125和CEA的阳性率分别是65.4%、50.9%和30.3%，良性组分别为7.9%、5.5%、3.2%，对照组分别为1.2%、0.8%、0.3%，各组间两两比较，P均<0.05。2.3 MFGE8、CA125和CEA联合检测对乳腺癌诊断的价值及评价 三项标志物对乳腺癌的诊断中(表2)，以MFGE8的敏感性最高(65.4%)，特异性以CEA最高(97.6%)。若三种标志物任意两两联合，均提高检出敏感性，以MFGE8和CA125联合最高(75.3%)，而特异性略有降低：若三者联合，敏感性可以提高到85.3%，特异性降低不多(88.1%)，准确性最高(91.9%)。

表2 乳腺癌组MFGE8、CA125、CEA的敏感性、特异性和准确性

3 讨论

早期诊断、早期治疗是提高乳腺癌患者生存率的关键[7]。乳腺癌肿瘤标志物的检测可反映肿瘤的生物学特性，对指导治疗、辅助诊断、判断预后均有重要意义[8]。单一的肿瘤标志物可能灵敏度、准确性不够高，器官特异性不够强，联合检测可弥补单指标检测的不足。目前发现，与乳腺癌相关的标志物有CEA、CA125、CA153、P53、TPS、乳清蛋白等，这些标志物被广泛应用于乳腺癌的早期诊断和预后评估，但目前肿瘤的诊断还没有一种绝对特异的肿瘤标志物，大多标志物敏感性高者特异性较低，而特异性高者敏感性亦较低，不能较好的对肿瘤作出诊断和鉴别诊断。为弥补单一肿瘤标志物在临床检测中敏感性和特异性的不足，选择MFGE8、CEA和CA153联合检测来诊断乳腺癌。

MFGE8是一种乳汁脂肪小球表面的亲脂性糖蛋白，乳脂由分化的乳腺上皮细胞合成，然后经膜包被分泌入乳导管腔，包被于脂滴表面的这层膜称为乳脂肪球膜(MFGE)，主要由糖蛋白、蛋白、胆固醇、磷脂构成[9]。乳脂肪球因子8(MFGE8)又称lactadherin或SED1，是乳脂肪球膜(MFGE)主要的糖蛋白之一，由乳腺上皮细胞、巨噬细胞、不成熟树突状细胞分泌。尽管乳脂肪球因子最初发现于乳中，但它在乳中的具体作用还不是很清楚，不过在乳腺癌细胞中发现，MFGE8的分泌量显著提高[10]。Kamran等[11]研究发现，MFGE8通过辨认暴露于凋亡上皮细胞表面的丝氨酸与凋亡的上皮细胞结合，并促进吞噬细胞对凋亡细胞的清除，缺乏MFGE8的小鼠乳腺组织凋亡的细胞数增多，乳腺退化和脂肪细胞再生受阻，并随乳腺退化的进行，乳腺组织出现炎症。Newburg等[12]报道，MFGE8不仅能促进凋亡上皮细胞的清除，还可抑制轮状病毒，从而对乳腺起保护作用。MFGE8在乳腺癌细胞表面表达呈上调趋势，其抗体能抑制该蛋白的作用。MFGE8能通过循环入血，因此，在乳腺癌患者血清中能检测出较高水平，而在正常健康女性及乳腺良性肿瘤患者血清中，MFGE8水平低，两者比较有显著性差异[13]。本研究结果显示，通过比较，作为乳腺癌诊断相关标志物，MFGE8的敏感性最高(65.4%)，特异性以CEA最高(97.6%)。若三种标志物任意两两联合，均提高检出敏感性，以MFGE8和CA125联合最高(75.3%)，而特异性略有降低。若三者联合，敏感性可以提高到85.3%，特异性降低不多(88.1%)，准确性最高(91.9%)，所以认为，MFGE8可以和CA125、CEA一同作为诊断乳腺癌的指标，可作为乳腺癌联合检测的指标之一，对乳腺癌的早期诊断具有重要的意义。既提高了敏感性，又提高了诊断符合率，可以为临床诊断提供参考。考虑假阳性的影响，临床应结合影像学等检查手段，提高诊断率，减少误诊率。

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