氯沙坦及其代谢物在朝鲜族和汉族健康人体内的药代动力学

杨长青，杨 璐，郭 涛，夏东亚（. 中国药科大学药学院，江苏 南京 0009；. 沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 006；. 沈阳军区总医院药剂科，辽宁 沈阳 0840）

氯沙坦（losartan）是非肽类血管紧张素Ⅱ受体AT1拮抗药，具有与AT1受体亲和力强、高选择性阻滞受体AT1、只影响血管紧张素Ⅱ受体、无激动活性的特点，是常用的降压药，在体内被CYP2C9代谢成具有长效降压活性的E-3174[1]。本文首次进行了氯沙坦在中国朝鲜族和汉族健康人体以及不同性别间的药代动力学比较，为临床合理用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪，包括600型四元泵，717自动进样器，2475荧光检测器，Empower色谱工作站（美国waters公司）；YKH-2液体快速混合器（江西医疗器械厂）；KQ3200DE型超声波清洗器（昆明市超声仪器有限公司）；TDL-5型低速离心机（上海医疗器械三厂）；AEL-160电子分析天平（日本岛津公司）；PB-10型pH计。

1.2 药品和试剂

氯沙坦钾片（杭州默沙东制药有限公司，规格：0.05 g/片，批号09020）；氯沙坦对照品（中国药品生物制品检定所，纯度＞ 98.0%，批号100597-200501）；E-3174对照品（加拿大TRC公司，纯度＞ 99.0%，批号1-IHB-144-2）；缬沙坦对照品（北京赛科药业，纯度＞ 99.0%，批号0806028）；乙腈，甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯。

1.3 受试者选择

选择朝鲜族健康受试者10名，男女各5名，年龄（23±1）岁，体重（64.4±11.3） kg，身高（169.6±7.8）cm，体重指数（22.3±2.6）；汉族健康受试者10名，男女各5名，年龄（23±1）岁，体重（57.4±6.5） kg，身高（167.3±7.2） cm，体重指数（22.5±1.2）。受试者父母、祖父母、外祖父母三代均为同族婚配。体格检查示肝、肾功能正常，ECG检查、血、尿常规无异常，无既往慢性病史，无凝血障碍，无代谢异常史、药物过敏史、精神病史及药物依赖史，不嗜烟酒。整个试验期间不得服用其他药物。所有项目正常者方可入选，并签署知情同意书。试验方案经沈阳军区总医院医学伦理委员会批准。

1.4 给药方法及样品采集

健康受试者于试验前1日19:00开始禁食，试验当日7:00空腹口服单剂量氯沙坦钾片50 mg，用200 mL温开水送服，服药2 h后方可饮水，4 h后进食统一的标准饮食。服药后受试者避免剧烈运动。于服药前（0 h）和服药后0.33、0.66、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12、24 h由前臂静脉取血4 mL置肝素抗凝的离心管中，取静置离心后的血浆样品，冷冻保存备用。

1.5 血药浓度测定

1.5.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm, 5 μm）；流动相：0.02 mol·L-1磷酸二氢钠缓冲液（用磷酸调pH=2.35）-乙腈（57∶43）；流速：0.5 mL·min-1；柱温：室温；荧光检测激发波长：250 nm，发射波长：370 nm；进样量：20 μL。

1.5.2 血浆样品处理 取血浆0.5 mL，分别加入甲醇100 mL，内标溶液（40 ng·mL-1缬沙坦溶液）50 mL，6%甲酸溶液100 mL，涡旋混匀30 s；加乙醚5 mL，涡旋混匀5 min，4000 r·min-1离心10 min，分取上层有机相于另一试管中，于40 ℃氮气流下吹干，残留物加入流动相100 mL溶解，取20 mL进行HPLC分析[2]。

1.6 数据处理

采用DAS2.0软件进行血药浓度数据处理，AUC0-24用梯形法计算。Cmax，tmax用实测值。采用SPSS13.0软件进行统计学分析，比较不同性别受试者的药动学参数，其中tmax、t1/2采用非参数秩和检验。

2 结果

2.1 色谱行为

在所建立的色谱条件下，氯沙坦、E-3174、内标与血浆组分分离良好，保留时间分别为12.1、20.3、28.2 min。典型色谱图见图1。

图1 典型的高效液相色谱图A – 空白血浆；B – 空白血浆＋对照品；C – 汉族受试者服用50 mg氯沙坦后血浆；D – 朝鲜族受试者服用50 mg氯沙坦后血浆；1 – 氯沙坦；2 – E-3174；3 – 缬沙坦（内标）Fig 1 HPLC chromatogramsA – blank plasma; B – blank plasma spiked with losartan, E-3174 and internal standard (IS, valsartan); C – plasma obtained from a Han volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; D – plasma obtained from a Korean volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; 1 –losartan; 2 – E-3174; 3 – valsartan(IS)

2.2 方法学评价

氯沙坦和E-3174标准曲线的线性范围分别为10～ 1000 ng·mL-1和5 ～ 1000 ng·mL-1，r = 0.998 6 和r =0.998 1，定量下限分别为10 ng·mL-1和5 ng·mL-1；氯沙坦和E-3174的方法回收率分别为（101.9±8.0）%和（106.4±5.2）%，提取回收率分别为（69.8±0.9）%和（68.7±1.8）%，日内、日间精密度＜ 8.3%；血浆样品在室温放置12 h、冻融3次以及– 20 ℃保存30 d的条件下稳定性试验结果偏移在±5.0%内，均满足生物样品分析方法的要求。测定血浆样品时，于每个分析批内随行测定低、中、高3种浓度的QC样品，结果RSD值均小于15%，符合生物样品测定的要求。

2.3 安全性评价

20名健康受试者均未发生明显不良反应，说明志愿者在试验期间单剂量口服氯沙坦钾片耐受良好。

2.4 血药浓度与药动学参数

10名朝鲜族和10名汉族受试者口服单剂量氯沙坦钾片50 mg后，氯沙坦的平均血药浓度-时间曲线见图2，E-3174的平均血药浓度-时间曲线见图3。药动学参数见表1。

图2 口服氯沙坦钾片50 mg后氯沙坦的平均药-时曲线图Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of losartan after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

图3 口服氯沙坦钾片50 mg后E-3174的平均药-时曲线图Fig 3 Mean plasma concentration-time curves of E-3174 after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

表1 20名健康受试者口服50 mg氯沙坦钾片后主要药动学参数. n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

表1 20名健康受试者口服50 mg氯沙坦钾片后主要药动学参数. n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

注：与朝鲜族比较，*P ＜ 0.05Note: compared with Korean volunteers, *P ＜ 0.05

参数 氯沙坦 E-3174朝鲜族 汉族 朝鲜族 汉族AUC0-∞/ng·h·mL-1 752.0±331.0 523.0±184.0*2 608.0±766.0 1 960.0±182.0 t1/2/h 1.5±0.4 0.8±0.4* 3.1±0.7 4.7±1.1*tmax/h 0.9±0.4 1.3±1.1 2.4±0.8 3.6±1.7 CL/L·h-1 79.0±38.2 106.5±36.3 20.6±5.5 25.7±2.5 Vd/L 165.0±91.7 115.0±43.4 87.6±14.8 170.0±30.5*Cmax/ng·mL-1524.0±349.0 351.0±168.0 493.0±188.0 242.0±60.0*

经SPSS软件进行统计学分析，结果显示朝鲜族和汉族健康受试者口服单剂量氯沙坦钾片后，氯沙坦的药动学参数t1/2、AUC0-∞和E-3174的药动学参数Cmax、t1/2、Vd差异有显著性（P ＜ 0.05）。

2.5 不同性别受试者药动学参数的比较

20名朝鲜族和汉族不同性别健康受试者口服单剂量氯沙坦钾片50 mg的主要药动学参数见表2。经SPSS软件进行统计学分析，结果显示不同性别健康受试者口服单剂量氯沙坦钾片后，氯沙坦和E-3174的药动学参数差异均无统计学意义。

3 讨论

细胞色素P450是重要的参与药物Ⅰ相反应氧化、还原、水解的药物代谢酶，具有临床意义的药物反应变异和细胞色素P450酶的活性存在遗传多态性有关[3-5]。不同种族的人有着不同的生存环境、饮食习惯、营养状况等，造成基因遗传上的千差万别，因而种族间存在药物代谢差异的可能性非常大[6-7]。

口服单剂量氯沙坦钾片后，朝鲜族与汉族健康受试者氯沙坦的药动学参数t1/2、AUC0-∞和E-3174的药动学参数Cmax、t1/2、Vd差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。

表2 男性和女性健康受试者单剂量口服50 mg氯沙坦后的药动学参数比较. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

表2 男性和女性健康受试者单剂量口服50 mg氯沙坦后的药动学参数比较. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

E-3174朝鲜族 汉族 朝鲜族 汉族男性 女性 男性 女性 男性 女性 男性 女性t1/2/h 1.6±0.5 1.3±0.3 0.9±0.7 0.8±0.2 2.9±0.4 3.3±0.9 4.8±1.2 3.8±0.8 tmax/h 1.1±0.4 0.7±0.3 1.7±1.5 0.9±0.2 2.9±0.5 1.9±0.7 3.8±1.6 2.2±0.4 Cmax/ng·mL-1 307.0±150.0 794.0±344.0 338.0±216.0 382.0±156.0 363.0±36.0 622.0±191.0 206.0±29.0 366.0±85.0 CL/L·h-1 97.7±41.4 57.7±20.6 122.0±47.5 100.0±26.2 23.0±5.3 18.1±5.1 25.7±2.9 25.9±4.1 Vd/L 213.0±97.6 105.0±33.6 123.0±48.8 112.0±47.9 93.2±10.9 81.9±17.1 174.0±23.7 143.0±36.8 AUC0-∞/ng·h·mL-1 314.0±237.0 955.0±342.0 482.0±262.0 522.0±125.0 2 257.0±474.0 2 958.0±886.0 1 966.0±213.0 1 973.0±337.0氯沙坦参数

在药物吸收方面，原型药的Cmax与吸收的关系密切，朝鲜族人体内氯沙坦的Cmax是汉族人的1.5倍，表明朝鲜族和汉族人对药物的吸收存在差异。另外，在药物的代谢方面，氯沙坦在朝鲜族人中t1/2为1.4 h，汉族人为0.8 h，前者是后者的1.75倍，表明汉族人对药物的代谢更快。CYP2C9的药物代谢多态性存在很明显的种族差异，可能是药物产生药动学差异的原因[8]。

不同性别间药动学参数的差异虽然不存在统计学意义，但从药动学参数的数值比较上来看，氯沙坦和E-3174的Cmax在女性体内均比在男性体内高，且男性的V/F均比女性大，这可能与男性体重、体液、肌肉量多于女性，从而影响了药物及其代谢物在受试者体内的分布及吸收有关。另外，男性氯沙坦的t1/2较女性的长，可能是因为氯沙坦除了经CYP2C9代谢，还经CYP3A4代谢[9-10]，CYP3A4具有种族差异和性别差异，女性体内CYP3A4活性高于男性，这可能导致氯沙坦在女性体内比在男性体内代谢得快[11]。