乳岩宁汤急性毒性实验研究

2012-11-22殷东风辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

陕西中医 2012年4期

关键词：舌草莪术药量

潘琳殷东风辽宁中医药大学附属医院（沈阳110032）

乳岩宁汤是在临床经验方的基础上研制而成，用于治疗乳腺癌，并具有显著疗效，但未经毒理实验检验。为给临床用药提供安全的实验依据下。我们对其进行了安全毒理学评价，为临床用药提供可靠的科学数据。

1 实验材料 1.1 实验药物乳岩宁汤由柴胡、黄芩、法半夏、太子参、炙甘草、莪术15g，生龙骨、生牡蛎、半枝莲、白花蛇舌草各15g组成。

1.2 实验动物昆明种小鼠50只，雌雄各半，4～6周龄，体重20±2g，一次性购自辽宁中医药大学实验动物中心，分笼饲养，颗粒饲料喂养，自由饮水。

1.3 主要器材灌胃器、烧杯、量筒、天平。

2 方法 2.1 乳岩宁方及其制备由柴胡、黄芩、法半夏、太子参、甘草、半枝莲、莪术、龙骨、牡蛎、白花蛇舌草等14味中药组成，一次性购于北京同仁堂药房，药液煎煮按照中药常规煎法进行，浓缩至终浓度为2.7g·mL－1，无菌实验阴性，4℃冰箱保存备用。

2.2 急性毒性实验 2.2.1 预实验：取昆明种小鼠10只，雌雄各半，体重20±2g，给药前禁食12h，以乳岩宁含生药3.57g／mL浓度按0.4mL／10g体重灌胃，给药2次，上午、下午各1次，中间间隔8h，给药后观察小鼠一般情况。见小鼠活动自如，进食、饮水正常，大便呈湿润颗粒状，10只小鼠72h内无一只死亡，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD50，故选择最大给药量实验。

2.2.2 正式实验：最大耐受量（MTD）测定：取昆明种小鼠40只，雌雄各半，体重20±2g，随机分为空白对照组、乳岩宁低、中、高剂量4组。4组小鼠在灌胃给药前均先禁食12h，均按0.4mL／10g体重灌胃，给药2次，上午、下午各1次，中间间隔8h，最后一次给药后2h结束禁食。空白对照组予等体积生理盐水，乳岩宁低、中、高剂量组分别按照142.8g／kg、285.3g／kg、428.2g／kg灌胃，连续观察1周。

2.3 观察指标 2.3.1 每天观察并记录各组小鼠的体重、皮肤毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、中枢神经系统、四肢活动等及其中毒和死亡情况。

2.3.2 于用药后24、48、72h、第7天分别检测小鼠血常规、肝肾功。

2.3.3 实验结束时，脱颈处死小鼠，取心、肝、脾、肺、肾标本固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光镜观察药物对上述各脏器的影响。

2.4 统计学方法采用SPSS15.0软件，单因素方差分析（ANOVA），数据以平均值±标准差（±s）表示，以P＜0.05为显著性差异的标准。

3 结果 3.1 给药后实验组小鼠饮食正常体重增加，活动自如，皮毛光滑，大小便正常，无异常分泌物，无任何不良反应，至实验结束无小鼠死亡。实验前各组小鼠体重比较无明显差异，实验后各组体重比较无统计学差异（P＞0.05），如表1。

3.2 血常规及肝肾功的变化情况血液指标见表2。

3.3 大体病理形态学观察经大体解剖和病理检查，主要脏器无异常。

表1 各实验组小鼠体重情况

讨论乳岩宁汤是由《伤寒论》的柴胡加龙骨牡蛎汤加减而来，主要由柴胡、黄芩、法半夏、太子参、炙甘草、生龙骨、生牡蛎、半枝莲、莪术、白花蛇舌草等14味中药组成，其以小柴胡汤［1］为主方和解少阳、调畅气机，加入龙骨、牡蛎镇定安神，辅以山慈菇、莪术、白花蛇舌草、浙贝母等解毒化瘀，软坚散结。研究表明方中人参的有效活性成分（人参皂苷Rg3）、黄芩甙、莪术油等［2－3］均有抑制肿瘤细胞增殖与浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡等多重作用。乳岩宁汤是临床治疗乳腺癌的经验方，临床上未发现任何明显毒性反应，故进行本动物实验以更好的指导临床。因其毒性较小，在预实验时给昆明种小鼠灌胃无法测出其半数致死量（LD50），故改做小鼠最大给药量实验。

乳岩宁汤临床常用生药口服剂量为2.77g／（kg·d），（按照成人体重60kg计算），受药物浓度和给药体积的影响，本实验设定小鼠的最大给药量为428.2g生药／（kg·d），即可供灌胃的最大浓度3.57g／mL，小鼠灌胃可承受的最大体积（0.8mL／20g体重），1d2次灌胃给药，根据公式计算约为临床患者拟用剂量的154.6倍（＞100倍）。据文献［4］，按体重计算，小鼠ld最大给药量相当于成人临床日用量的100倍以上则较为安全，可以提供临床研究试用。本实验结果显示，给予小鼠最大给药量后未见任何中毒症状及死亡现象，给药后实验组小鼠饮食正常，体重增加，活动自如，皮毛光滑，大小便正常，说明该药无明显毒性，临床应用是安全可靠的。