碱性成纤维细胞生长因子在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

田志宏，黄 博，冯变喜

(山西省人民医院，山西 太原 030001)

胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)是一种非定向分化的间质干细胞肿瘤。目前公认的GIST的定义是:遗传学上存在频发c-kit基因突变，免疫组化表达CD117，细胞形态可以是梭型或上皮样，两种细胞混合并呈束状交叉或弥漫性排列为特征的胃肠道间叶源性肿瘤，但必须除外胃肠道平滑肌肿瘤(瘤和肉瘤)、神经鞘瘤和神经纤维瘤。GIST可以发生于全胃肠道，也可发生于胃肠道外的网膜中。近年来对GIST生物学特性进行了更为广泛深入的研究，但对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，b-FGF)与GIST侵袭转移关系的研究较少。本文应用免疫组织化学方法研究b-FGF在GIST中的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

资料来源于2007年1月至2009年1月山西省人民医院普外科及病理科确诊的经手术切除的胃肠道肿瘤，且经免疫组化检测确诊为GIST的患者50例。其中男性19例，女性31例，年龄20～77岁，平均55.1岁。病程2 d～3年。

1.2 肿瘤的性质

参照Lewin等［1］提出的标准，将本组50例胃肠道间质细胞瘤分为良性间质瘤18例，潜在恶性间质瘤17例，恶性间质瘤15例。病灶位于上消化道33例，其中食管2例(1例良性，1例恶性)，胃27例(12例良性，8例潜在恶性，7例恶性)，十二指肠4例(3例良性，1例恶性);下消化道17例，其中小肠14例(2例良性，7例潜在恶性，5例恶性)，结肠3例(2例潜在恶性，1例恶性)。所有标本均常规制作切片，免疫组化染色。

1.3 主要试剂

兔抗人b-FGF多克隆抗体、SP-9001免疫组化染色试剂盒、兔抗人Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ-RAg)多克隆抗体、DAB试剂盒(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.4 免疫组化结果判定标准

b-FGF主要定位在胞浆，含有棕黄或棕褐色颗粒的肿瘤细胞计为阳性细胞。b-FGF的表达强度根据阳性物质的着色深浅及面积判断。评分标准按Shimizu方法。对每张切片阳性细胞的阳性强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别记0、1、2、3分，着色阳性面积按无着色、着色 ＜1/3、1/3～2/3、＞2/3 分别记0、1、2、3分，然后根据两项记分之和判断其结果:≥3分为阳性(每张切片选择代表性的区域，在100倍视野下计数，共计5个视野，取其平均值)。

1.5 组织微血管密度阳性结果判定

凡是肿瘤组织中与邻近微血管和肿瘤细胞分界清楚，并被染成棕黄色或棕褐色的内皮细胞或内皮细胞簇团，均认为是新生的肿瘤血管，在高倍镜(200倍)视野下进行计数，3个高倍镜视野血管的均数即为新生血管数。

1.6 统计学方法

所有数据均应用SPSS.10.0统计软件进行分析。MVD值和肿瘤大小在b-FGF表达不同的组间比较差异采用单因素方差分析和t检验。b-FGF蛋白表达水平的组间差异比较采用χ2检验。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 b-FGF表达与肿瘤组织MVD的关系

b-FGF主要定位在胞浆，细胞胞浆被棕黄或棕褐色颗粒着色。50例GIST中b-FGF表达阳性者36例(72.0%)，MVD 为28.61±6.64;b-FGF 表达阴性者14 例(28.0%)，MVD 为18.07±6.03。b-FGF 表达阳性的肿瘤组织中MVD显著高于表达阴性的MVD(P＜0.05)。

2.2 b-FGF表达与肿瘤大小的关系

36例 b-FGF表达阳性者肿瘤直径为(5.01±1.98)cm，14例 b-FGF表达阴性者肿瘤直径为(3.57±1.27)cm，b-FGF表达阳性的肿瘤直径显著高于表达阴性者(P＜0.05)。

2.3 b-FGF表达和肿瘤临床病理特征的关系(见表1)

表1 b-FGF的表达和间质瘤临床病理特征的关系Table 1 Relation between b-FGF Expression and GIST Clinical Pathologic Characteristic

表1结果显示，b-FGF的表达与年龄、性别等无关(均P＞0.05)，但b-FGF表达在有无核分裂、肿瘤不同部位、间质瘤的恶性潜力中差异有统计学意义(均 P ＜0.05)。

3 讨论

GIST是一组独立起源于胃肠道间质干细胞的肿瘤，实质上由未分化或多潜能的梭形或上皮样细胞组成，属于消化道间叶源性肿瘤［2］。判断GIST良、恶性尚无统一标准，但一致认为肿瘤的大小及核分裂像是主要指标，细胞丰富程度、有无多形性或异型性、有无出血坏死以及有无浸润性生长是主要参考指标。目前，在GIST良、恶性诊断上仍需结合肿瘤的大小、组织学形态及生物学行为等综合考虑［3］。

b-FGF具有促分裂、促分化作用，能促进血管生成，在肿瘤的发生、发展和转移过程中起着重要作用［4］。

MVD的检测是衡量微血管形成的客观指标。肿瘤MVD是反映恶性肿瘤生物学行为的重要参数。肿瘤的血管形成能力通常用MVD来表示，它是决定肿瘤大小、转移、复发和预后的重要因素，作为量化血管形成程度的MVD与肿瘤侵袭性、转移及预后密切相关。

本研究首先检测了b-FGF在GIST组织中的不同表达与MVD的关系，发现b-FGF表达阳性的组织中MVD显著高于表达阴性者的MVD(P＜0.05)。有研究表明b-FGF可以刺激内皮细胞分泌几种蛋白酶和蛋白酶原活化因子，从而导致血管基底膜的降解，细胞得以侵入周围基质，迁移、增殖，最终分化而形成一个新的、含有一个空腔的血管。肿瘤的生长与转移依赖于肿瘤微血管的形成。本研究结果提示，b-FGF能促进GIST的微血管的生长，可能与GIST的演变有关。

与其他肿瘤不同的是，肿瘤体积大小是判断GIST良恶性倾向的重要指标。一般认为，胃间质瘤直径大于5 cm，小肠间质瘤大于4 cm即达到潜在恶性标准。本研究中发现，b-FGF表达阳性的肿瘤直径(5.01±1.98)cm明显大于表达阴性者的肿瘤直径(3.57±1.27)cm(P ＜0.05)。有文献报道，b-FGF 可通过自分泌和旁分泌作用促进肿瘤细胞增殖，起到分裂原的作用［5］，本研究结果也证实了b-FGF对肿瘤的发生、发展的重要作用。

Emory等［6］总结了1 004例 GIST，发现其预后与发生部位有关，肿瘤大小、核分裂像数目亦与部位有关。从食管到结肠、直肠，核分裂像数目有逐渐增高的趋势。分组研究表明，局限在食管和胃的GIST预后较好。发生于小肠GIST预后差。本研究运用免疫组化的方法检测了b-FGF在不同临床病理特征GIST中的表达发现:b-FGF的表达与患者的年龄、性别等无关(均P＞0.05)，但与发生部位、有无核分裂、间质瘤恶性潜力(良性、潜在恶性和恶性)等有关(均P＜0.05)。本研究表明，发生在下消化道、有核分裂、恶性倾向的GIST中b-FGF的阳性表达率显著高于发生在上消化道、无核分裂、良性倾向的 GIST。Rogeli等［7］将b-FGF cDNA转染入NIH3T3细胞后，转染细胞表现出高饱和生长密度，形态异常等转化特性，被转染细胞可在同系动物体内很快形成肿瘤，说明b-FGF参与细胞恶性转化。近年来，有研究表明GIST预后差的因素依次为肿瘤＞5 cm、分裂像＞5/50HPF、高细胞密度、缺乏丝团样纤维、显著核多形性、黏膜浸润、肿瘤坏死，其中肿瘤的大小和核分裂像是关系到肿瘤良恶性和患者预后、生存的最重要因素。本研究与文献报道一致［8］，b-FGF的表达与恶性倾向的GIST病理特征相关，提示b-FGF可作为判断GIST预后及疗效的指标。

目前手术仍然是 GIST的主要治疗方式，但约50%的患者术后5年复发或转移［8］，而GIST对放疗和化疗近乎绝对的耐受，所以GIST的分子靶向治疗成为近年研究的热点。甲磺酸伊马替尼(即格列卫)是一种高选择性的酪氨酸激酶受体小分子抑制剂，其作用的靶点包括KIT和PDGFRα(酪氨酸激酶)等受体，能选择性地阻断受体的活化，抑制肿瘤细胞无序增殖和诱导细胞调亡。格列卫昂贵的治疗价格使一部分病人放弃了术后治疗，同时术后是否需使用药物治疗也是临床医师面临的选择。准确估计预后仍然是临床医师的主要难题，寻找切实有效的GIST预后指标仍需进行深入的研究。

b-FGF在GIST的生长、侵袭和血管生成中发挥着重要作用，有望成为GIST治疗的新靶点。b-FGF的表达与恶性倾向的GIST部分病理特征相关，对其进行临床检测有助于判断GIST的生物学特征，从而指导GIST的临床综合治疗和预后评估。

［1］Lewin KJ，Riddell RH，Weinstein WM，et al.Gastrointestinal Pathology and Its Clinicalimplications［M］.NewYork:Lgaku-Shoin，1992.

［2］Schubert ML，Moghimi R.Gastrointestinal Sromal Tumor(GIST)［J］.Curr Treat Options Gastroenterol，2006，9(2):181-188.

［3］郭立新，杨光华.胃肠道间质瘤研究进展［J］.中国肿瘤临床，2003，30(8):603-607.

［4］Hughes SE，Hall PA.Overview of the Fibroblast Growth Factor and Receptor Families:Complexity，Functional Diversity，and Implications for Future Cardiovascular Research［J］.Cardiovascular Res，1993，27(5):1199-1203.

［5］秦艳芳，向春俭，杨红宇.碱性成纤维细胞生长因子与肿瘤［J］.国外医学:肿瘤学分册，2001，28(4):256-259.

［6］Emory TS，Sobin LH，Lukes L，et al.Prognosisofgastroin-Testinalsmooth-Muscle(Stromal)Tumors:Dependence on Anatmic Site［J］.Am J Surg Pathol，1999，23(1):82-87.

［7］Rogeli T，Chang C，Li A，et al.Basic Fibroblast Growth Factor Fusedtoasignal Peptidetrans Forms Cells［J］.Nature，1988，331(6153):173-175.

［8］Streutker CJ，Huizinga JD，Driman DK，et al.Interstitial Cells of Cajal in Health and Disease.PartⅡ:ICC and Gastrointestinal Stromal Tumors［J］.Histopathology，2007，50(2):190-202.