两种不同方法测定注射用阿魏酸钠的含量

2012-11-21冯建忠惠慧

中国现代药物应用 2012年15期

冯建忠惠慧

两种不同方法测定注射用阿魏酸钠的含量

冯建忠惠慧

目的比较注射用阿魏酸钠含量的两种不同测定方法。方法分别采用紫外分光光度(UV)法及高效液相色谱(HPLC)测定。UV法采用纯化水为溶剂，310 nm为测定波长;HPLC法采用Waters XTerra RP18(4.6 mm ×250 mm，5 μm) 色谱柱，流动相为甲醇-水(62∶38)，流速为1 ml/min，检测波长为310 nm。结果 UV法中阿魏酸钠在6.216～14.504 μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系(r=0.999 9)，平均回收率99.71%，相对标准偏差(RSD)为0.92%。HPLC法中阿魏酸钠在44.08～220.4 μg/min范围内线性关系良好(r=0.9997)，平均回收率98.79%，相对标准偏差(RSD)为1.61%。结论两种方法含量测定结果无明显差异，均可作为注射用阿魏酸钠含量测定的方法，可将UV法用于制剂半成品含量控制，而将HPLC法用于成品的含量控制，可缩短检验时间，保证制剂质量。

注射用阿魏酸钠;紫外分光光度法;高效液相色谱法;含量测定

阿魏酸钠是阿魏酸(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸)的钠盐，阿魏酸普遍存在于当归、川芎等中药材中，是一种血管内皮保护剂，能拮抗内皮素引起的血管收缩及升压、减轻血管内皮损伤、松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集。临床主要用于动脉粥样硬化、冠心病、脑血管病、糖尿病性血管病变等血管性病症的辅助治疗［1-2］，亦可用于偏头疼、血管性头痛的治疗。目前，在2010版药典中采用高氯酸滴定法进行注射用阿魏酸钠含量测定［3］，笔者采用紫外分光光度法及高效液相色谱法，测定其含量，两法可较好地排除干扰，获得满意的结果。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪(包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长紫外检测器、Empower操作平台);UV-2401PC(日本岛津公司);FA1004B型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。注射用阿魏酸钠(规格：0.3 g，批号：0911207，山东罗欣药业股份有限公司);阿魏酸钠对照品(中国药品生物制品检定所，批号：773-9405，纯度为99.9%);甲醇(色谱纯);水为纯化水;其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 紫外-可见分光光度法测定

1.2.1.1 贮备液的制备院精密称取阿魏酸钠25 mg，置于50 ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，配制成518 μg/ml的贮备液。

1.2.1.2 测定波长的选择取贮备液适量，用纯化水配制成浓度为10 μg/ml的溶液，用纯化水作空白对照，在200～400 nm波长范围内进行扫描。结果显示，阿魏酸钠在310 nm波长处有最大吸收，故选择310 nm为测定波长［4］。

1.2.1.3 线性关系考察精密量取含阿魏酸钠518 μg/ml的贮备液 300、400、500、600、700 μl，分别置于 25 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为6.216、8.288、10.360、12.432、14.504 μg/ml的标准溶液，将配制好的标准溶液以纯化水为空白对照，在310 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程：C=19.432A-0.0399(r=0.9999)。结果显示，阿魏酸钠浓度在6.216～14.504 μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系。

1.2.1.4 回收率试验精密称取阿魏酸钠12 mg，以纯化水溶解配制成浓度为 9.624、12.030、14.436 μg/ml的溶液，每个浓度各配制3份，在310 nm处分别测定吸光度A值，代入标准曲线方程，计算回收率，平均回收率为99.71%、RSD为0.92%。

1.2.1.5 精密度试验取2.3项下高、中、低三个浓度的溶液3组，每组3份，每日连续测定5次，连续测定3 d，在310nm处分别测定吸光度A值，代入标准曲线方程，计算含量，日内，日间平均RSD值分别为0.3%、0.43%。

2.1.6 稳定性试验取同一供试品溶液(批号0911207)，于制备后0、2、4、6、8、12 h，按含量测定方法操作分别测定其吸收度，RSD为1.05%，结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

1.2.2 高效液相色谱法测定

1.2.2.1 色谱条件色谱柱：XTerra RP18(250 mm×4.6 mm，5 μm); 流动相：甲醇-水(62∶38)，使用前 0.45 μm 的滤膜抽滤，超声脱气;流速为1.0 ml/min;检测波长310 nm，灵敏度 2.000 AUFS，柱温 30 ℃，进样量 20 μl。

1.2.2.2 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸钠对照品25 mg，置50 ml容量瓶中，用流动相定容到50 ml，摇匀，得含阿魏酸钠对照品504 μg/ml的储备液。

1.2.2.3 供试品溶液的制备精密称取注射用阿魏酸钠25 mg，置50 ml容量瓶中，用流动相定容到50 ml，摇匀，超声脱气10 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤，制成含量为518 μg/ml的测试样品溶液。

1.2.2.4 专属性试验分别取上述对照品和供试品溶液200 μl置于10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按“1.2.2.1”项色谱条件进样20 μl，记录色谱图。由图可见，在该色谱条件下，阿魏酸钠能达到基线分离，且峰形稳定，保留时间约4.52 min，塔板数大于3 000。同样稀释做空白对照试验，结果表明，辅料对测定阿魏酸钠含量无干扰。

1.2.2.5 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液100、150、200、250、300 μl，分别置于 10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为 5.04、7.56、10.08、12.60、15.12 μg/ml的溶液，分别进样20 μl，重复5次，以峰面积(A)对浓度(C，μg/ml)进行线性回归，得回归方程：A=62443C+33860(r=0.9997)。结果显示，阿魏酸钠浓度在44.08～220.4 μg/ml范围内线性关系良好。

1.2.2.6 回收率试验精密量取阿魏酸钠对照品储备液适量，用流动相稀释配制成浓度为 9.792、12.240、14.688 μg/ml的溶液，每个浓度各配制3份，在上述色谱条件下进行操作，分别进样20 μl，将峰面积代入标准曲线方程，以测得量与加入量比值计算回收率。平均回收率为98.79%，RSD为1.61%。

1.2.2.7 稳定性试验取2.5项下制备的浓度为10.08 μg/ml的溶液，放置 0、2、4、6、8、10 h 后，按上述色谱条件进样20 μl，连续进样6次，记录色谱图，按阿魏酸钠的回归方程计算，RSD为0.17%。