妇炎散的质量标准研究
2012-11-20李惠珍苏松柏
李惠珍 苏松柏
贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001
妇炎散的质量标准研究
李惠珍 苏松柏
贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001
目的:建立妇炎散的质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别黄柏、姜黄、苍术等药材，采用高效液相色谱法测定妇炎散中盐酸小檗碱的含量。结果:该方法薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰，盐酸小檗碱进样量在0.1015～1.015μg范围内呈良好线性关系(r=0.9999)，平均加样回收率为97.97%。结论:所建标准可用于妇炎散的质量控制。
妇炎散;质量标准
盆腔炎是威胁女性健康的十大疾病之一，新药物的开发研制和新治疗途径的探索将为该症的治疗提供更为有效的手段。由于目前对盆腔炎的发病机理仍缺乏足够的了解，每年有成千上万的患者因得不到及时彻底的治疗而留下一系列后遗症。中药及中药成分对盆腔炎的治疗具有一定的优势，通过标本兼治可达到抗菌消炎，提高机体免疫力及改善组织微循环的教果，具有广阔的发展前景。“妇炎散”为大黄、当归、丹参、黄柏等二十三味中药组成的复方制剂;通过多年来的临床应用、对制剂的留样观察和质量控制，结果表明我院自制的“妇炎散”疗效明确，性质稳定，发挥了我院中医中药的特色，传承了祖国医学精髓，取得较好的社会效益和经济效益。本文主要研究妇炎散的薄层色谱定性鉴别和含量测定研究，为临床提供安全、有效、可控的药品提供可靠保障。
1 仪器和试药
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪，AB－265型电子天平(德国Mettler－Toledo Group公司);超声清洗器(上海冠特超声仪器有限公司，型号:SG1200H);恒温电热烘箱(上海跃进医疗器械厂，型号:GZX－DH－3035);电热恒温水浴锅(上海科析试验仪器厂，型号:DZKW－4)。
1.2 试药
盐酸小檗碱对照品(批号:110713－－200910)，黄柏对照药材(120937－201007)，姜黄对照药材(110823－201004)，苍术对照药材(0932－9803)，从中国药品生物制品检定所购进，乙腈、甲醇均为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为重蒸馏水。黄柏、姜黄等药材均购于贵州济仁堂药业有限公司。
2 方法与结果
2.1 薄层
2.1.1 黄柏的薄层鉴别
取三批妇炎散粉末各2g，加甲醇溶液20mL，于水浴锅上回流半小时，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材0.1g，加甲醇溶液10mL，于水浴锅上回流半小时，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为对照药材溶液，同法制成黄柏的阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一以0.5%CMC－Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(10∶6∶1:1)为展开剂，展开，取出，晾干。在紫外灯(365 nm)下检视。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而且阴性对照无干扰。薄层色谱图见图1。
图1 黄柏的薄层色谱图
2.2 姜黄的薄层鉴别
取三批妇炎散粉末各4g，加无水乙醇100 mL，超声15min，滤过，蒸干，加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液，另取姜黄对照药材0.2g，加无水乙醇20mL，超声15min，滤过，蒸干，加2 mL甲醇溶解，作为对照药材溶液，同法制成姜黄的阴性对照溶液，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一以0.5%CMC－Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—甲酸(96∶4∶0.7)为展开剂，展开，取出，晾干。在紫外灯(365 nm)下检视。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而且阴性对照无干扰。薄层色谱图见图2。
图2 姜黄的薄层色谱图
2.3 苍术的薄层鉴别
取三批妇炎散粉末各4g，加入正己烷20 mL，超声提取15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为样品供试品溶液。另取苍术对照药材2 g，按样品供试液的制备方法制备对照药材溶液。同法制成苍术的阴性对照溶液。照药典附录ⅥB薄层色谱法试验。吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一以0.5%CMC－Na为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚－氯仿－乙酸乙酯(20∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%对二甲基酚的10%硫酸乙醇试液，在105℃下烘至显色。经三批样品实验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而且阴性对照无干扰。薄层色谱图见图3。
图3 黄柏的薄层色谱图
2.4 栀子苷的含量测定
2.4.1 盐酸小檗碱测定色谱条件色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm，5μm);柱温:30℃;流速1 mL/min;流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(50:50)(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1g);检测波长为265 nm;进样量:5μL。理论塔板数按盐酸小檗碱计算应不低于4000。对照品、样品、阴性色谱图见图4。
图4 妇炎散HPLC图
2.4.2 对照品溶液的制备及线性关系考察
精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配制成浓度分别为203μg/m l的对照品溶液。将对照品溶液液制成一系列不同浓度的对照品溶液，按上述两色谱条件进样分析，以峰面积A对进样量C(mg)进行回归分析，得栀子苷回归方程:A=2989.1C，r=0.9999。结果表明，栀子苷在0.1015－1.015μg范围内线性关系良好。
2.4.3 供试品及阴性对照溶液的制备
精密称取妇炎散剂2 g，置于100 mL容量瓶中，加流动相80 mL，超声40分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品供盐酸小檗碱含量测定;精密称取缺黄柏的妇炎散剂2 g，按供试品的制备方法制备，作为阴性对照溶液。
2.4.4 精密度的测定
精密吸取浓度0.1015 mg·mL－1的盐酸小檗碱对照品溶液10μL，按上述两色谱条件重复进样6次，测得其峰面积，盐酸小檗碱峰面积RSD值为0.09%，结果表明仪器精密度良好。
2.4.5 重复性的考察
取6份妇炎散，每份精密称取4g，按2.3供试品的制备方法，平行制备六份，按上述盐酸小檗碱的色谱条件测定其峰面积，盐酸小檗碱的含量为0.26%g·g－1，RSD为0.82%，结果表明重复性良好。
2.4.6 稳定性的考察
精密吸取供试品溶液5μL在0、2、4、8、12h进样，测得其峰面积，盐酸小檗碱峰面积RSD值为0.41%，结果表明供试品在12h内稳定性良好。
2.4.7 加样回收率测定
取已知含量妇炎散6份，精密称取1 g，置于100 mL容量瓶中，分别添加3.045 mg的盐酸小檗碱对照品，加流动相80 mL，超声40分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，测定盐酸小檗碱含量，结果见表1。
表1 盐酸小檗碱加样回收率试验结果
2.4.8 样品的测定
精密称取三批妇炎散，按供试品的制备方法制备，按上述的色谱条件，测定的含量，结果见表2。
表2 栀龙散中栀子苷含量
3 讨论
本文制剂妇炎散主要用于治疗盆腔炎的治疗，由于处方中药味较多，其中分别对黄檗、丹参、大黄、姜黄、白芷和泽兰等药材进行了薄层鉴别研究，但因干扰较大，未能列入本文的正文中，含量测定选用了黄檗中有效成分盐酸小檗碱为指标成分，分离效果好，且能很好的反映本方的均一性和稳定性。
Study of Quality Standards of Fu Yan San
LI Hui－zhen SU Song－bai
The First Affiliated Hospital of GuiYang college of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，China
Objective:To establish the quality standard of Fu Yan San．Methods:The thin layer chromatography(TLC)was used to identify Cork，Turmeric，Atractylodes herbs，determine the content of of berberine hydrochloride in Fu Yan San By high performance liquid chromatography method(HPLC)．Results:the methods TLC spots is clear and the negative control without interference，Berberine hydrochloride injection volume in the range of0．1015～1.015μg was good linear relationship(r=0.9999)，average recovery was 97.97%．Conclusion:Established standards can be used for quality control of Fu Yan San．
Fu Yan San;Quality standard;Berberine Hydrochloride;Turmeric;Atractylodes
R284.1
A
1007－8517(2012)15－0050－03
贵阳中医学院院内课题贵中医科院内［2010］29号:医院制剂“妇炎散”质量标准提升研究。
李惠珍，女，学士，副主任药师，主要从事中药质量控制与新药研究。E－mail:442126064@qq．com。
2012.05.23)
