RP-HPLC同时检测夏天无胶囊2种成分的含量

2012-11-02苏兰宜陈小兰

亚太传统医药 2012年12期

苏兰宜，陈小兰

（江西省医药学校，江西南昌 330020）

夏天无胶囊是依据《中国药典》2010年版一部夏天无片进行剂型改进研发的中药新药，由夏天无单味药材经乙醇提取加工制成，具有活血通络、行气止痛的功效，用于治疗瘀血阻络、气行不畅所致的中风，半身不遂，跌扑损伤，肿胀麻木，风湿性关节炎，坐骨神经痛[1]。夏天无中主要含有原阿片碱和延胡索乙素等生物碱类成分，夏天无胶囊质量标准中没有对中药成分的含量控制[2]。单独[3]或同时测定[4－5]原阿片碱与延胡索乙素的报道已有，因此本文选择原阿片碱与延胡索乙素为质控指标，建立高效液相色谱法同时测定本品中两种成分的方法，为夏天无胶囊的质量控制提供参考。

1 仪器试药

Agilent 1200液相色谱仪（美国），包括：四元梯度泵、在线脱气机、柱温箱、G1314AVWD检测器；Sartorius BS124S电子分析天平；KQ-250VDB型双频数显超声机（昆山市超声仪器有限公司），PHS-3C精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）。夏天无胶囊（0.3g／粒，郑州韩都药业集团有限公司）。对照品：原阿片碱（批号：110853－200402），延胡索乙素（批号：110726－200409）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（色谱级），流动相用水为双蒸水（自制）；其余试剂均为分析纯。

2 方法结果

2.1 色谱条件

Venusil XBP-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（三乙胺调pH 至6.5，54∶46）；柱温为25℃；流速：1.0mL·min－1。检测波长：280nm[5]，进样品量为20μL。

2.2 混合对照品溶液配制

精密称取原阿片碱和延胡索乙素对照品适量，于棕色容量瓶中，加酸性甲醇配制成含109.25μg／mL原阿片碱、25.42μg／mL延胡索乙素混合标准品溶液母液。

2.3 供试品溶液制备

取夏天无胶囊20粒的内容物，研磨成细粉。取约0.3g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加酸性甲醇25mL，称定重量，超声提取1h。冷却至室温，再次称定，用酸性甲醇补足重量，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液制备

按夏天无胶囊处方比例和制备工艺分别制备不含夏天无的胶囊，并按供试品溶液制备方法制备夏天无胶囊的阴性对照溶液，按色谱条件测定，结果阴性对照样品对测定无干扰（见图1、图2、图3）。

图1 夏天无胶囊的阴性HPLC

图2 混合标准品溶液HPLC

图3 夏天无胶囊供试品溶液HPLC

分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定，采用外标法计算即得。

2.5 测定方法

2.6 线性关系考察

分别准确吸取混合标准品母液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL置1mL容量瓶中，酸性甲醇定容，摇匀，即得系列浓度的混合标准品溶液。分别吸取上述浓度标准品溶液20μL，注入色谱仪，记录色谱图。以峰面积（Y）对浓度（X，μg／mL）进行线性回归，得回归方程（见表1）。

表1 线性关系实验结果（n＝6）

2.7 精密度试验

精密吸取43.7μg／mL原阿片碱与10.17μg／mL延胡索乙素的混合标准品溶液20μL，重复进样6次，按色谱条件测定峰面积值。求得日内RSD值，原阿片碱为0.82%，延胡索乙素为1.15%，连续分析5d；求得日间RSD值，原阿片碱为1.28%，延胡索乙素为1.87%。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12h按上述色谱条件，进样20μL，测定峰面积。结果二者色谱峰面积无明显变化，RSD值原阿片碱为0.94%，延胡索乙素为1.13%，说明供试品溶液在12h内稳定。

2.9 重复性试验

精密称取同一批样品5份（批号：20120602），按“2.3”项下方法制备溶液，依法测定，计算原阿片碱与延胡索乙素的含量。结果其RSD值分别为：原阿片碱为0.68%，延胡索乙素RSD为1.42%。

2.10 加样回收率试验

取已知含量的供试品粉末6份，每份重约0.15g（含原阿片碱1.32mg／粒、延胡索乙素0.32mg／粒）混匀，精密称定，分别精密加入浓度为665.3μg／mL的原阿片碱、164.2μg／mL延胡索乙素混合标准品溶液1.0mL，按“2.3”项下制备溶液，按色谱条件测定，测定峰面积计算平均回收率，结果见表2。

2.11 样品含量测定

按“2.3”项下方法制备样品溶液，按色谱条件测定含量，结果见表3。

3 讨论

在供试品溶液的制备过程中，本实验比较了酸性甲醇，以不同比例的甲醇－水溶液，之后比较了回流法、超声提取的提取效果，结果以酸性甲醇为溶媒，超声提取1h，即可较好除去干扰杂质又可提取完全，效果最佳。

在流动相的选择上，本实验比较使用乙腈－三乙胺醋酸溶液、乙腈－水、乙腈－磷酸溶液、甲醇－水、甲醇－磷酸溶液等流动相系统，最终以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH至6.5）作为流动相系统等度洗脱可将待测物质与杂质达到基线分离，峰形较好，理论塔板数高，分离效果最好。实验中还发现柱温25℃比30℃的分离效果更好。